Recombinant coagulation factors - Faktoret koagulues rekombinant

UNIVERSITETI I PRISHTINËS
Fakulteti i Mjekësisë
Departamenti i Farmacisë
Faktorët koagulues rekombinant
Prishtinë, 2016
Zeqir Kryeziu

• Hyrje
• Barnat rekombinante ndaj Hemofilisë (FVIII dhe FIX
deficienca)
• Sëmundja von Willebrand dhe trajtimi saj
• FVII deficienca
• FXIII deficienca
• Terapia e së ardhmes për indikacionet e njejta
• Konkluzionet
Përmbajtja

Faktorët koagulues dhe kaskada koaguluese
• Vazokonstriksioni
• Tapa trombocitare (adhesion, lirim i mediatoreve, agregim)
• Koagulimi

Zimogjenet e Serine
Proteazave
Aktiviteti
Faktori XII
Lidhet ne kolagjenin e ekspozuar ne vendin e lenduar te enes se gjakut, aktivizohet nga
HMW kininogen and kallikrein
Faktori XI Aktivizohet nga faktori XIIa
Faktori IX Aktivizohet nga faktori XIa ne prezence te Ca2+
Faktori VII Aktivizohet nga Trombina ne prezence te Ca2+
Faktori X
Aktivizohet ne siperfaqe te plateleve te aktivizuara - nga Tenase complex, dhe nga faktori
VIIa in prezence te faktorit indor TF dhe Ca2+
Faktori II Aktivizohet ne siperfaqe te plateleve te aktivizuara nga Prothrombinase complex
Faktori VIII
Aktivizohet nga Trombina ; faktori VIIIa eshte kofaktor ne aktivizimin e faktorit X nga faktori
IXa
Faktori V
Aktivizohet nga Trombina; faktori Va eshte kofaktor ne aktivizimin e Protrombines nga
faktori Xa
Faktori III (TF
faktori indor)
Eshte glikoproteine membranore subendoteliale, e cila vepron si kofaktor per faktorin VII
Fibrinogjeni Aktivizohet nga trombina
Faktori I Shkeputet me veprim te trombines per te formuar koagulin e fibrines
Faktori XIII
Aktivizohet nga Trombina ne prezence te Ca2+; stabilizon rrjeten e fibrines me lidhje
kovalente (covalent cross-linking )
Faktori von
Willebrand
Gjendet ne indin lidhor subendotelial dhe si i lire;

Hemofilia
• Hemophilia ~ Haima + philia = semundja e gjakut
• Historiku i njohjes se Hemofilise:
o Talmud – (shek. II AD) – vdekjet nga gjakderdhjet pas procedurës së circumcisionit.
o Albucasis- (shek XII) - vdekja e meshkujve të një familje, pas ndonjë lëndimi të vogël.
o John Otto (1803) – sëmundja ka lidhshmëri me gjininë dhe trashëgiminë.
o Mbretëresha Viktoria (1837-1901)
• Llojet e Hemofilise:
o Hemofilia A
o Hemofilia B
Mejia-Carvajal, C., Czapek, E. E., Valentino, L.A. (2006). Life expectancy in hemophilia outcome. Journal of Thrombosis and
Haemostasis, 4, 3, 507–509. | National Hemophilia Foundation.

Hemofilia A
• Sëmundje trasheguese recesive – kromozomi X (Xq28)
• Deficienca e FVIII
• Frekuenca 1:10000 lindje të gjalla – kryesisht tek meshkujt.
Pathophysiology: The Biologic Basis for Disease in Adults and Children, ed 6 Copyright © 2010

Faktori VIII koagulues
• Sintetizohet në hepatocite si
polipeptid prej 2332 aminoacideve
sipas domeneve
A1-a1-A2-a2-B-a3-A3-C1-C2
• Në gjak qarkullon si heterodimer:
LC (80 kDa) dhe HC (90-200 kDa)
• Stabilizohet me vWF–multimer (1:50)
• Aktivizohet nga Trombina
(R~372,740,1689) dhe jep
heterotrimer A1~A2~LC
• Mutacionet: R372, S373, R1689, Y365,
C364 mos aktivizim nga Trombina
• Mutacionet: Y1680  F (Phe) –
humbet afiniteti per vWF.
• Nëse në S-S loops ndërrohet ndonjë
C me G përkeqësohet sekretimi.
vWF
22 Cys
7 S-S loop
25 Asn
6 Tyr- S

