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樟芝抑瘤作用及对荷瘤小鼠免疫功能的影响
- 1. １２２４ 中国公共卫生２００５年１０月第２ｌ卷第ｌＯ期 ＣｈｉｎＪ Ｐｕｂｌｉｃ Ｈｅａｌｔｈ Ｏｃｔ ２００５＂Ｃ０１．２１ Ｎｏ．Ｊ０
也有研究认为，高浓度铅可引起细胞溶解，铅通过与红细胞基
质酶结合和抑制红细膜三磷酸腺甘酶的活性作用，使红细胞
内钾离子溢出，而起溶血作用［２Ｊ。同时铅与红细胞表面的磷
酸盐结合成不溶性的磷酸铅［３］，可使红细胞脆性增加，致使红
细胞在通过毛细血管时破裂而发生溶血【４】。
本实验中铅中毒组血红蛋白含量和红细胞数目较正常对
照组明显下降，红细胞分布宽度显著升高，与文献报道相
符【扪。而牛磺酸对于铅所致大鼠上述血细胞参数的改变有明
显的拮抗作用，说明牛磺酸能降低血铅水平，并能保护红细
胞。其机制可能与Ｔａｕ是一种含硫氨基酸有关。现已证实，
摄入适量的含硫氨基酸可以增加谷胱甘肽的生物利用度，增
加铅的排泄【引。同时牛磺酸对红细胞膜有明显的稳定作用，
能保护红细膜三磷酸腺甘酶的活性从而抑制红细胞溶血【７ｊ。
参考文献
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收稿日期：２００５．０１—２０ （宋艳萍编辑刘铁校对）
文章编号：ｉ００１．０５８０｛２００５）１０．１２２４．０２ 中图分类号：１１．４＋１ 文献标识码：Ａ
樟芝抑瘤作用及对荷瘤小鼠免疫功能的影响
孟繁岳，车会莲，杜杰，李蓉
樟芝属非褶菌目、多孑Ｌ科，珍贵的药用真菌。据报道，樟
芝中含有丰富的多糖、三萜类化合物等生物活性物质，具有抗
癌（１】、消炎［２］、抗氧化［３］等功效。本实验通过荷瘤小鼠的体
内实验，对樟芝子实体的抑瘤功效及对机体肿瘤免疫的调节
作用进行探讨。
１材料与方法
１．１动物与瘤株清洁级Ｃ５７ＢＬ／６小鼠５０只（北京维通实
验动物中心，合格证号：２００２—０００３），体重（２０±２）ｇ，雌雄各
半；小鼠肝癌Ｈ２２瘤株（黑龙江省肿瘤防治研究所）。
１．２样品与试剂 樟芝子实体粉（日本目生株会式社惠赠
Ｌｏｔ．Ｎｏ：ＡＣ２０５６Ｍ，水分５．４％，菌落总数５．８ ｘ １０３个／ｇ，大
肠菌群阴性）；，Ｊ、牛血清、ＰＲＭｌｌ ６４０培养液（ＧＩＢＣ０），Ｔｒｉｓ—
ＨＣｌ缓冲液（ｐＨ８．２），Ｈａｎｋ’Ｓ液（ｐＨ７．２～７．４），四甲基偶氮噻
唑蓝（ＭＴＴ，Ｓｉｇｍａ公司），刀豆蛋白（ＣｏｎＡ，美国Ｓｉｇｍａ公司），
黄嘌呤氧化酶、硝基氯化四氮唑６．６×１０＿４ｍｏｌ／Ｌ（Ｆｌｕｋａ公
司）。氧化型辅酶１１．３×１００ｍｏｌ／Ｌ（Ｓｅｒｖａ公司），１％ＮＰ４０溶
