Rentat pool de plaquetes amb sistema sepax

1. RENTAT DE POOL DE PLAQUETES AMB
SISTEMA SEPAX BIOSAFE
16 de novembre del 2019
AUTORS: Olga Magallón Pedrera, María Isabel Martín Domínguez, Marta
Raventós de la Fuente, Laura Ruiz Jacob, Almudena Soriano Ruiz
LABORATORI D’ELABORACIÓ DE COMPONENTS SANGUINIS

2. El rentat de pools de plaquetes és una tècnica que s’utilitza per
eliminar les proteïnes plasmàtiques romanents en aquest
component. D’aquesta manera, els pacients que han sofert algun
tipus de reacció anafilactoide en anteriors transfusions poden
rebre una nova transfusió minimitzant aquell tipus de reacció.
Actualment, aquest procés es realitza segons un procés semi-
automàtic de més de dues hores de durada amb recuperacions
superiors al 80% segons la tècnica “T-FR-020.RENTAT DE POOLS
DE PLAQUETES AMB COBE -2991”
INTRODUCCIÓ:

3. OBJECTIU:
Validar el procediment del renta de plaquetes amb el separador
automàtic SEPAX.
Aquest procediment ens permet reduir els temps del procés, fer una
connexió estèril del producte amb l’equip i millorar la qualitat de les
plaquetes ja que obtenim un menor grau d’activació.

4. MATERIAL I MÈTODES:
Metodologia:
S’ha processat 4 pools de plaquetes amb el separador SEPAX (programa
Smartwash, rentat estàndard), segons dilució 1:0,5 amb solució de rentat
(solució salina al 0,9%) i establint un volum de producte final de 200 ml.
De les mostres obtingudes (producte inicial, final i sobrenedant del rentat)
es determina l’hemograma mitjançant l’analitzador Sysmex i s’estableix el
contingut plaquetar de cada mostra i la recuperació respecte el valor inicial.
Finalment, s’han valorat un cinquè i un sisè pool (producte de la mescla de
dos pools de plaquetes) els quals s’han processat el rentat amb la Cobe
2991 o amb el SEPAX aplicant una dilució 1/1. A més en un d’aquests
pools, per citometria de flux, s’ha comparat el grau d’activació de les
plaquetes obtingudes amb els dos dispositius SEPAX versus COBE.

5. MATERIAL I MÈTODES:
SEPAX COBE
EQUIP SEPAX
1 LITRE SOL. SALINA
EQUIP DE POOL
EQUIP COBE
2 LITRES SOL. SALINA
EQUIP DE POOL
TRANSFER 300 ML
CONNEXIÓ
ESTERIL DE LA
BOSSA DE POOL
AMB L’EQUIP
CONNEXIÓ NO
ESTERIL DE LA
BOSSA DE POOL
AMB L’EQUIP
S’AFEGEIX SOL. SALINA FINS
CAPACITAT MÀXIMA DE LA BOSSA
DILꞏLUCIÓ
1:0,5 o 1:1
Centifugació sense aturades i resuspensió
del producte. Afegiment de la sol. Salina de
forma paulatina segons el volum inicial.
3 cicles de centrifugació amb aturada i
resuspensió del producte. Centifugació a
3000 rpm
Pool rentat directament a la bossa final
sense necessitat de manipulació per
part del tècnic.15 minuts d’agitació i llest
per subministrar.
Pool rentat en bossa transit. Cal manipular i realitzar
connexions no estèrils per traspassar producte a
bossa final. Mitja hora de repòs, dilució amb 200 ml de
sol.salina de forma manual i mitja hora d’agitació.

6. RESULTATS: Rentat SEPAX dil.lució 1:0,5
Les recuperacions obtingudes del rentats de pools de plaquetes amb
el separador automàtic SEPAX han sigut superiors al 70% quan la
tècnica emplea una dilució 1:0,5, valor per sota del límit establerts
per la tècnica actual (›80%).
Recuperació rentat de PLQ
SEPAX 1:0,5 (n=4) COBE (n=2)
50
60
70
80
90
100
%Recuperació

7. RESULTATS: Rentat SEPAX dil.lució 1:1
Les recuperacions obtingudes del rentats de pools de plaquetes amb
el separador automàtic SEPAX han sigut properes/superiors al 80%
quan la tècnica emplea una dilució 1:1, valor dins els límit establerts
per la tècnica actual (›80%).
Recuperació rentat de PLQ
COBE (n=2) SEPAX 1:1 (n=2)
50
60
70
80
90
100
%Recuperació

8. Les plaquetes obtingudes amb el sistema SEPAX dil.lució 1:1 presenten
una major puresa (98.4% versus 92.5%) i un menor grau d’activació
(32.7% versus 47.3%) que les obtingudes amb la tècnica actual.
RESULTATS: Activació
Puresa/Activació PLQ (n=1)
PoolInicialSEPAX
ProducteSEPAX1:1
SbnSEPAX1:1
PoolInicialCOBE
ProducteCOBE
SbnCOBE
0
20
40
60
80
100
Puresa (% CD41)
Activació (% CD62P)
%Puresai%Activació

9. CONCLUSIONS:
Tot i una menor recuperació durant el rentat pel dispositiu
SEPAX amb els paràmetres de dilució 1/0,5 , aquest
permet la automatització i la reducció del temps del procés
de rentat (aproximadament 1 hora), al mateix temps que
incrementa la qualitat de les plaquetes obtingudes ja que
l’operador no manipula el producte final quedant
perfectament resuspès. Alhora el rentat de pool de
plaquetes amb SEPAX amb els paràmetres de dilució 1/1 ja
que s’ha realitzat amb dues mostres ha donat molt bona
recuperació i un menor grau d’activació de les plaquetes
per citometria de flux.

10. PERSPECTIVA DE FUTUR:
Realitzar com a mínim 2 comparatives més amb el
sistema SEPAX vs. COBE ( dilució 1:1 al Sepax) per
avaluar la recuperació i activació plaquetar i d’aquesta
manera poder validar la tècnica tenint dades més
representatives.
Aconseguir una bossa de solució salina que permeti una
connexió estèril amb l’equip ( actualment es connexió
amb punxo) i d’aquesta manera sempre i quant la
viabilitat de les plaquetes sigui la correcta, augmentar la
caducitat del producte que ara per ara es de 6 hores.

11. AGRAIMENTS:
A Lluis Martorell Cedrés, Núria Martinez Llonch i Elena
Valdivia García per la seva implicació i ajuda en aquesta
presentació.
A les companyes del Laboratori Cel·lular per la realització
de les citometries de les mostres.
Als nostres companys de LECS per facilitar que durant el
nostre temps de treball hàgim pogut realitzar les diferents
proves.
I per últim, als organitzadors d’aquets congrés que ens ha
permet ensenyar que a LECS la feina també es important i
interesant.