Barnat rFVIII
Linjat qelizore:
• CHO- Chinese Hamster Ovary
• BHK- Baby Hamster Kidney
• HEK293 - Human Embryonic Kidney 293
• Saccharomyces cerevisiae

• RECOMBINATE®
• Octocog alfa
• Baxter
• Linja qelizore - CHO
• Përbërësit:
Albuminë (humane), kalcium, polietilenglikol,
natrium, histidine, rFVIII-polisorbat-80, rvWF – i
bashkekspresuar (2ng/IU)-vetëm në fazë të
prodhimit-pastaj separohet/purifikohet.
• Rikonstituimi: Ujë I sterilizuar për injeksion
• Indikacionet: Parandalim i gjakderdhjeve tek
personat me Hemofili A (para se t’i
nënshtrohen ndërhyrjeve kirurgjike) dhe për
mbajtjen nën kontroll të episodeve
hemorragjike
• Aprovimi: 10 dhjetor, 1992 (FDA)
• ADVATE® ADYNOVATE®
• Octocog alfa ~ Octocog alfa – PEG
• veprim i shkurtë ~ veprim i gjatë
• Baxter
• Përbërësit:
pH: NaCl, CaCl2 , histidine,
Tris(mtoksimetil)aminometan, Mbushës Manitol,
Surfaktant: polisorbat-80, Agjent reduktues :
glutation, Stabilizues: trehaloze.
• Aprovimi: 25 korrik, 2003 (FDA)
• 2 mars, 2004 (EMA)

• Helixate® FS (Formulated with Sucrose)
• Octocog alfa
• ZLB Behring
• Linja qelizore - BHK
• Përbërësit: Surfaktant: polisorbat-80,
Stabilizues: saharoze-28mg/shishe, histidine,
glicine, perberes joaktiv: Na+ Cl- Ca2+ dhe sasi
të vogla: Imidazole, tri-n-butil fosfat, dhe Cu2+.
• Aprovimi: 4 gusht, 2000 (EMA)
• Kogenate® FS (Formulated with Sucrose)
• Octocog alfa
• Bayer
• Përbërësit:
Surfaktant: polisorbat-80, Stabilizues: saharoze-
28mg/shishe, histidine, glicine, perberes joaktiv:
Na+ Cl- Ca2+ dhe sasi te vogla: Imidazole, tri-n-butil
fosfat, dhe Cu2+. (perberesit e njejte me Helixate®
FS)
• Aprovimi: 25 shkurt, 1993 (FDA)
• 4 gusht, 2000 (EMA)

• Refacto® AF (Albumin Free)
• Moroctocog alfa
• Wyeth dhe Pfizer
• moroctocog alfa 170kDa me 1438
aminoacide - BDD-rFVIII
• Përbërësit: Surfaktant: NaCl, saharozë,
L-histidinë, CaCl2, dhe polisorbat-80.
• Rikonstituimi: Me tretësirë fiziologjike
NaCl 0.9%
• Aprovimi: 13 prill, 1999 (EMA)
• 6 mars, 2000 (FDA)
• NUWIQ®
• Simoctocog alfa
• Octapharma
• Linja qelizore – HEK (293F) (me adenovirus)
• BDD-rFVIII (Glikoproteine heterodimer) 170kDa-
(90kDa HC dhe 80kDa LC) 1440 aa
• Përbërësit: Saharozë ,NaCl,CaCl2 dihidrat, argininë
HCl, Citrat Na dihidrat, Poloksamer 188
Rikonstituimi: ujë për injeksion
• Aprovimi: 24 korrik, 2014 (EMA)
• 15 shtator, 2015 (FDA)
I sulfatuar
ne Tyr1680
I mungojne
epitopet:

• ELOCTATE®
• Efmoroctocog alfa
• Biogen Inc.
• Linja qelizore - HEK
• BDD-rFVIII-Fc fusion protein: Fragmenti
kristalizabel (Fc) i IgG1 i lidhur me lidhje
kovalente per BDD-rFVIII. (Aminoacidet e
BD kane mbetur vetem 14aa si lidhese te
LC-HC)
• 220 kDa, 1890 aminoacide
• Ka kohë veprimi të gjatë.
• Përbërësit: saharoze, NaCl, L-histidine,
CaCl2, dhe polisorbat-20.
• Aprovimi: 6 qershor 2014 (FDA)
• 19 nëntor, 2014 (EMA)
(Video)

• AFSTYLA®
• Lonoctocog alfa
• CLS Behring
• Linja qelizore – CHO
• Është faktori i parë dhe i vetmi deri më tani i dizajnuar si një-vargor (single chain), ka të fshirë
sekuencën 765-1652aa (duke mbetur 24aa të B-domenës dhe duke u hequr 4aa të pjesës
acidike a3).
• LC dhe HC janë të lidhur me lidhje kovalente në një varg të vetëm. E cila ka stabilitet më të madh
pasi i rritet afiniteti për faktorin vW (krahasuar me rFVIII me gjatësi të plotë).
• Ka 1445 aminoacide
• Ka një vend të ri N-glikozilues në vendin e lidhjes LC-HC, kurse modifikimet tjera post-
translacionare janë të krahasueshme me rFVIII me gjatësi të plotë.
• Ka kohë veprimi të gjatë .
• Përbërësit: saharozë, NaCl, L-histidinë, CaCl2, dhe polisorbat-80 dhe Rikonstituimi: ujë I sterilizuar
• Aprovimi: 2016 nga FDA dhe Health Canada
• Shumë afër të aprovohet edhe nga EMA
(Video)

• NOVOEIGHT®
• Turoctocog alfa
• Novo nordisk
Përbërësi aktiv i Novoeight është analog
rekombinant i FVIII më masë molekulare 166kDa
pa I perfshirë modifikimet post-traslacionare.
rFVIII është glikoproteinë që përmban LC dhe HC,
me 21 prej 908 aminoacideve te B-domenës të
FVIII endogjen
• Përbërësit: NaCl, L-histidine, saharozë,
polisorbat 80, L-metioninë dhe CaCl2 dihdrat
Rikonstituimi: ujë për injeksion
• Aprovimi: 15 tetor, 2013 (FDA)
• 13 nëntor, 2013 (EMA)
• KOVALTRY®
• Octocog alfa
• Bayer
• Përbërësit: Glicine, saharoze, NaCl, CaCl2,
histidine dhe polisorbat 80.
Gjeni që kodon rFVIII në linjën qelizore BHK është I
futur së bashku me gjenin për HSP70. Proteina
HSP70 është proteinë intracelulare që përmirëson
palosjen(folding) të proteinës rFVIII.
• Aprovimi: 16 mars, 2016 (FDA)
• 18 shkurt, 2016 (EMA)

• XYNTHA®
• Moroctocog alfa
• moroctocog alfa 170kDa me 1438
aminoacide
• Xyntha prodhohet me te njejtin modul sikur
Refacto por ka me te avancuar dhe me te
sigurt procesin e pastrimit (separation)
• Përbërësit:
NaCl, saharozë, L-histidinë, CaCl2, dhe
polisorbat-80.
• Rikonstituimi: NaCl 0.9%
• Aprovimi: 21 shkurt, 2008 (FDA)
• OBIZUR®
• Susoctocog alfa
• Baxalta
• rpFVIII 170kDa aminoacide
• Analog rekombinant i porcinë-
FVIII(pFVIII). Ka 170kDa: HC 90kDa dhe LC
80kDa. B-domena është zëvendësuar me
24 aminoacide që janë edhe lidhës
ndërmjet HC dhe LC
• Përbërësit:
NaCl, Tris-baze, Tris-HCl, CaCl2 dehydrate,
saharoze, dhe polisorbat 80.
Rikonstituimi: ujë I sterilizuar për injeksion
• Aprovimi: 23 tetor, 2014