液，ＩＬ一２试剂盒（晶美公司）、ＩＬ一１２试剂盒（森雄公司）、
ＴＮＦ—ａ试剂盒（晶美公司），Ｋ５６２及ＹＡＣ一１细胞株（黑龙
江省肿瘤防治研究所提供）。
１．３仪器设备Ｃ０２培养箱，显微镜，电子天平，孵箱，酶标
仪（ＢＩＯ—ＲＡＤ，Ｍｏｄｅｌ ４５０，ＭＩＣＲＯＰＬＡＴＥ ＲＥＡＤＥＲ）。
１．４实验方法
１．４．１动物处理瘤细胞浓度为１ Ｘ
１０６个／ｍｌ的Ｈ２２瘤株
腹水０．５ ｍ１接种于实验鼠背部皮下［钔，共接种４０只。２４ ｈ后
将荷瘤小鼠随机分为荷瘤空白对照组［Ｏ ｍｇ／（ｋｇ・ｂｗ）］、樟芝
作者单位：哈尔滨医科大学公共卫生学院卫生检验教研室，哈尔滨
１５０００１
作者简介：盂繁岳（１９７８一），男，黑龙江人。硕士在读，主要从事营养
与疾病方面的研究。
【实验研究】
低剂量组［４０ ｍｇ／（ｋｇ・ｂｗ）］、樟芝中剂量组［２００ ｍｇ／（ｋｇ・
ｂｗ）］、樟芝高剂量组［１ ０００ ｍｇ／（ｋｇ・ｂｗ）］，每组１０只；另设正
常空白对照组１０只，不接种肿瘤。各组分别记录体重。将樟
芝子实体粉以蒸馏水配制成相应浓度，按０．００２５ ｍｌ／（ｇ・ｂｗ）
分别灌胃低、中、高剂量组的荷瘤小鼠，同时荷瘤空白对照组
与正常空白对照组按体重给予相应体积的蒸馏水灌胃。每天
灌胃１次。持续３５ ｄ。每周称１次体重，按体重调整灌胃量。
第３６ ｄ眼球采血，分离血清；无菌取脾，制备脾细胞悬液；剥
离完整瘤组织、称重。
１．４．２瘤体比及抑瘤率瘤体比（％）＝瘤重／体重×１００％。
抑瘤率（％）＝（荷瘤空白对照组瘤重一实验组瘤重）／荷瘤空
白对照组瘤重Ｘ１００％。
１．４．３腹腔单核臣噬细胞（ＭＯ）吞噬能力 腹腔巨噬细胞吞
噬鸡红细胞实验［５）：Ｍ西吞噬率（％）＝吞噬鸡红细胞的巨噬
细胞数／计数的巨噬细胞数×１００％
Ｍ中吞噬指数＝被吞噬的鸡红细胞总数／计数的巨噬细
胞数。
１．４．４ 自然杀伤细胞（ＮＫ）细胞细胞毒活性检测采用乳酸
脱氢酶法【ｓ］，脾细胞为效应细胞，ＹＡＣ一１为靶细胞，效靶比
为５０：１：ＮＫ细胞活性（％）＝（ＡＥ—ＡＮ）／（ＡＭ—ＡＮ）×１００％
ＡＥ：反应孔Ａ值；ＡＮ：自然释放孔Ａ值；ＡＭ：最大释放孑Ｌ Ａ值。
１．４．５淋巴因子激活高杀伤细胞（ＬＡＫ）细胞细胞毒活性测
定采用ＭＴ法（６３，脾细胞为效应细胞，Ｋ５６２为靶细胞；ＬＡＫ
细胞毒活性（％）＝［１一（ＡＥ＋ｔ—ＡＥ）／ＡＴ］×１００％ＡＥ＋Ｔ：效
应细胞和靶细胞？昆合孔的Ａ值；ＡＥ：效应细胞孔的Ａ值；
Ａ，：靶细胞孔的Ａ值。
１．４．６ ＣｏｎＡ诱导Ｔ细胞转化实验采用ＭＴＴ法。
１．４．７脾细胞抗体生成能力检测 采用空斑实验（Ｊｅｒｎｅ改
良玻片法）检测。
万方数据
