1. ENA ViraStripe® IgG Диагностический набор для определения IgG
Иммунодиагностический метод для качественного обнаружения IgG-специфичных антител к ENA в человеческой сыворотке.
ENA ViraStripe® IgG использует ENA-специфичные экстрагируемые антигены клеточного ядра: Sm, Sm/RNP, SSA (ro), SSB (La), Scl-70 и Jo-1.
Каждая полоска имеет интегрированную систему контроля, включающую контроль сыворотки, контроль конъюгата и пороговый контроль.
Диагностический набор для определения IgG 50 тестов: № продукта: V-ENSGOK
Образец для тестирования: 20 мкл сыворотки
Время тестирования: 90 минут
Хранение/Стабильность: около 12 месяцев при 2-8 °C
Компоненты диагностического набора
50 полосок Полоски с антигенами, полоски из нитроцеллюлозы с системой контроля и ENA-специфичными антигенами в
аналитической секции; код полоски: EN, пронумерованны от 1-50 (№ продукта: V-ENSGAS)
9 мл Конъюгат щелочной фосфатазы против IgG человека, 10-кратный концентрат (№ продукта: V-UVNGKI)
100 мл Буфер для разведения/промывки, 10-кратный концентрат
(№ продукта: V-UVNUWP)
1 уп. Порошок для разведения/промывки (№ продукта: V-UVNUMP)
90 мл Раствор хромоген/субстрата, готовый к использованию (№ продукта: V-UVNUCS)
1 шт. Инструкция по применению диагностического набора ENA ViraStripe® IgG для определения IgG
2 шт. Протокол оценки диагностического набора ENA ViraStripe® IgG для определения IgG, с изображением полоски положительного
контрольного образца (PC EN)
Буфер для разведения/промывки, порошок для разведения/промывки и раствор хромоген/субстрата взаимозаменяемы между
различными ViraStripe ® и ViraBlot ® диагностическими наборами.
Доступны дополнительно:
0,33 мл ENA IgG Положительный контрольный образец, человеческая сыворотка, готовая к использованию (№ продукта: V- ENSGPK)
0,33 мл ENA IgG отрицательный контрольный образец, человеческая сыворотка, готовая к использованию (№ продукта: V- ENSGNK)
9 мл Конъюгат щелочной фосфатазы с антителами против IgМ человека, 10-кратный концентрат, жидкий (№ продукта: V- UVNMKI)
9 мл Конъюгат щелочной фосфатазы с антителами против IgА человека, 10-кратный концентрат, жидкий (№ продукта: V- UVNAKI)
Хранение и стабильность реактивов
Полоски с антигенами: полоски в закрытых упаковках устойчивы до истечения срока годности, если хранятся при температуре 2-8 °C. Плотно
закрывайте пакеты с не использованными полосками.
Конъюгат, 10-кратный концентрат: устойчив до истечения срока годности, если хранится при при температуре 2-8 °C
Рабочий раствор: использовать немедленно.
Буфер для разведения/промывки: концентрат и порошок: устойчив до истечения срока годности, если хранится при температуре 2-8 °C
Рабочий раствор буфера: 2 недели годен к использованию если хранится при температуре 2-8 °C.
Рабочий раствор буфера может быть сохранен в необходимых количествах в течение более длительного времени в замороженном состоянии.
Раствор хромоген/субстрата: устойчив до истечения срока годности, если хранится температуре 2-8 °C. Хранить в темном месте!
Подготовка реактивов и исследуемого образца
Перед использованием доведите все компоненты теста до комнатной температуры (20-25°C).
Полоски с антигенами:
Тщательно отделите требуемое число полосок при помощи пинцета. Касайтесь полосок пинцетом только в области маркировки.
Буфер для разведения/промывки (рабочий раствор):
Чтобы подготовить рабочий раствор буфера, разведите 10-кратный концентрат в пропорции1:10 дистиллированной водой (100 мл концентрата + 900
мл дистиллированной воды), добавьте порошок для разведения/промывки до полного растворения. Поместите рабочий раствор буфера на 10 - 15
минут на магнитную мешалку, pH = 7,5 ± 0,1.