Faktori VII-struktura, funksioni & rFVII
• Është faktor koagulues i varur nga Vit. K
• Sintetizohet në hepatocite si polipeptid
(proenzim) një vargor prej 406
aminoacideve me peshë rreth rreth
50kDa, me dy vende potenciale për N-
glikozilim.
• N-terminusi –TF dhe membrana
• C-terminusi – pjesa katalitike
• Në gjak qarkullon si formë jo aktive:
aktivizohet nga TF i cili hidrolizon
Arg152-Ile153, ketu formohen LC-
20kDa(152aa) dhe HC-30kDa(254aa) te
cilat lidhen me Cys-Cys.
• Kompleksi TF-FVIIa është aktivizues i
FX në kaskadën ekstrinsike.
• Deficiti I trashëguar është shumë I
rrallë: 1/500 000 persona dhe nuk lidhet
me gjini apo etni. (Kromozomi 13)
• NovoSeven®
• Eptacog alfa
• Novo nordisk
• Ekscepientet: NaCl, CaCl2 dihdrat,
Glicerilglicinë-pufer dhe sub. mbushëse,
polisorbat 80, manitol, saharoze, L-
metioninë.
• Rikonstituimi: 10mmol L-histidinë ne ujë për
injeksion në temperaturë të freskët 2-8 oC
• Aprovimi: 23 shkurt, 1996 (EMA)
• 25 mars, 1999 (FDA)
• Indikacionet: Hemofili A&B, hemofili e fituar,
deficit i FVII, Glanzmann’s thrombasthenia
• Nuk ka të dhena për inhibim nga antitrupat.

Hemofilia B - Faktori IX-struktura dhe funksioni
• Hemofilia B është sëmundje trashëguese recesive – kromozomi X
(27.1) –deficiti i FIX
• Sintetizohet në hepatocite si polipeptid një vargor prej 415
aminoacideve me peshë rreth 52kDa.
• N-terminusi –Gla domena, EGF1, EGF2 LC
• C-terminusi –pjesa katalitike Serin-proteazë HC
• Në gjak qarkullon si formë jo aktive: aktivizohet nga TF-FVIIa ne
rrugen intrinsike i cili hidrolizon Arg192 dhe Ile226, duke e hequr
fragmentin prej 35aa, kurse ne rrugën ektrinsike aktivizohet nga XIIa.

• RIXUBIS®
• Nonacog gamma
• Baxalta
• nonacog alfa 55kDa 415 aa njevargore
• Përbërësit:
L-histidinë, NaCl, CaCl2 , glicinë, manitol, saharozë,
polysorbat 80.
• Aprovimi: 26 qershor, 2013 (FDA)
• 19 dhjetor, 2014 (EU)
• BeneFix®
• Nonacog alfa
• nonacog alfa 55kDa 415 aminoacide
polipeptid njëvargor
• Përbërësit:
Histidinë, glicinë, saharozë,polysorbat 80.
• Aprovimi: 27 gusht, 1997 (EMA)
• 2 nentor, 1997 (FDA)
Barnat rFIX

• ALPROLIX®
• Eftrenonacog alfa
• Biogen Inc
• Linja qelizore - HEK
• Fc-fusion rFIX : Fragmenti kristalizabel (Fc) i
IgG1 i lidhur me lidhje kovalente per
BDD-rFIX.
• 867 aminoacide dhe perafersisht 98 kDa.
• Përbërësit:
NaCl, Histidinë, manitol, saharozë,polisorbat 20.
• Aprovimi: 2014

Mekanizmi i riciklimit te Alprolix®
Mekanizem te ngjashem riciklimi ka edhe Eloctate®

• IDELVION®
• Albutrepenonacog alfa
• CLS Behring
• Albumin Fusion protein (rFIX-FP)
• Gjenet per Albuminen dhe rFIX jane te ko-
ekspresuara (1018 aminoacide)
• Përbërësit:
Citrat natriumi, polisorbat 80, manitol dhe
saharozë.
• Aprovimi: 4 mars, 2016 (FDA)
• IXINITY®
• Trenonacog alfa
• Inspiration, Ipsen Pharma, Emergent
• 55kDa, 415 aminoacide njevargore
• Përbërësit:
Histidinë, manitol, trehalozë dihidrat, NaCl
saharozë, polisorbat 80.
• Aprovimi: 29 prill, 2015 (FDA)

