“Metodologie atte a individuare la funzione di alcuni fattori di sopravvivenza/morte in cellule del cumulo ooforo, di pazienti che si sottopongono a procedure di procreazione medicalmente assistita.”

1. UNIVERSITA’ DEGLI STUDI DI PALERMO
SCUOLA DELLE SCIENZE DI BASE E APPLICATE
LAUREA MAGISTRALE BIOTECNOLOGIE PER L’INDUSTRIA E LA RICERCA SCIENTIFICA
Dipartimento di Scienze e Tecnologie Biologiche Chimiche e Farmaceutiche
Tesi di laurea di:
Dott.ssa Valeria Prestigiacomo
Relatore:
Prof.ssa Maria Carmela Roccheri
Corelatore:
Dott.ssa Liana Bosco
ANNO ACCADEMICO 2013-2014Valeria Prestigiacomo-UNIPA

2. APOPTOSI FOLLICOLARE
Per un
follicolo è più
facile morire
piuttosto che
ovulare!
Valeria Prestigiacomo-UNIPA

3. COMUNICAZIONEOOCITAE COMPLESSOCUMULOOOFORO(COC)
Giunzioni gap
Valeria Prestigiacomo-UNIPA

4. Induzione della
crescita follicolare
multipla
Prelievo
ovocitario o
pick-up
Fecondazione
Trasferimento
embrionario
TECNICHEDI PROCREAZIONEMEDICALMENTEASSISTITA
Valeria Prestigiacomo-UNIPA

5. MARCATORIDI SOPRAVVIVENZAEDI MORTE
AKT
Signaling
Valeria Prestigiacomo-UNIPA
https://www.youtube.com/watc
h?v=hcGrpd0CRV0

6. MARCATORIDI SOPRAVVIVENZAEDI MORTE
ERK1/2
Signaling
Valeria Prestigiacomo-UNIPA
https://www.youtube.com/
watch?v=oDjDUUhGVsI

7. ERK, possibile marcatore di morte
Cagnal e
, Chambrad, 2009
 Evan e Littlewood,
, 1998
Valeria Prestigiacomo-UNIPA

8. SCOPODEL LAVORO
Marcatori di qualità oocitaria
pAKT
pERK1/2
colocalizzate
con Caspasi-3
Frammentazione
DNA
Valeria Prestigiacomo-UNIPA

9. Materiali e Metodi
• Normo-responder con normale livello basale di FSH;
• Normale indice di massa corporea;
• Età inferiore ai 38 anni.
Valeria Prestigiacomo-UNIPA

10. % di frammentazione del DNA Livelli di espressione delle
proteine pAKT e pERK1/2
Materiali e Metodi
Valeria Prestigiacomo-UNIPA

11. RISULTATI
a) b)
c)
Saggio TUNEL in situ
Valeria Prestigiacomo-UNIPA

12. Valeria Prestigiacomo-UNIPA

13. Saggio Immunofluorescenza in situ di in
colocalizzazione con
Valeria Prestigiacomo-UNIPA

14. Saggio Immunofluorescenza in situ di
a) b)
c)
RISULTATI
Valeria Prestigiacomo-UNIPA

15. 0
4,000,000
8,000,000
12,000,000
16,000,000
20,000,000
24,000,000
0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16
pERK1/2 -caspasi3
pERK nucleare-caspasi3
Densitometria
Pz
Pz
Densitometria
0
2,000,000
4,000,000
6,000,000
8,000,000
10,000,000
12,000,000
14,000,000
16,000,000
0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16
pAKT
pAKT
Valeria Prestigiacomo-UNIPA

16. Conclusioni
 Valutazione delle proteine pAKT & Cleaved-Caspasi-3 /pERK1/2 in cellule del
cumulo ooforo umano
 Relazione fra la molecola Cleaved-Caspasi-3 e la percentuale di frammentazione
del DNA
 Possibile uso di questi marcatori oocitari per la scelta di migliori oociti da
fecondare nei cicli di ICSI
pAKT
,
Apotposi
pERK1/2
Apotposi
da singolo ovocitada pool ovociti
Valeria Prestigiacomo-UNIPA

17. Ringrazio il Centro di Biologia
della Riproduzione nella figura del
Dott. Ruvolo per averci fornito il
materiale di ricerca e di aver
contribuito alla stesura di questa
tesi
Valeria Prestigiacomo-UNIPA

18. Valeria Prestigiacomo-UNIPA

19. Controllo negativo
Immunofluorescenza
Valeria Prestigiacomo-UNIPA

20. Controllo negativo TUNEL
Controllo positivo TUNEL
a) b) c)
a) b) c)
Valeria Prestigiacomo-UNIPA