use modern and biological control agent

1. “ ‫الحشرية‬ ‫االفات‬ ‫مكافحة‬ ‫في‬ ‫حيوي‬ ‫كعامل‬ ‫للحشرات‬ ‫الممرضة‬ ‫النيماتودا‬”
Entomopathogenic nematodes as biological agent
for controlling insect pests
‫حمود‬ ‫بلبل‬ ‫جواد‬ ‫الدكتور‬
‫والتكنولوجيا‬ ‫العلوم‬ ‫وزارة‬
–
‫الزراعية‬ ‫البحوث‬ ‫دائرة‬

2. ‫المحاضرة‬ ‫ملخص‬

‫وتواجدها‬ ‫للحشرات‬ ‫الممرضه‬ ‫النيماتودا‬ ‫عن‬ ‫مختصرة‬ ‫نبذه‬
....

‫النيماتودا‬ ‫وتصنيف‬ ‫الجغرافي‬ ‫التوزيع‬
......

‫الطبيعه‬ ‫في‬ ‫النيماتودا‬ ‫حياة‬ ‫دورة‬
.....

‫الناجحه‬ ‫والتجارب‬ ‫العائلي‬ ‫المدى‬
.....

‫لها‬ ‫المرافقه‬ ‫والبكتريا‬ ‫النيماتودا‬ ‫عزل‬
.....

‫العراق‬ ‫في‬ ‫للنيماتودا‬ ‫العملية‬ ‫التطبيقات‬
.....
2

3. ‫؟‬ ‫النيماتودا‬ ‫ماهي‬
‫الخيطية‬ ‫بالديدان‬ ‫ماتسمى‬ ‫او‬ ‫النيماتودا‬
(
roundworm
)
‫شعبة‬ ‫الى‬ ‫تنتمي‬ ‫حية‬ ‫كائنات‬
Nematoda
‫التربة‬ ‫في‬ ‫اشكال‬ ‫ثالث‬ ‫على‬ ‫وتوجد‬
:

‫المعيشة‬ ‫حرة‬ ‫ديدان‬
Free living nematodes

‫نباتية‬ ‫متطفالت‬
Plant Parasitic nematodes

‫حشرية‬ ‫متطفالت‬
Entomopathogenic nematodes

4. ‫حيوي؟؟‬ ‫عامل‬ ‫النيماتودا‬
4

5. ‫للحشرات‬ ‫الممرضة‬ ‫النيماتودا‬
(EPN)

‫االحيائ‬ ‫المكافحة‬ ‫برامج‬ ‫في‬ ‫الحاضر‬ ‫الوقت‬ ‫في‬ ‫وتستخدم‬ ‫عالية‬ ‫كفاءة‬ ‫ذات‬ ‫أنواع‬ ‫وتشمل‬
‫ية‬
‫يلي‬ ‫بما‬ ‫وتتميز‬
:
(
Gaugler 2006
)
.1
‫واسع‬ ‫نطاق‬ ‫على‬ ‫وحقليا‬ ‫مختبريا‬ ‫اكثارها‬
(
Mass production
.... )
3
.
‫الحقل‬ ‫في‬ ‫طويلة‬ ‫فتره‬ ‫والبقاء‬ ‫التكيف‬ ‫على‬ ‫العالية‬ ‫قدرتها‬
......
4
.
‫جدا‬ ‫قصيره‬ ‫فتره‬ ‫خالل‬ ‫العائل‬ ‫على‬ ‫القضاء‬ ‫على‬ ‫قابليتها‬
......
5
.
‫للحيوانات‬ ‫وكذلك‬ ‫والنبات‬ ‫لالنسان‬ ‫امنة‬ ‫طريقة‬ ‫تعتبر‬
......
. 2
‫البكتريا‬ ‫من‬ ‫االنواع‬ ‫بعض‬ ‫مع‬ ‫تكافلي‬ ‫بشكل‬ ‫تعيش‬
(
Symbiotic bacteria
....)

6. ‫األولي‬ ‫التشخيص‬
(
‫مورفولوجي‬
)
6
‫جدا‬ ‫مرن‬ ‫الجسم‬
(
soft
.......)
‫مميز‬ ‫بلون‬ ‫اليرقات‬ ‫تلون‬
.....
‫خاصة‬ ‫رائحه‬
.......