Конъюгат (рабочий раствор):
Растворите необходимое количество 10-кратного концентрата согласно таблице (1): Раствор всегда готовится свежий во время процедуры
промывания (пункт 7 проведения теста).
Другие реактивы: готовы к использованию.
Образцы пациента:
Используйте 20 мкл неразведенной сыворотки на один тест
Дополнительно доступные контроли:
Используйте 100 мкл каждого положительного, порогового и отрицательного контроля, в неразведенном виде, на серию тестов.
1

2. Таблица 1: Разбавление конъюгатного рабочего раствора
Разбавитель /
Разбавитель /
Кол-во буферный Концентрат Конечный Кол-во Концентрат Конечный
буферный
полосок конъюгата объем полосок конъюгата объем
рабочий
рабочий раствор
раствор
1,35 мл 0,15 мл 1,5 мл 35,10 мл 3,90 мл 39,0 мл
1 + 26 +
2,70 мл 0,30 мл 3,0 мл 36,45 мл 4,05 мл 40,5 мл
2 + 27 +
4,05 мл 0,45 мл 4,5 мл 37,80 мл 4,20 мл 42,0 мл
3 + 28 +
5,40 мл 0,60 мл 6,0 мл 39,15 мл 4,35 мл 43,5 мл
4 + 29 +
6,75 мл 0,75 мл 7,5 мл 40,50 мл 4,50 мл 45,0 мл
5 + 30 +
8,10 мл 0,90 мл 9,0 мл 41,85 мл 4,65 мл 46,5 мл
6 + 31 +
9,45 мл 1,05 мл 10,5 мл 43,20 мл 4,80 мл 48,0 мл
7 + 32 +
10,80 мл 1,20 мл 12,0 мл 44,55 мл 4,95 мл 49,5 мл
8 + 33 +
12,15 мл 1,35 мл 13,5 мл 45,90 мл 5,10 мл 51,0 мл
9 + 34 +
13,50 мл 1,50 мл 15,0 мл 47,25 мл 5,25 мл 52,5 мл
10 + 35 +
14,85 мл 1,65 мл 16,5 мл 48,60 мл 5,40 мл 54,0 мл
11 + 36 +
16,20 мл 1,80 мл 18,0 мл 49,95 мл 5,55 мл 55,5 мл
12 + 37 +
17,55 мл 1,95 мл 19,5 мл 51,30 мл 5,70 мл 57,0 мл
13 + 38 +
18,90 мл 2,10 мл 21,0 мл 52,65 мл 5,85 мл 58,5 мл
14 + 39 +
20,25 мл 2,25 мл 22,5 мл 54,00 мл 6,00 мл 60,0 мл
15 + 40 +
21,60 мл 2,40 мл 24,0 мл 55,35 мл 6,15 мл 61,5 мл
16 + 41 +
22,95 мл 2,55 мл 25,5 мл 56,70 мл 6,30 мл 63,0 мл
17 + 42 +
24,30 мл 2,70 мл 27,0 мл 58,05 мл 6,45 мл 64,5 мл
18 + 43 +
25,65 мл 2,85 мл 28,5 мл 59,40 мл 6,60 мл 66,0 мл
19 + 44 +
27,00 мл 3,00 мл 30,0 мл 60,75 мл 6,75 мл 67,5 мл
20 + 45 +
28,35 мл 3,15 мл 31,5 мл 62,10 мл 6,90 мл 69,0 мл
21 + 46 +
29,70 мл 3,30 мл 33,0 мл 63,45 мл 7,05 мл 70,5 мл
22 + 47 +
31,05 мл 3,45 мл 34,5 мл 64,80 мл 7,20 мл 72,0 мл
23 + 48 +
32,40 мл 3,60 мл 36,0 мл 66,15 мл 7,35 мл 73,5 мл
24 + 49 +
33,75 мл 3,75 мл 37,5 мл 67,50 мл 7,50 мл 75,0 мл
25 + 50 +
Проведение теста:
Ополоснуть инкубационную ванну буфером для Маркировать ванну водостойким маркером. Ополаскивание буфером удаляет
1. разведения/промывки и удалить раствор. загрязнения.
