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산화스트레스 및 Amyloid β의
세포독성으로부터
신경세포를 보호하는 Allantoin의 효능 연구
Protective Effect of Allantoin on Neuron
against Oxidative Damage and Amyloid beta Toxicity
21008 김용승
INDEX
연구 동기 및 서론
연구 내용
결과 및 결론
추후 연구 방향 및 계획
21008 김용승
연구 동기 및 서론
 학습 도중 아이디어 선정
 정보 검색 및 구체화
 고령화로 인한 Alzheimer성 치매
증가
 Allantoin의 항산화적 효능 및 적용
21008 김용승
연구 내용
 연구 대상
Sigma Aldrich사에서 구매한
Neuro 2a Cell Line from mouse
21008 김용승
연구 내용
 산화 스트레스의 측정과 Allantoin의
작용
 Neuro2a cell 을 배양하여 24well 에 균등하게
배양
 농도별 Allantoin solution 100μl을 24시간 처리
 24시간후 H2O2 를 1mM의 농도로 4시간 처리
H2O2 비처리군 (대조군)을 포함
21008 김용승
연구 내용
 Amyloid β 의 세포독성과 Allantoin의
작용
 Neuro2a cell 을 배양하여 24well 에 균등하게
배양
 농도별 Allantoin solution 100μl와 Amyloid β
5μM을 24시간 처리
 Amyloid β 비처리군 (대조군)을 포함
21008 김용승
연
구
내
용
21008 김용승
세포 활성도 측정법 : WST-1
탈수소효소에 의해 생성된 Formazan 산물의 흡광도를
측정(420~480nm)
Premix WST-1을 1well당 10μl씩 첨가
Incubator에서 0.5~3시간 반응
연구 내용
 통계분석
 WST-1의 결과값을 정리하고 평균값 산출
 평균값들을 그래프로 그리고 기준 시간 선정
 정한 시간에서의 값 비교, 분석
 Student’s t test를 진행하여 결과값의 통계학적
의미 존재 여부 판단
결
과
및
결
론
21008 김용승
• 산화 스트레스에 따른 활성도 및 보호 효과
. ** P<0.01 vs control. ns = not significant
difference
결
과
및
결
론
21008 김용승
• 세포 독성에 따른 활성도 및 보호 효과
ns = not significant difference
결과 및 결론
 산화스트레스에 따른 활성도 및 보호 효과
 이 실험에서 H2O2로 인한 세포 활성도는
유의미하게 감소하였으나 대조군과 비교하였을
때 Allantoin으로 인한 활성도 증가는 유의미하지
않았다. 아쉽지만 실험데이터는 Allantoin이
약간의 항산화효과 경향은 보였으나,
통계적으로 차이를 줄 만큼 효과가 없었다.
21008 김용승
결과 및 결론
 세포 독성에 따른 활성도 및 보호 효과
 Amyloid β의 독성으로 인해 세포의 활성도는
대조군에 비해 실험군에서 감소하였으나 급성
세포독성이 약하였기 때문에 유의미하게
감소하지 않았다. 또한 대조군에서 Allantoin의
농도가 10μM이었을 때 가장 활성도가 높은
경향을 보였으나 큰 차이를 보이지 않았다. 이
부분에 대해서도 Allantoin의 세포 독성에 대한
신경세포 보호효과는 없었다.
21008 김용승
결과 및 결론
 Allantoin의 신경세포 보호 효과에 대한 종합적 평가
 이번 연구에서 Allantoin의 신경세포 보호효과에 대한
전반적 능력은 미미했다. H2O2의 대조군 에서 Allantoin
농도를 올리면 WST-1수치가 올라가지만, Amyloid β의
대조군 에서는 그런 경향이 없으므로, Allantoin이 세포
분열을 증가시키는지 여부는 증명되었다고 하기는 어렵다.
이부분은 추가실험으로 다시 확인이 필요한 부분이다.