7. 7

8. 8

9. ‫النيماتودا‬ ‫تصنيف‬
Kingdom : Animalia
Phylum : Nematoda
Class :Secernentea
Order : Rhabditida
Family : Steinernematidae
Genus : Steinernema
Family : Heterorhabditidae
Genus : Heterorhabditis
9

10. 10

‫البكتري‬ ‫على‬ ‫تحتوي‬ ‫المعدية‬ ‫اليرقات‬
‫ا‬
.....

‫ال‬ ‫ودخول‬ ‫العائل‬ ‫على‬ ‫العثور‬
IJs
....

‫وتتكاثرها‬ ‫البكتريا‬ ‫تحرير‬ ‫يتم‬
.....

‫الجث‬ ‫على‬ ‫تحافظ‬ ‫مواد‬ ‫تفرز‬ ‫البكتريا‬
‫ة‬
.....

‫و‬ ‫رابع‬ ‫الى‬ ‫اليرقي‬ ‫الطور‬ ‫يتطور‬ ‫ثم‬
...
‫و‬
...
‫النيماتودا‬ ‫حياة‬ ‫دورة‬
‫الممرضة‬

11. ‫للنيماتودا‬ ‫العائلي‬ ‫المدى‬
Insect range of EPNs
11
‫النوع‬
S. Carpocapsea
‫من‬ ‫اكثر‬ ‫على‬ ‫قاتل‬ ‫تأثير‬ ‫له‬ ‫لوحده‬
250
‫الى‬ ‫تابع‬ ‫الحشرات‬ ‫من‬ ‫نوع‬
11
‫رتبة‬
(
‫مختبرية‬ ‫تجارب‬
...)
‫الـ‬ ‫طريقة‬ ‫وتستخدم‬ ‫التربه‬ ‫سطع‬ ‫قرب‬ ‫العائل‬ ‫عن‬ ‫تبحث‬ ‫النيماتودا‬ ‫من‬ ‫االنواع‬ ‫بعض‬
Ambusher
(
S. carpocapsea , S scapterisci
....)
‫بينما‬
‫الـ‬ ‫طريقة‬ ‫وتستخدم‬ ‫التربه‬ ‫اعماق‬ ‫في‬ ‫العائل‬ ‫عن‬ ‫تبحث‬ ‫النيماتودا‬ ‫من‬ ‫االنواع‬
Cruiser
(
H. bacteriophora, H. Indica
....)

12. “
12

13. 13

14. ‫النيماتودا‬ ‫عزل‬
Isolation of EPNs
14

‫الحقل‬ ‫تربة‬ ‫من‬ ‫عينات‬ ‫جمع‬
(
‫عمق‬
10
-
15
‫سم‬
...)

‫الحشرية‬ ‫المصائد‬ ‫تقنية‬ ‫استخدام‬
….Insect trap

‫للـ‬ ‫الرابع‬ ‫الطور‬ ‫يرقات‬ ‫تعريض‬
Wax worm
‫التربة‬ ‫على‬ ‫حاوية‬ ‫بالستيكة‬ ‫علبة‬ ‫داخل‬
......

‫المخ‬ ‫الظروف‬ ‫تحت‬ ‫البالستيكية‬ ‫العلب‬ ‫تحفظ‬
‫تبرية‬
2
-
3
‫ايام‬
......

‫الـ‬ ‫الى‬ ‫ذلك‬ ‫بعد‬ ‫المصابة‬ ‫اليرقات‬ ‫تنقل‬
White trap
‫لمدة‬
9
-
13
‫النيماتودا‬ ‫على‬ ‫للحصول‬ ‫يوم‬
....

‫المعق‬ ‫االسفنج‬ ‫باستخدام‬ ‫النيماتودا‬ ‫خزن‬ ‫يمكن‬
‫م‬
Satirized sponge
‫حرارة‬ ‫درجة‬ ‫تحت‬
8
-
10
‫م‬

15. 15
‫للنيماتودا‬ ‫المرافقه‬ ‫البكتريا‬ ‫عزل‬
Isolation of symbiotic bacteria

‫بعد‬ ‫البكتريا‬ ‫تعزل‬
36
-
48
‫يرقات‬ ‫من‬ ‫ساعه‬
Greater wax moth, Galleria mellonella

‫االيثانول‬ ‫باستخدام‬ ‫المصابة‬ ‫اليرقات‬ ‫تعقم‬
95
%
‫لمدة‬ ‫الكحول‬ ‫داخل‬ ‫اليرقه‬ ‫غمر‬ ‫طريق‬ ‫عن‬
1
‫دقيقة‬
..