Разместить по одной полоске в каждый канал. Разместите по одной полоске для каждого контроля и образца пациента, в
2. отдельный канал инкубационной ванны пинцетом. Маркировка полосок должна
находиться лицевой стороной вверх.
Добавить в каждый канал по 1.5 мл буфера и инкубировать в Визуально удостоверьтесь, что полоски полностью смочены и не плавают
3. течение 5 минут при комнатной температуре на шейкере. частично на поверхности буфера. Используйте шейкер с частотой колебаний 40
циклов/мин.
Добавить 20 мкл каждого образца пациента или 100 мкл Наносите при помощи пипетки контроль и образцы непосредственно на ярлыки
4. каждого контроля соответственно. стрипов, во время колебаний шейкера.
Инкубировать на шейкере в течение 30 минут при комнатной
5. температуре.
Удалить жидкость Полоски прилипают к дну каналов инкубационной ванны. Тщательно удалите
6. оставшуюся жидкость на фильтровальную бумагу.
Промывка: 3 раза по 5 минут: добавьте 1.5 мл буфера для При промывке приготовьте раствор конъюгата согласно таблице 1. Тщательно
7. разведения/промывки, инкубируйте в течение 5 минут, удалите оставшуюся жидкость на фильтровальную бумагу.
полностью удалите жидкость.
Пипеткой нанести 1.5 мл свежего рабочего раствора Визуально удостоверьтесь, что полоски полностью покрыты раствором
8. конъюгата в каждый канал конъюгата..
Инкубировать в течение 15 минут, на шейкере, при комнатной
9. температуре
Удалить жидкость
10.
Промывка: 3 раза по 5 минут, как описано в пункте 7. Тщательно удалите оставшуюся жидкость на фильтровальную бумагу.
11.
Добавить дистиллированную воду 1.5 мл
12.
Инкубировать в течение 1 минуты, на шейкере, при
13. комнатной температуре
Удалить жидкость Тщательно удалите оставшуюся жидкость на фильтровальную бумагу.
14.
Добавить 1.5 мл раствора хромоген/субстрата Визуально удостоверьтесь, что полоски полностью покрыты раствором
15. хромоген/субстрата.
Инкубировать на шейкере: Остановите реакцию, как только полоса порогового контроля (cut off)
16. ENA IgG: 5 - 15 минут станет четко видима. Внимание:Превышение срока инкубации приводит к
появлению фоновых пятен.
полоса контроля для IgG, соотв. IgM в секции контроля.
Остановить реакцию, удалить жидкость. Тщательно удалите оставшуюся жидкость на фильтровальную бумагу
17.
2
Промыть три раза с 1.5 мл. дистиллированной воды Не инкубировать.
18.
Высушить полоски для интерпретации результатов теста Изъять влажные полоски из каналов, используя пинцет. Разместите влажные
19. полоски на фильтровальной бумаге и высушите на воздухе перед
интерпретацией результатов теста.

3. Принцип теста
При помощи ENA ViraStripe® могут быть определены ENA-специфические антитела в человеческой сыворотке.
Специфические антитела связываются с закрепленным на полоске антигеном в течение инкубации с сывороткой. Конъюгат щелочной фосфатазы
связывается с комплексом антиген-антитело в течение инкубации с конъюгатом. Щелочная фосфатаза конвертирует хромоген/субстрат и окрашивает
комплекс антиген-антитело на полоске в фиолетовый цвет.. Процедуры промывки между инкубацией с сывороткой, конъюгатом - и хромоген/субстратом
удаляют не прореагировавшие реактивы.