- 2. 中国公共卫生２００５年１０月第２１卷第１０期 ＣｈｉｎＪＰｕｂｌ缸ＨｅａｌｔｈＯｃｔ ２００５ Ｖ０１．２１ Ｎｏ．１０ １２２５
１．４．８血清ＩＬ一２、ＩＬ一１２、ＴＮＦ—ａ水平检测用ＥＬＩＳＡ
法试剂盒检测。
１．５数据处理 实验数据以三±ｓ表示，应用ＳＡＳ ６．１２软
件分析数据。
２结果
２．Ｉ樟芝子实体粉对荷瘤小鼠肿瘤生长的影响 樟芝的３
个剂量组中，高剂量组的瘤重、瘤体比及抑瘤率均显著低于其
他各组（Ｐ＜０．０１），抑瘤率达７４．２４％，显著高于其他各组，对
肿瘤的生长有显著的抑制作用；低、中剂量组抑瘤作用不明
显。荷瘤空白对照组瘤体大，界限不清，液化面积大，部分甚
至浸润至腹腔、胸腔，难以剥离；高剂量组瘤体较小，界限清
晰，液化面积小或无液化，易剥离。
２．２樟芝子实体粉对荷瘤小鼠免疫功能的影响
２．２．１樟芝对荷瘤小鼠免疫细胞及功能的影响 樟芝高剂
量纽腹腔巨噬细胞ＭＯ吞噬率及吞噬指数明显高子其他各组
（Ｐ＜０．０１）；樟芝高、中剂量组ＮＫ细胞活性显著高于其他各
组（Ｐ＜０．０１），且呈现剂量依赖关系；樟芝３个剂量组ＬＡＫ
细胞活性显著高予荷瘤空白对照组（Ｐ＜０．０１），以高剂量组
为最高，基本达到正常空白对照组的水平（表１）。樟芝３个
剂量组Ｔ细胞转化能力显著高于正常空对照组与荷瘤空白
对照组，且高剂量组显著高于中、低剂量组；空斑实验显示樟
芝高剂量组细胞中抗体生成细胞数显著多于其他各组（Ｐ＜
Ｏ．０１）（表２）。
表１樟芝对荷瘤小鼠腹腔Ｍｏ吞噬功能、ＮＫ、ＬＡＫ
细胞细胞毒活性的影响（ｘ±ｓ，一＝１０）
组别
№吞噬率
竺。
ＮＫ细胞毒活性Ｌ＾Ｋ细胞毒活性
！整２ 蚕堕堂塾 ｆ堡！ ！整２
正常空白对照（Ａ）６２．６９＋１．１１ １．０６±０．０４ ４０．０５±２．５７ ３５．６２±４．００
荷瘤空白对照（Ｂ） ６９．０４±２．７２ ｌ－１８＿＋０．０４ ４６．９３±４．５０ １４．８５±１．４１
低剂量组（Ｃ） ６２．８９±３．９５ １．０３±０．０４ ４６．３６±３．９２ ２５．８０±２．８２ｂ
中剂量组（Ｄ） ６５．９６±５．４４ １．０４±Ｏ．０３ ５４．３８±３．１９如２４．９４±１．９４ｂ
高剂量组（Ｅ）８３．１７±３．９５＂ Ｉ．４８±Ｏ．２９＂ ６１．９８±１．５３＂ ３２．５１±２．６０“甜
注：ａ…ｂ Ｃ ｄ分别表示与Ａ组、Ｂ组、Ｃ组、Ｄ组比较；与其他４组比
较，ｅ Ｐ＜０．０１
表２樟芝对荷瘤小鼠Ｔ细胞转化及脾细胞
抗体生成能力的影响（；±ｓ。ｎ＝１０）
注：ａ、ｂ分别表示与Ａ组、Ｂ组比较；与其他４组比较。ｅＰ＜０．０１
２．２．２樟芝子实体粉对荷瘤小鼠血清免疫分子的影响 樟
芝高剂量组血清ＩＬ一２和ＩＬ一１２水平均显著高于其他各组