‫الكابنيت‬ ‫داخل‬ ‫معقمة‬ ‫ادواة‬ ‫باستخدام‬ ‫اليرقه‬ ‫تشريح‬
Laminar
‫وتوزيعه‬ ‫الهيمولمف‬ ‫على‬ ‫للحصول‬
‫الغذائي‬ ‫الوسط‬ ‫داخل‬ ‫منتظم‬ ‫بشكل‬
(
NBTA
،
Macconkey agar
،
NA
..... )

‫حاضنة‬ ‫في‬ ‫االطباق‬ ‫تحفظ‬
(
28
‫م‬
)
‫ولمدة‬
48
‫البكتريا‬ ‫لنمو‬ ‫ساعه‬
........

‫المس‬ ‫الوسط‬ ‫نوع‬ ‫على‬ ‫اعتمادا‬ ‫بني‬ ‫الى‬ ‫اصفر‬ ‫او‬ ‫احمر‬ ، ‫مخضر‬ ‫ازرق‬ ‫بلون‬ ‫البكتريا‬ ‫تظهر‬
‫تخدم‬

‫للتشخيص‬ ‫والجزيئي‬ ‫المورفولوجي‬ ‫التشخيص‬ ‫طريقة‬ ‫تستخدم‬
.........

16. ‫النيماتو‬ ‫مع‬ ‫التعايشية‬ ‫البكتريا‬ ‫انواع‬
‫دا‬
16

17. ‫النيماتودا‬ ‫تطبيقات‬
‫للحشرات‬ ‫الممرضة‬
‫العراق‬ ‫في‬
17

18. 18
‫العينات‬ ‫جمع‬
Sampling

19. 19

20. 20
‫النيماتودا‬ ‫عزل‬
Isolation

21. ‫التشخيص‬
Identification
21

‫الشمع‬ ‫لدودة‬ ‫الرابع‬ ‫الطور‬ ‫يرقات‬ ‫تلقيح‬
G. mellonella
‫باستخدام‬
I00 Ijs
/
‫دش‬ ‫بتري‬ ‫داخل‬ ‫يرقة‬
(
9
‫ملم‬
...... )

‫متفاوته‬ ‫فترات‬ ‫بعد‬ ‫المصابة‬ ‫اليرقات‬ ‫تشريح‬
(
4
،
6
-
7
‫ايام‬
)
‫للنيماتودا‬ ‫والثاني‬ ‫االول‬ ‫الجيل‬ ‫ويرقات‬ ‫بالغات‬ ‫على‬ ‫للحصول‬
..
....

‫للنيماتودا‬ ‫المختلفة‬ ‫للمراحل‬ ‫ساليدات‬ ‫عمل‬
(
‫يرقات‬ ، ‫ذكور‬ ، ‫اناث‬
)
‫المج‬ ‫باستخدام‬ ‫مورفولجيا‬ ‫وتشخيصهما‬ ‫للجيلين‬
، ‫التشريحي‬ ‫هر‬
‫المركب‬ ‫المجهر‬ ‫و‬ ‫االنبوبي‬
......

22. 22

23. ‫التشخيص‬
Identification
23

‫الـ‬ ‫استخالص‬
DNA
‫الـ‬ ‫بواسطة‬ ‫اليدوية‬ ‫الطريقة‬ ‫باستخدام‬ ‫النيماتودا‬ ‫من‬
Chelex 5%
‫او‬
CTAB
‫بواسطة‬ ‫او‬
Kit
....

‫ال‬ ‫تقنية‬ ‫استخدام‬
Polymerize Chain Reaction (PCR)
‫الجينية‬ ‫القطعة‬ ‫برايمر‬ ‫باستخدام‬
ITS
‫و‬
…(Joyce, 1994 )18S

‫الـ‬ ‫استخدام‬
Positive and negative control
‫الـ‬ ‫من‬ ‫محصول‬ ‫كل‬ ‫في‬
PCR
‫القطعة‬ ‫لتاكيد‬ ‫االلكتروفورسز‬ ‫استخدام‬ ‫ثم‬ ‫ومن‬ ،
‫الجينية‬
(
‫الباند‬ ‫ظهور‬
....)