Иммунодиагностический метод с интегрированной системой контроля:
Зеленая разделительная линия делит полоску на секцию контроля и секцию анализа. Секция контроля включает контроль сыворотки и три контроля
конъюгата (IgG, IgA, IgM). Секция анализа включает в себя ENA - специфичные антигены.
Оценка
Подготовить протокол оценки: Регистрируйте данные в протоколе оценки. Приклейте полоски в протокол или
прикрепите их липкой лентой. Разместите зеленую линию разделения точно на
напечатанную линию разделения в протоколе.
Действительность теста: Тест считается действительным если полосы функционального контроля и полосы
контроля конъюгата и полосы порогового контроля для каждой полоски четко
определяются.
В случае, если нет реакции хотя бы одного из этих контролей, тест считается
недействительным и должен быть повторен с соблюдением всех необходимых
условий, описанных в инструкции.
Не оценивайте недействительные полоски.
Оценка образцов пациента Протокол оценки включает в себя отпечатанную полоску положительного контроля
(с маркировкой PC EN). Выровняйте разделительные линии полосок пациента и
полоски положительного контрольного образца. Положение полосы показано на
полосках положительного контроля. Оцените полосы на полосках пациента, и
отметьте их в протоколе.
Не определенные полосы не должны оцениваться.
Оценка полосы при помощи порогового В соответствии с лабораторными качественными методиками, пороговый контроль
контроля: должен использоваться для каждой серии испытаний (11).Полоса порогового
контроля интегрирована в контрольной секции каждой диагностической
полоски
Интенсивность контрольной полосы устанавливает границу оценки полос.
Полосу считается реактивной, если ее интенсивность равна или выше чем
интенсивность полосы порогового контроля. Реактивные полосы отмечаются
знаком X в протоколе.
3

4. Оценка исследуемых образцов пациентов
Полосы нужно рассматривать как симптомы заболевния. Для заключительного клинического диагноза все результаты этого и других испытаний должны
быть коррелированы с историей болезни, эпидемиологическими данными и другими данными, доступными лечащему врачу.
.Антигены Sm, Sm/RNP, SSA (Ro), SSB (La), Scl-70, Jo-1 характеризуются как специфичные для ENA. Дополнительные нехарактерные полосы могут
появляться, но они не оцениваются.
IgG ENA ViraStripe®:
Идентифицированные полосы / kD Результат Интерпретация
Нет полос Отрицательный Специфических антител против ENA не обнаружено
Положительный
Одна четкая полоса или более Обнаружены IgG-антитела к соответствующему антигену.
Признак аутоиммунного заболевания, связанного с
соответствующим ENA-антителом.
Клиническая корреляция ENA - антител
1. Sm: Обнаруживается примерно у 25-30% пациентов с системной Lupus erythematodes (SLE) (17).
2. Sm/RNP: Обнаруживается примерно у 30-40% пациентов с системной Lupus erythematodes (SLE) соотв. у 95% пациентов со смешанным коллагенозом
(MCTD) (17). Примечание: Sm-положительные пробы могут дополнительно реагировать с полосой Sm/RNP. Эта полоса включает оставшиеся эпитопы
Sm, дополнительного к основному антигену RNP.
3. SSA (Ro): Обнаруживается примерно у 90-95% пациентов с Sjögren-Syndrom (SS), у 25-60% пациентов с системной Lupus erythematodes (SLE), соотв.
у 3-10% пациентов с ревматоидным артритом (РА) (17), у 4% пациентов с PBC, у 1% клинически здоровых пациентов.
4. SSB (La): Обнаруживается примерно у 60% пациентов с Sjögren-Syndrom (SS), соотв. у 9-35% пациентов с системной Lupus erythematodes (SLE) (17).
5. Scl-70: Обнаруживается примерно у 40% пациентов с прогрессивной системной склеродермией (PSS) (17).
6. Jo-1: Обнаруживается примерно у 60% пациентов с полимиозитом (PM), у 13% пациентов с дерматомиозитом (DM), соотв. у 43% пациентов с
совмещенным PM / DM-синдромом (17).
