1. 基因工程复习
— 酶切连
问题
生物组 张金秋

2. 例 1 ：限制酶是一种核酸内切酶，可识别并切割 DNA 分子
上的特定的核苷酸序列。下图为四种限制酶 BamH
Ⅰ 、 EcoR Ⅰ 、 Hind Ⅲ 和 Bgl Ⅱ 的识别序列和切割位点：
其中哪两种限制酶所切割出来的 DNA 片段末端可以互补黏
合（D ）
A .BamH Ⅰ 、 EcoR Ⅰ
B .BamH Ⅰ 、 Hind Ⅲ
C .EcoR Ⅰ 、 Hind Ⅲ
D .BamH Ⅰ 、 Bgl Ⅱ

3. 启发
1. 请画出这 4 个 DNA 片段被相应限制酶切割后所形成的黏性
末端。
↓ ↓ ↓ ↓
-A AGCTT-
-G GATCC- -A GATCT-
-G AATTC- -TTCGA A-
-CCTAG G- -TCTAG A-
-CTTAA G- ⑤ ⑥
① ② ⑦ ⑧
③ ④
2. 这 8 个黏性末端中是由同一种限制酶切割而成的是？
-GGATCC-
-CCTAGG- ……
①②
3. 这 8 个黏性末端中在 DNA 连接酶作用下可以连接起来的是
？ -GGATCC- -GGATCT-
-CCTAGG- -CCTAGA- ……
①② ①⑧

4. 变式练习 :
下列平末端中
B
1. 属于同一种限制酶切割而成的是（ ）
2. 由 3 种限制酶切割而成的。
ABCD
3. 多选在 DNA 连接酶作用下可以连接起来的是（
）
T4DNA 连接酶
4. 具体用哪种 DNA 连接酶 ?
…ATC …AT CAT… GAT…
…TAG …TA GTA… CTA…
① ② ③ ④
A.①③ B.①④ C.②③ D.②④

5. 例 2 （ 1 、 2008 全国高考 2 、 类似 2009 江苏高考 ）
已知某种限制性核酸内切酶在一线性 DNA 分子上有 3 个酶
切位点，如图中箭头所指。
1 、如果该线性 DNA 分子在 3 个酶切位点上都被该酶切断。
现有多个上述线性 DNA 分子，若在每个 DNA 分子上至少有
1 个酶切位点被该酶切断，则从理论上讲，经该酶切后，这
些线性 DNA 分子最多能产生长度不同的 DNA 片段种类数是
（ ）
C
2 、完全酶切后产生（ B ）种 DNA ① abcd
片段？
②abcd
有 1 个酶切位点切 ③abcd
① ② ③
断 ①②abcd
②③abcd
①③abcd
a b c d
①②③abcd
有 2 个酶切位点切
断abcdabbccdabcbcd
A.3 B.4 C.9 D.12

6. 位点在 DNA 上定位，使其成为 DNA 分子中的物理参
照点。这项工作叫做 “限制酶图谱的构建 ”。假设有
以下一项实验：用限制酶 Hind Ⅲ ， BamH Ⅰ 和二者
的混合物分别降解一个 4kb （ 1kb 即 1 千个碱基对
）大小的线性 DNA 分子，降解产物分别进行凝胶电泳
，在电场的作用下，降解产物分开，如下图所示。 据
此分析，这两种限制酶在该 DNA 分子上的限制酶切位
点数目是以下哪一组？ （ ）
A
A ． HindⅢ 1 个， BamHⅠ 2 个 B ． HindⅢ 2 个，
BamHⅠ 3 个
C ． HindⅢ 2 个， BamHⅠ 1 个 D ． HindⅢ 和
BamHⅠ 各有 2 个
作业：请试着画出这两种酶在该 DNA 上的切割位点。

7. 2009 年广东高考
变式：现有一长度为 1000 碱基对（ bp ）的 DNA 分子，
用限制性核酸内切酶 EcoRⅠ 酶切后得到的 DNA 分子仍是
1000 bp ，用 KpnⅠ 单独酶切得到 400 bp 和 600bp 两种
长度的 DNA 分子，用 EcoRⅠ , KpnⅠ 同时酶切后得到
200bp 和 600bp 两种长度的 DNA 分子。该 DNA 分子的
酶切图谱正确的是（ ） D
EcoRⅠ KpnⅠ KpnⅠ EcoRⅠ KpnⅠ EcoRⅠ KpnⅠ
A． 600 200 200 B． 600 200
200
EcoRⅠ EcoRⅠ
200 200
200 KpnⅠ
C． D ．KpnⅠ
EcoRⅠ 400
400
KpnⅠ 600

8. 拓展练习 （ 2011 江苏高考）
用限制酶 EcoRV,MboⅠ 单独或联合切割同一种质粒，
得到的 DNA 片段长度如下图（ 1kb 即 1000 个碱基
对），请画出质粒上 EcoRV,MboⅠ 的切割位点。
MboⅠ MboⅠ
2.5kb EcoRV 14kb
质粒 MboⅠ 2.5kb 11.5kb
5.5kb
6kb
EcoRV 2.5kb 5.5kb 6kb
+MboⅠ
EcoRV

9. 例 3 ：基因工程中，需使用特定的限制酶切割目的基因
和质粒，便于重组和筛选。已知限制酶Ⅰ的识别序列和
切点是 --G↓GATCC-- ，限制酶Ⅱ的识别序列和切点是 --
↓GATC-- 。根据图示判断下列说法正确的是（
） D
A. 该质粒分子由四种碱基组成
B. 构建该表达载体的工具酶是限制酶和耐高温的 DNA
聚合酶
C. 本实验应采用 GeneⅡ 作为载体的标记基因
D. 质粒用限制酶Ⅰ切割，目的基因用限制酶Ⅱ切割

10. 练习：质粒是基因工程中最常用的运载体，它存在于许
多细菌体内。质粒上有标记基因如图所示，通过标记基
因可以推知外源基因（目的基因）是否转移成功。外源
基因插入的位置不同，细菌在培养基上的生长情况也不
同，下表是外源基因插入位置（插入点有 a 、 b 、
c ），请根据表中提供细菌的生长情况，推测①②③三
种重组后细菌的外源基因插入点，正确的一组是（
） A
细菌在含青霉素 细菌在含四环素
培养基上生长情 培养基上生长情
况 况
① 能生长 能生长
② 能生长 不能生长
③ 不能生长 能生长
A ．①是c ；②是 b ；③是 a
B ． ①是 a 和 b ；②是 a ；③是 b
C ．①是 a 和 b ；②是 b ；③是 a
D ． ①是 c ； ②是 a ；③是 b

11. 综合： 下图是利用基因工程技术生产人胰岛素的操作过程示意图，请据图
作答
(1) 能利用人的皮肤细胞来完成①过程？为什么？
不能。皮肤细胞中的胰岛素基因未表达（或未转
录），不能形成胰岛素 mRNA.
(2) 过程②必需的酶是 酶，过程③必需的酶是
酶。 逆转
解旋
录
(3) 在利用 AB 获得 C 的过程中，必须用
同一种限制性内切酶
切割 A 和 B ，
互补的黏性末端 DNA 连接酶
使它们产生 ，再加入
，才可形成 C 。
CaCl2