A short descriptive presentation on the principles behind the ELISA technic IN TAMIL MEDIUM

1. ELISA- Principle, Types and
Applications
ELISA- கைொள்கைைள், வகைைள் மற்றும்
பயன்பொடுைள்

2. • ELISA stands for Enzyme Linked
Immunosorbent Assay
(ந ொதி-இணைக்கப்பட்ட ந ொய் தடுப்பொற்றல் ஆய்வி)

3. • Immunology - தடுப்பொற்றலியல்; தடுப்பொற்றியல்;
தடுப்புத்திறனியல்
• Immune system - ந ொய் எதிர்ப்பு மண்டலம்;ந ொய்
எதிர்புத் நதொகுதி
• Antigen - உடற்கொப்பு ஊக்கி; எதிர்ச்நெனி;
பிறநபொருநெதிரியொக்கி; எதிரியொக்கி
• Antibody - உடற்கொப்பு மூலம்; எதிர்ப்நபொருள்;
பிறநபொருநெதிரி
• Immunity - ந ொய் எதிர்ப்புத் திறன்; ந ொய்த்
தடுதிறன்; ந ொய்த் தணடக் கொப்பு

6. • ஒவ்ந ொரு ந ொதியிலும் சில குறிப்பிட்ட அமிந ொ அமிலத்
நதொடொா்கள் நெொா்ந்து விண படுநபொருள் (கீழ்ப்பணட) ந்து
பிணை தற்கு ஏற்றொற்நபொல் ஒரு முப்பரிமொை அணமப்ணப
உரு ொக்குகின்ற .
• இவ்விடநம இயங்கிடம் அல்லது உயிர்ப்பு நிணலயம் (Active
Site) எ ப்படும்.
• இது தொன் ஒரு ந ொதியின் தனித்தன்ணமணய (specificity)
/துல்லியத்தன்ணமணய முடிவு நெய்கின்ற .

7. • ELISA is an antigen antibody reaction
• It is a common laboratory technique which is
usually used to measure the concentration of
antibodies or antigens in blood.

8. • ELISA என்பது பிறநபொருநெதிரியொக்கி(Antigen) –
பிறநபொருநெதிரி(Antibody) எதிர்விண ஆகும்.
• இது ழக்கமொக இரத்தத்தில் பிறநபொருநெதிரிகள்
அல்லது பிறநபொருநெதிரியொக்கிகளின் நெறிண
அெவிடு தற்கு பயன்படுத்தப்படும் ஒரு நபொது ொ
ஆய் க நுட்பமொகும்.

9. • ELISA is a plate based assay technique which is used
for detecting and quantifying substances such as
peptides, proteins, antibodies and hormones.
• ELISA என்பது ஒரு தட்டு அடிப்பணடயிலொ மதிப்பீட்டு
நுட்பமொகும், இது நபப்ணடட்ஸ், புரதங்கள்,
பிறநபொருநெதிரிகள் மற்றும் ஹொர்நமொன்கள் நபொன்ற
நபொருட்கணெ கண்டறிய மற்றும் அெவிடு தற்குப்
பயன்படுத்தப்படுகிறது.

10. • An enzyme conjugated with an antibody
reacts with colorless substrate to generate a
colored product.
• Such substrate is called chromogenic
substrate.
• ஒரு பிறநபொருநெதிரியுடன் இணைந்த ஒரு
ந ொதி,நிறப்நபொருள் ஒன்றிண உரு ொக்க
நிறமற்ற கீழ்ப்பணடயுடன் நெயல்படுகிறது.
• இத்தணகய கீழ்ப்பணட, குநரொமநெனிக்
கீழ்ப்பணட எ அணழக்கப்படுகிறது.

11. • A number of enzymes have been used for ELISA
such as alkaline phosphatase, horse radish
peroxidase and beta galactosidase.
• Specific substrates such as
 ortho-phenyldiamine dihydrochloride (for
peroxidase),
 paranitrophenyl phosphate (for alkaline
phosphatase) are used which are hydrolysed by
above enzymes to give colored end product.

12. Principle
• ELISAs are typically performed in 96-well polystyrene
plates.
• ELISAகள் நபொது ொக 96 துணெகள் நகொண்ட
பொலீட்டிரியரின் தகடுகளில் நிகழ்த்தப்படுகின்ற .
• The serum is incubated in a well, and each well
contains a different serum.