Параметры выполнения
Всеобъемлющие накопленные данные для аналитической и диагностической чувствительности и специфичности, воспроизводимости анализируемого
образца, могут быть предоставлены по запросу.
Предупреждения и предосторожности
1. Все компоненты человеческой сыворотки в наших продуктах были протестированы и оказались отрицательными к ВИЧ-антителам и Hepаtitis C-
антителам и Hbs-антигенам. Однако все компоненты человеческого комплекта, а также пробы пациентов, нужно считать потенциально
инфекционными, и соответственно аккуратно обращаться с ними.
2. Не капать из пипетки с использованием рта.
3. Носите при работе одноразовые перчатки.
4. Не ешьте, не пейте и не курите в рабочей области.
5. Конъюгаты содержат азид натрия 0,1%, контрольные группы и разбавителя / буфер для промывки содержат 0,02% тимеросал: Внимание: вреден для
здоровья. Промойте большим количеством воды после контакта с кожей или глазами. Ядовит при глотании! (см. спецификации по безопасности).
6. Раствор хромогена/субстрата содержит BCIP и NBT. Избегите контакта с кожей и глазами. В случае контакта с кожей и глазами, промойте большим
количеством воды.
7. Образец для тестирования и все потенциально загрязненные материалы должен быть очищен от загрязнений, используя установленные
лабораторные методы, например, обработку в течение 20 минут в автоклаве при 121,5°C. Жидкие отходы могут быть смешаны с гипохлоритом
натрия, до получения конечной концентрации 1%-ого гипохлорита натрия. Выдержать 30 минут для окончательной дезинфекции.
Литература:
1. Eng М. Tan „Антиядерные Антитела: ... „; Acad. Press Inc (1989). 2. Berg A. „AutoAk bei chron. Lebererkrankungen: .. „; Klin. Lab. (09/93). 3. Thomas L.,
Labor и Diagnose, TH- TH-Books Verlagsges. Frankfurt, 5. Auflage (1998). 4. Ngujen Bao T., Markovits, „ Атлас ANA “, Forlab sa (1991). 5. Bzzi Pierluigi E.,
Morris Reichlin „Системный автоиммунитет“, Деккер (1991). 6. Peter „Klinische Immunologie“, Urban и Schwarzenberg (1991). 7. Sönnichsen, E. Apostoloff
„Autoimmunkrankheiten“, Gustav Fischer Verlag (1992). 8. Storch, „Immunfluoreszenzfibel“, G Gustav Fischer Verlag Jena (1979). 9. Dhillon B. „Различная
сверхэкспрессия hsp и ... „, Annals of the Rheum. Diseases, 52 (1993). 10. Lee и др „Anticentromere antibodies ... „, Annals of the Rheum. Diseases, 52 (1993). 11.
Reimer „Immunolocalization 7-2 Ribonucleoprotein.. “ Acad. Press, Inc (1988). 12. Swaak J. G. .„Antinuclear antib. in routine analysis ...“, Annals of the Rheum.
Diseases, 52 (1993). 13. Jahrestagung der Deutschen Gesellschaft für Rheumatologie 28.09.-01.10.94 14. Mühlen C., E. Tan: „Autoantib ... “, Семинары по артриту
и ревматизму, 24 (1995). 15. ARAD-DANN H., Автоантитела ... “, Журнал по иммунологии, издание 138, 8 (1987). 16. Klein, Berg, Лаборатория. Медиана
13 p 220-226 (1989). 17. Mühlen C.A., E.M. Tan, Автоантитела при диагнозе системных ревматизмов, Семинары по артриту и ревматизму, Том 24, Номер
5, стр. 323-358 (1995). 18. ABEL Die Bewertung diagnostischer Tests; Stuttgart: Hippokrates-Verl., (1993). 19. RILI-BÄK: Bäk-Richtlinie zur Qualitätssicherung
quantitativer laboratoriumsmedizinischer Untersuchungen (1.1.2001)
www.bundesaerztekammer.de.
4