（Ｐ＜０．０１）；樟芝３个剂量组血清ＴＮＦ一口水平显著高于正常
空白对照组及荷瘤空白对照组（Ｐ＜０．０１），但３个剂量组间
差异无统计学意义（Ｐ＞０．０５）（表３）。
表３樟芝对荷瘤小鼠血清ＩＬ一２、ＩＬ一１２及
ＴＮＦ—ａ水平的影响（ｘ±ｓ，ｎ＝１０）
组别
血清ＩＬ一２水平血清ｌＬ—１２水平血清ＴＮＦ－ａ水平
（Ａ） （Ａ） ［ｃ／（Ｐｇ・ｍ１）］
注：ｆｌ、ｂ分别表示与Ａ组、Ｂ组比较；与其他４组比较，ｅ Ｐ＜０．０１
３讨论
从樟芝子实体中提取的甾类化合物（ｚｈａｎｋｕｉｃ ａｃｉｄ Ａ）对
Ｐ３８８鼠白血病细胞有明显的抑制作用（”；樟芝菌丝体ＣＨＣｌ３
提取物Ｍａｌｅｉｃ２、Ｍａｌｅｉｃ３体外对小鼠Ｌｅｗｉｓ肺癌细胞有明显的
抑制作用【训。Ｈｓｅｕ ＹＣ等报道樟芝菌丝体水提取物对白血病
ＨＬ一６０细胞有明显的细胞毒性【３］。
本研究显示，给予１ ０００ ｍｇ／（ｋｇ・ｂｗ）的樟芝子实体粉，对
肝癌Ｈ２２荷瘤小鼠的抑瘤率达到７４．２４％；同时与荷瘤空白
对照组及正常空白对照组相比高剂量组荷瘤小鼠腹腔ＭＯ的
吞噬能力、ＮＫ及ＬＡＫ细胞的细胞毒活性显著提高（Ｐ＜
０．０１），Ｔ细胞转化能力及脾细胞抗体生成能力显著增强（Ｐ
＜Ｏ．０１）血清ＩＬ一２、ＩＬ一１２及ＴＮＦ—ａ等细胞因子水平显著
提高（Ｐ＜０．０１）。中剂量组与低剂量组比较只有ＮＫ细胞毒
活性有显著提高（Ｐ＜０．０１）中、低剂量组与正常空白对照组
及荷瘤空白对照组比较ＬＡＫ细胞细胞毒活性、Ｔ细胞转化能
力及血清ＴＮＦ—ａ水平均有显著提高（Ｐ＜０．０１）。这一结果
表明，樟芝子实体具有一定的抑瘤作用，同时从免疫细胞和免
疫分子水平提高荷瘤小鼠抗肿瘤免疫功能，并且表现出剂量
依赖趋势。可见，樟芝子实体的抑瘤作用与其改善免疫系统
状态、增强机体抗肿瘤能力有关，其机制有待进一步研究。
食药用真菌中的天然抑瘤成分毒副作用小且资源丰富，
作为抗肿瘤辅助药物或功能食品具有良好的开发应用前景。
参考文献
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收稿日期：２００５．０２．１８ （宋艳萍编辑刘铁校对）
万方数据
- 3. 樟芝抑瘤作用及对荷瘤小鼠免疫功能的影响
作者： 孟繁岳， 车会莲， 杜杰， 李蓉
作者单位： 哈尔滨医科大学公共卫生学院卫生检验教研室,哈尔滨,150001
刊名：
中国公共卫生
英文刊名： CHINESE JOURNAL OF PUBLIC HEALTH
年，卷(期)： 2005,21(10)
被引用次数： 8次
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