13. • A positive control serum and a negative control
serum would be included among the 96
samples being tested.
• ஒரு ந ர்மணறயொ கட்டுப்பொட்டு சீரம் மற்றும்
ஒரு எதிர்மணற கட்டுப்பொட்டு சீரம் ஆகியண 96
மொதிரிகளில் உள்ெடங்கும்.
• Antibodies or antigens present in serum are
captured by corresponding antigen or antibody
coated on to the solid surface.

14. • After some time, the plate is washed to remove
serum and unbound antibodies or antigens.
• To detect the bound antibodies or antigens, a
secondary antibodies that are attached to an
enzyme are added to each well.
• பிணைக்கப்பட்ட பிறநபொருநெதிரிகள் அல்லது
பிறநபொருநெதிரியொக்கிகணெ கண்டறிய, ஒரு
ந ொதிக்கு இணைக்கப்பட்டுள்ெ இரண்டொம் நிணல
பிறநபொருநெதிரிகள் ஒவ்ந ொன்றிலும்
நெர்க்கப்படுகின்ற

15. • After an incubation period (அணடகொக்கும் கொலம்),
the unbound secondary antibodies are washed off.
• When a suitable substrate (கீழ்ப்பணட) is added,
the enzyme (ந ொதியம்) reacts with it to produce a
color.
• This color produced is measurable as a function or
quantity of antigens or antibodies present in the
given sample.

16. Types of ELISA
• Frequently there are 3 types of ELISA on the
basis of binding structure between the
Antibody and Antigen.
Indirect ELISA (மறைமுக ELISA)
Sandwich ELISA (சாண்ட்விச் ELISA)
Competitive ELISA (ப ாட்டி ELISA)

17. Indirect ELISA (மணறமுக ELISA)

18. • In this technique, antigen is coated on the
microtiter well.
• Serum or some other sample containing primary
antibody is added to the microtiter well and
allowed to react with the coated antigen.
• Any free primary antibody is washed away and
the bound antibody to the antigen is detected by
adding an enzyme conjugated secondary
antibody that binds to the primary antibody.

19. • Unbound secondary antibody is then washed away
and a specific substrate for the enzyme is added.
• Enzyme hydrolyzes the substrate to form colored
products.
• The amount of colored end product is measured by
spectrophotometric plate readers that can
measure the absorbance of all the wells of 96-well
plate.

20. Sandwich ELISA (ெொண்ட்விச் ELISA)

21. • In this technique, antibody is coated on the
microtiter well.
• A sample containing antigen is added to the
well and allowed to react with the antibody
attached to the well.
• After the well is washed, a second enzyme-
linked antibody is allowed to react with the
bound antigen.

22. • Then after unbound secondary antibody
(இரண்டொம்நிணல பிறநபொருநெதிரி) is removed
by washing.
• Finally substrate (கீழ்ப்பணட) is added to the
plate which is hydrolyzed(நீர்ப்பகுப்பு) by
enzyme to form colored products.

23. Competitive ELISA (நபொட்டி ELISA)
• Antibody (பிறநபொருநெதிரி) is first incubated in solution with
a sample containing antigen (பிறநபொருநெதிரியொக்கி)
• The antigen-antibody (பிறநபொருநெதிரியொக்கி -
பிறநபொருநெதிரி )mixture is then added to the microtitre we
which is coated with antigen.

24. • The more the antigen present in the sample, the less
free antibody will be available to bind to the antigen-
coated well.
• பிறநபொருநெதிரியொக்கிகள் அெவு அதிகமொக
கொைப்படும் நபொது ,அ ற்றுடன் இணையொத பிற
நபொருள் எதிரிகளின் அெவு குணற ொக கொைப்படும்
• After the well is washed, enzyme conjugated secondary
antibody specific the primary antibody is added to
determine the amount of primary antibody bound to
the well.
• For competitive ELISA, the higher the sample antigen
concentration, the weaker the eventual signal.

26. Application
• Presence of antigen or the presence of antibody in a
sample can be evaluated.
• Determination of serum (குருதிநீர்ப்பொயம்) antibody
concentrations in a virus test.
• Used in food industry when detecting potential
food allergens .
• Applied in disease outbreaks- tracking the spread of
disease e.g. HIV, bird flu, common, colds, cholera,
STD etc.

27. Adavantages and Disadvantages