Faktori vW-struktura, funksioni dhe rvW
• Është makromolekulë që më së shumti
gjendet në formë multimeri.
• Sintetizohet nga qelizat e endotelit dhe
megakariocitet.
• Deficiti I trasheguar i rrallë: 1/10 000;
mutacione të kromozomit 12 dhe
pseudogjeneve në kromozomin 22
• Si terapi para produktit të teknologjisë
rekombinante – Desmopresina
• Adhesion dhe stabilizim të FVIII
• Vonvendi ®
• Vonicog alfa
• Baxalta/Baxter
Ekscepientet: tri-citrat natrium-dihidrat, CaCl2
dihdrate, glicinë, polysorbat 80, manitol,
trehalozë-dihidrat.
• Rikonstituimi: ujë të sterilizuar për
injeksion
• Indikacionet: von Willebrand disease
• Aprovimi: 8 dhjetor, 2015
• Nuk është raportuar për krijim të
antitrupave inhibitore ndaj Vonvendi®

• Tretten® (US dhe Canada)
• Novothirteen® (EU dhe CH)
• Catridecacog
• Novo nordisk
• Linja qelizore – Saccharomyces cerevisiae
• FXIII A2 – homodimer
• Ekscepientët: NaCl, polisorbat 20, saharozë,
L-histidinë.
• Rikonstituimi: ujë të sterilizuar për injeksion
• Indikacionet: hemorragji të shkaktuara nga
deficiti I trashëguar i FXIII
• Aprovimi: 3 shtator, 2012 (EMA)
• 3 dhjetor, 2013 (FDA)
• 26 mars, 2015 (PMDA)
• Është enzime transglutaminazë.
• Në gjak qarkullon si tetramer A2B2
me 325kDa.
• Të hemostazë – rol në stabilizimin e
rrjetës së fibrinës-cross-linking
Faktori XIII-funksioni, struktura dhe rFXIII

Prespektiva e së ardhmes
• Terapia me gjene (Gene therapy):
 Adeno viral vectors
 Retro viral vectors
 Adeno-associated vectors
 CMV vectors
• Kafshët dhe bimët transgjenike-ku pastaj separohen me kromatografi me afinitet me
antitrupa monoklonal.
• Imunoglobulinat rekombinante: Clotting factor mimetics, antitrupat bi-specifik,
• Ligandet që bllokojnë antitrupat e krijuar ndaj faktorëve koagulues.

Strategjia e sintezës së ligandeve kundër inhibitorëve
të faktorëve koagulues rekombinant

I can give you
more than milk
Kafshët dhe bimët transgjenike

Konkluzionet
• Faktorët koagulues rekombinant kanë përparësi në përdorim, duke I
krahasuar me faktorët e nxjerrë nga plazma humane, sepse nga
faktorët koagulues të nxjerrë nga plazma humane janë përhapur
shumë virusë përmes transfuzioneve: Hepatitet, HIV, Creutzfeldt–
Jakob etj.
• Me përdorimin e faktorëve koagulues rekombinant kursehen resurset
humane.
• Terapia me gjene dhe kafshët transgjenike kanë përparësi për shkak
se nuk janë aq të limituar për nga sasia e prodhimit të këtyre
produkteve.

Referencat :
1. Lee CA, Berntorp E, Hoots K, Yoshioka A. Textbook of hemophilia. 3rd ed.
London, United Kingdom: Wiley-Blackwell; 2014
2. Crommelin DJA, Sindelar RD. Pharmaceutical biotechnology: an introduction
for pharmacists and pharmaceutical scientists. 3rd ed. London: Routledge;
2008.
3. Gad SC. Handbook of pharmaceutical biotechnology. Hoboken, NJ, USA:
Wiley-Interscience; 2007.
4. Pipe SW. Hemophilia: New Protein Therapeutics. Hematology.
2010Jan;2010(1):203–9.
5. Ngo JCK, Huang M, Roth DA, Furie BC, Furie B. Crystal Structure of Human
Factor VIII: Implications for the Formation of the Factor IXa-Factor VIIIa
Complex. Structure. 2008;16(4):597–606.
6. Products List Page - Pharmacodia [Internet]. Products List Page - Pharmacodia.
[cited 2016Jun1]. Available from:
http://en.pharmacodia.com/web/drug/q_3_2352.html

Recombinant coagulation factors - Faktoret koagulues rekombinant

Recommended

Recommended

More Related Content

Featured

Featured (20)

Recombinant coagulation factors - Faktoret koagulues rekombinant