本研究利用绿色荧光蛋白观察HeLa细胞在肿瘤坏死因子-alpha（TNF-α）影响下的染色体不稳定现象，发现TNF-α可引发tripolar和DNA桥现象，可能导致基因突变并促进癌症发生。实验使用了qC-GFP/H2B质粒共转染HeLa细胞，并通过荧光显微镜监测染色体分裂情况。感谢指导老师及实验室成员的支持与帮助。

1. 國立成功大學生物資訊與訊息傳遞研究所暑期實習成果之心得報告
長榮大學生物科技系
指導老師: 王育民 副教授 吳欣蓉 博士生
利用綠色螢光蛋白觀察染色體不穩定現象
Abstract
此實驗的研究目的在於利用green fluorescent protein (GFP)在
細胞內受到藍光或紫光激發之後會產生綠色螢光之特性，觀察
當HeLa cell的染色體受到tumor necrosis factor-alpha（TNF-α）
影響所產生的染色體不穩定現象。 DNA bridges
Tripolar
造成染色體不穩定現象有許多種，例如過敏反應、發炎反
應與腫瘤等等。而實驗中所用到的HeLa cell源自一位美國婦
女Henrietta Lacks的子宮頸癌細胞的cell line。 DNA bridges
lipopolysaccharide（LPS）是來自革蘭氏陰性菌細胞壁的毒性
化學物質，可刺激免疫細胞，釋放cytokine。cytokine包括
interleukin-1β、interleukin-6 及tumor necrosis factor- alpha
（TNF-α）等。TNF-α刺激下會和tumor necrosis factor Tripolar
receptor（TNFR）家族的受體結合，將訊號傳遞至細胞內，
繼而啟動caspase 活化，引發細胞凋亡或者基因突變等等。
GFP具有一個特殊的發色團，亦即一種會吸光與放光的化學
官能基團。當紫外線或藍色光照到這個GFP的發色團時，它 FIGURE 3.：將GFP co-transfection到HeLa cell中，
會吸收光線的能量而被激發，下一刻發色團以放光的方式釋 以TNF-α 20μg/ml 8 day。
放出能量。 可看到圖中有Tripolar與DNA在分裂時所造成DNA bridges的現象。
Subject and Method
1. QC-GFP/H2B Plasmid-Transform
2. Amplify QC-GFP/H2B plasmid
3. Purify QC-GFP/H2B plasmid Tripolar
4. 挑選帶有QC-GFP/H2B的HeLa stable line
5. 以TNF-α處理細胞
Multinuclear
6. 利用Fluorescence microscope觀察染色體
Result
DNA bridges
Tripolar
Multinuclear
FIGURE 4.：將GFP co-transfection到HeLa cell中，
以TNF-α 20μg/ml 8 day。
FIGURE 1.：將GFP co-transfection到HeLa cell中，以
有DNA bridges與multinuclear 的現象。
TNF-α 20μg/ml 48 hour。 Control組，有發現Tripolar，但數
量非常少。
Discussion
在以TNF-alpha處理過後8天的HeLa細胞，明顯看出有Tripolar、
DNA bridges與multinuclear。TNF-alpha可誘發染色體不穩定現象，這
些染色體不穩定現象可能使基因發生突變或抑制基因表現，因為可
能使基因突變，所以致癌基因可能會被活化或是腫瘤抑制基因失活
multinuclear 進而促進走向癌症發生。利用螢光標定H2B，可以有效的監測TNF-
alpha處理下染色體的分裂情況。因為可全面性的監測染色體分裂情
況，所以更易於觀察出染色體不穩定的細胞。
致謝
首先非常感謝王育民老師給我這個寶貴的機會到貴實驗室實習，真
是謝謝老師的幫忙與指導。感謝在這兩個月以來一直帶著我做實驗
的欣蓉學姊。最後再次感謝王育民老師以及實驗室各位學長姐的教
FIGURE 2.：將GFP co-transfection到HeLa cell中，以TNF- 導與帶領，在這致上最大的謝意。
α 20μg/ml 8 day。有multinuclear的現象。