24. 24
Macrogen Korea Company

25. 25
Phylogenetic relationships based on
ITS…..
99% of similarities and 96% of
query coverage with Hb. (EF469774)

26. 26

27. 27
‫الظروف‬ ‫تحت‬ ‫االرضة‬ ‫شغاالت‬ ‫على‬ ‫للحشرات‬ ‫الممرضة‬ ‫للنيماتودا‬ ‫االمراضية‬ ‫القابلية‬
‫المختبرية‬

28. 28

29. 29

30. 30
‫للحشرات‬ ‫الممرضة‬ ‫للنيماتودا‬ ‫االمراضية‬ ‫القدرة‬
(
‫محلية‬
)
‫الفاكهة‬ ‫لذبابة‬ ‫التعذر‬ ‫قبل‬ ‫الطور‬ ‫على‬
Ceratitis capitata
‫الفاك‬ ‫لذبابة‬ ‫التعذر‬ ‫قبل‬ ‫يرقات‬
‫هة‬
..
‫نوعين‬ ‫مع‬ ‫مقارنة‬ ‫محلية‬ ‫نيماتودا‬
‫التجارية‬ ‫النيماتودا‬ ‫من‬
.....
‫العالية‬ ‫االمراضية‬ ‫قدرتها‬
....
‫وب‬ ‫بينها‬ ‫معنوية‬ ‫فروقات‬ ‫التوجد‬
‫ين‬
‫التجاري‬ ‫النوع‬ ‫نفس‬

31. Conclusion ‫الخاتمة‬

‫واستخدا‬ ‫التربة‬ ‫من‬ ‫عزلها‬ ‫يمكن‬ ‫مرضية‬ ‫مسببات‬ ‫للحشرات‬ ‫الممرضة‬ ‫النيماتودا‬
‫في‬ ‫مها‬
‫المكافحة‬
........

‫الحشرية‬ ‫االفات‬ ‫من‬ ‫واسع‬ ‫مدى‬ ‫على‬ ‫للسيطرة‬ ‫بنجاح‬ ‫استخدمت‬
.......

‫مختبريا‬ ‫اكثارها‬ ‫وتم‬ ‫وشخصت‬ ‫العراقية‬ ‫البيئة‬ ‫من‬ ‫عزلت‬
.........

‫وجزيئيا‬ ‫مورفولوجيا‬ ‫وشخصت‬ ‫للنيماتودا‬ ‫المرافقه‬ ‫البكتريا‬ ‫عزل‬ ‫تم‬
....

‫والحقلية‬ ‫المختبرية‬ ‫الظروف‬ ‫تحت‬ ‫االرضة‬ ‫حشرة‬ ‫مكافحة‬ ‫في‬ ‫بنجاح‬ ‫أستخدمت‬
.
.....

‫االب‬ ‫البحر‬ ‫ذبابة‬ ‫يرقات‬ ‫على‬ ‫االمراضية‬ ‫قابيلتيها‬ ‫لتقييم‬ ‫اولية‬ ‫تجارب‬ ‫هناك‬
‫يض‬
‫المتوسط‬
......

‫الطبي‬ ‫االعداء‬ ‫عزل‬ ‫على‬ ‫للتركيز‬ ‫االحيائية‬ ‫المكافحة‬ ‫مجال‬ ‫في‬ ‫للباحثين‬ ‫دعوة‬
‫عية‬
...
.. 31

32. ‫المصادر‬
References list
Al-Zaidawi, J. B., J. Karimi, and E. M. Moghadam. 2019. Molecular characterizations of the entomopathogenic
nematodes, Heterorhabditis bacteriophora and Oscheius myriophilus from Iraq. Egypt J. Biol. Pest. Control 29:
38.
Akhurst R, Smith K (2002) 15 regulation and safety. In: Gaugler R (ed)Entomopathogenic nematology, vol 1. CABI,
New York, pp 311–332
Bedding R, Akhurst R (1975) A simple technique for the detection of insect paristic rhabditid nematodes in soil.
Nematologica 21(1):109–110
Nguyen K, Hunt D (2007) Entomopathogenic nematodes: systematics, phylogenyand bacterial symbionts, vol 7
Nematology Monographs & Perspectives: Brill
Nguyen KB, Puza V, Mr acek Z (2008) Steinernema cholashanense n. sp.(Rhabditida,
Steinernematidae) a new species of entomopathogenic.
Lacey L, Grzywacz D, Shapiro-Ilan D, Frutos R, Brownbridge M, Goettel M (2015) Insect pathogens
as biological control agents: back to the future. J. Invertebr. Pathol. 132:1–41
Stock SP, Pryor BM, Kaya HK (1999) Distribution of entomopathogenic nematodes
(Steinernematidae and Heterorhabditidae) in natural habitats in California, USA. Biodivers.
Conserv. 8(4):535–549
32

33. 33
‫الصغائكم‬ ‫شكرا‬