Transfer metode dari HPLC ke UPLC memerlukan validasi untuk memverifikasi kemampuan instrumen baru dalam melakukan metode analisis. Parameter kritis yang perlu diperhatikan meliputi resolusi peak, identitas peak, akurasi dan presisi kuantitatif, serta kemampuan menghasilkan hasil yang sama secara kuantitatif dan kualitatif meski menggunakan kolom dan instrumen berbeda. Proses transfer metode meliputi pengumpulan informasi metode lama, pemilihan kolom dan

1. TRANSFER METHOD
FROM HPLC TO UPLC

2. Pengertian
• Proses terdokumentasi yang
dirancang untuk
memverifikasi kemampuan
instrument dalam
melakukan metode analisis
tertentu yang berasal dari
instrument lain
Tujuan
• Mengetahui validasi yang
dilakukan sudah tepat
• Mengetahui kemampuan
instrument penerima dalam
melakukan metode analisis
• Menggambarkan kesiapan
instrument dalam
menerima suatu metode
analisis

3. Critical Parameter
1. Resolusi dari setiap analit
2. Peak homogeneity
3. Identifikasi peak yang sama
4. Kuantitatif akurasi dan presisi
5. Mendapatkan hasil analisa yang sama
– Secara kuantitatif maupun kualitatif
– Walaupun menggunakan instrument atau kolom
dengan tipe yang berbeda

4. Proses Transfer Metode
• Pengumpulan informasi metode existing dan
hasilnya
• Membandingkan instrument yang akan dipakai
• Memilih kolom berdasarkan chemistry dan
dimensinya
• Memilih kondisi yang dituju berdasarkan berbagai
pertimbangan
• Mengevaluasi hasil dari transfer metode
• Mengoptimalkan transer metode sesuai
kebutuhan

5. Yang harus diperhatikan
• Pemilihan kolom ketika merubah ukuran
partikel dan atau dimensi kolom
• L/dp ratio terjaga
• Fase gerak, kurva gradient dan konsentrasi
sampel terjaga

7. L/dp
Typical HPLC Column 4.6 x 150 mm, 5 μm
Column length (L) = 150 mm = 150,000 μm
dp = 5 μm
L = 150,000 = 30,000
dp 5
Separation Index Application Example Efficiency (N) L/dp
Easy Content Uniformity 5,000 15,000
Moderatelly
Challenging
Related Compound
Assay
12,000 30,000
Difficult Impurity Profiling 20,000 50,000
Extremely Difficult Metabolite
Identification
35,000 85,000

8. System Volume / Dwell Volume
1. Lepaskan kolom
2. Gunakan ACN pada selang A dan
ACN dengan 0.05mg/mL Urasil di
selang B
3. Monitor pada 254nm
4. Gunakan flow rate sesuai metode
5. Jalankan baseline selama 5 menit
dengan 100% selang A
6. Di menit ke-5 pindah ke selang B
100% selama 5 menit
7. Hitung perbedaan absorban antara
100% A dan 100% B
8. Mengukur waktu 50%nya dari
perbedaan absorban
9. Kalkulasi perbedaan waktu dari
step ke step dan point ke 50%nya
10. Mengalikan perbedaan waktu
dengan laju aliran menghasilkan
system volume

9. TERIMAKASIH