위와 같은 세포 활성능력이 아닌 알려져있는 산화
스트레스 작용 능력도 이 실험으로는 증명 할 수 없었고,
세포독성에 대한 실험 결과도 Allantoin이 Amyloid β에는
효과가 없어서 이 실험에서는 Amyloid β에의한
알츠하이머병에서는 효과가 일단 없는 것으로 평가를
내린다.21008 김용승
추후 연구 방향 및 계획
 Allantoin의 작용 기전 확인
 Allantoin의 표적 단백질 확인
 Allantoin의 표적단백질과 Amyloid β의 표적단백질 비교
 Allanoin과 산화 스트레스에 공통적으로 반응하는 단백질
확인 및 산화로 인한 노화 연구
 산화스트레스와 Allantoin의 실험 순서 및 시간 재조정
 실험의 반복회수 증가
 동물 실험모델 이용
21008 김용승

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논문 발표

  • 1. 산화스트레스 및 Amyloid β의 세포독성으로부터 신경세포를 보호하는 Allantoin의 효능 연구 Protective Effect of Allantoin on Neuron against Oxidative Damage and Amyloid beta Toxicity 21008 김용승
  • 2. INDEX 연구 동기 및 서론 연구 내용 결과 및 결론 추후 연구 방향 및 계획 21008 김용승
  • 3. 연구 동기 및 서론  학습 도중 아이디어 선정  정보 검색 및 구체화  고령화로 인한 Alzheimer성 치매 증가  Allantoin의 항산화적 효능 및 적용 21008 김용승
  • 4. 연구 내용  연구 대상 Sigma Aldrich사에서 구매한 Neuro 2a Cell Line from mouse 21008 김용승
  • 5. 연구 내용  산화 스트레스의 측정과 Allantoin의 작용  Neuro2a cell 을 배양하여 24well 에 균등하게 배양  농도별 Allantoin solution 100μl을 24시간 처리  24시간후 H2O2 를 1mM의 농도로 4시간 처리 H2O2 비처리군 (대조군)을 포함 21008 김용승
  • 6. 연구 내용  Amyloid β 의 세포독성과 Allantoin의 작용  Neuro2a cell 을 배양하여 24well 에 균등하게 배양  농도별 Allantoin solution 100μl와 Amyloid β 5μM을 24시간 처리  Amyloid β 비처리군 (대조군)을 포함 21008 김용승
  • 7. 연 구 내 용 21008 김용승 세포 활성도 측정법 : WST-1 탈수소효소에 의해 생성된 Formazan 산물의 흡광도를 측정(420~480nm) Premix WST-1을 1well당 10μl씩 첨가 Incubator에서 0.5~3시간 반응
  • 8. 연구 내용  통계분석  WST-1의 결과값을 정리하고 평균값 산출  평균값들을 그래프로 그리고 기준 시간 선정  정한 시간에서의 값 비교, 분석  Student’s t test를 진행하여 결과값의 통계학적 의미 존재 여부 판단
  • 9. 결 과 및 결 론 21008 김용승 • 산화 스트레스에 따른 활성도 및 보호 효과 . ** P<0.01 vs control. ns = not significant difference
  • 10. 결 과 및 결 론 21008 김용승 • 세포 독성에 따른 활성도 및 보호 효과 ns = not significant difference
  • 11. 결과 및 결론  산화스트레스에 따른 활성도 및 보호 효과  이 실험에서 H2O2로 인한 세포 활성도는 유의미하게 감소하였으나 대조군과 비교하였을 때 Allantoin으로 인한 활성도 증가는 유의미하지 않았다. 아쉽지만 실험데이터는 Allantoin이 약간의 항산화효과 경향은 보였으나, 통계적으로 차이를 줄 만큼 효과가 없었다. 21008 김용승
  • 12. 결과 및 결론  세포 독성에 따른 활성도 및 보호 효과  Amyloid β의 독성으로 인해 세포의 활성도는 대조군에 비해 실험군에서 감소하였으나 급성 세포독성이 약하였기 때문에 유의미하게 감소하지 않았다. 또한 대조군에서 Allantoin의 농도가 10μM이었을 때 가장 활성도가 높은 경향을 보였으나 큰 차이를 보이지 않았다. 이 부분에 대해서도 Allantoin의 세포 독성에 대한 신경세포 보호효과는 없었다. 21008 김용승
  • 13. 결과 및 결론  Allantoin의 신경세포 보호 효과에 대한 종합적 평가  이번 연구에서 Allantoin의 신경세포 보호효과에 대한 전반적 능력은 미미했다. H2O2의 대조군 에서 Allantoin 농도를 올리면 WST-1수치가 올라가지만, Amyloid β의 대조군 에서는 그런 경향이 없으므로, Allantoin이 세포 분열을 증가시키는지 여부는 증명되었다고 하기는 어렵다. 이부분은 추가실험으로 다시 확인이 필요한 부분이다. 위와 같은 세포 활성능력이 아닌 알려져있는 산화 스트레스 작용 능력도 이 실험으로는 증명 할 수 없었고, 세포독성에 대한 실험 결과도 Allantoin이 Amyloid β에는 효과가 없어서 이 실험에서는 Amyloid β에의한 알츠하이머병에서는 효과가 일단 없는 것으로 평가를 내린다.21008 김용승
  • 14. 추후 연구 방향 및 계획  Allantoin의 작용 기전 확인  Allantoin의 표적 단백질 확인  Allantoin의 표적단백질과 Amyloid β의 표적단백질 비교  Allanoin과 산화 스트레스에 공통적으로 반응하는 단백질 확인 및 산화로 인한 노화 연구  산화스트레스와 Allantoin의 실험 순서 및 시간 재조정  실험의 반복회수 증가  동물 실험모델 이용 21008 김용승