الأساس العلمي في الوسط الحامضى تتفاعل الصابونينات الاسترويدية steroid saponins (المحتوية على مجموعة –OH في الموضع (C-3 مع الفانيلين لتعطي مركبات ملونة ذات اقصي امتصاص بين 455-480 أو 544 نانومتر طبقا لطبيعة الصابونينات. المواد والمحاليل المطلوبة محلول ديوسجينين diosgenin القياسي المركز (500 ميكروجم/مل). يحضر بإذابة 0.050 جم disogenin في ويذاب في 10 مل ميثانول في دورق حجمى (معيارى) سعة 100 مل ثم يكمل الحجم للعلامة بالماء المقطر. محلول العينة مجهولة التركيز. يحضر باذابة0.1 من المستخلص النباتي في 100مل ميثانل 80%. محلول (8%) فانيلين Vanillin reagent (8% W/v) ويحضر بإذابة 800 ملجم من الفانيلين Vanillin في 10 مل كحول ايثانول 99%

1. ‫الكلية‬ ‫الصابونينات‬ ‫تقدير‬
‫النباتية‬ ‫المستخلصات‬ ‫في‬
‫طريقة‬
‫مكار‬
‫واخرون‬
Makkar et al, 2007

2. ‫العلمي‬‫ساس‬
‫أ‬
‫ال‬

‫في‬
‫الوسط‬
‫الحامضى‬
‫تتفاعل‬
‫الصابونينات‬
‫االسترو‬
‫يدية‬
steroid saponins
(
‫المحتوية‬
‫على‬
‫مجموعة‬
–OH
‫في‬
‫الموضع‬
(C-3
‫مع‬
‫الفانيلين‬
‫لتعطي‬
‫مركبات‬
‫ملونة‬
‫ذات‬
‫اقصي‬
‫امتصاص‬
‫بين‬
455
-
480
‫أو‬
544
‫نانومتر‬
‫طبقا‬
‫لطبيعة‬
‫الصابونينات‬
.

3. ‫المطلوبة‬‫والمحاليل‬‫المواد‬

‫محلول‬
‫ديوسجينين‬
diosgenin
‫القياسي‬
‫المركز‬
(
500
‫جم‬‫و‬‫ميكر‬
/
‫مل‬
)
.
‫يحضر‬
‫بإذابة‬
0.050
‫جم‬
disogenin
‫في‬‫ويذاب‬‫في‬
10
‫مل‬
‫ميثانول‬
‫رق‬‫دو‬ ‫في‬
‫حجمى‬
(
‫ى‬‫معيار‬
)
‫سعة‬
100
‫المقطر‬‫بالماء‬‫للعالمة‬ ‫الحجم‬‫يكمل‬‫ثم‬‫مل‬
.

‫التركيز‬‫مجهولة‬‫العينة‬‫محلول‬
.
‫يحضر‬
‫باذابة‬
0.1
‫من‬
‫المستخلص‬
‫النباتي‬
‫في‬
100
‫ميثانل‬‫مل‬
80
.%

‫محلول‬
(
8
)%
‫فانيلين‬
Vanillin reagent (8% W/v)
‫بإذابة‬ ‫ويحضر‬
800
‫الفانيلين‬ ‫من‬ ‫ملجم‬
Vanillin
‫في‬
10
‫مل‬
‫ايثانول‬ ‫كحول‬
99
%

4. ‫المطلوبة‬‫والمحاليل‬‫المواد‬

‫محلول‬
(
72
)%
‫كبريتيك‬ ‫حامض‬
72
( %
v/v) sulfuric
acid
.
‫بإضافة‬‫ويحضر‬
72
‫كبريتيك‬‫حامض‬‫مل‬
sulfuric acid
(
95
)%
‫إلي‬
28
‫مل‬
‫ماء‬
‫مقطر‬

5. ‫التقدير‬ ‫طريقة‬
1
-
‫يتم‬
‫والبالنك‬ ‫القياسي‬ ‫المنحني‬ ‫إعداد‬
‫والعينات‬
:
•
‫ا‬‫ل‬‫أو‬
:
‫القياسي‬ ‫المنحنى‬ ‫إعداد‬
:
•
‫محلول‬ ‫يخفف‬
diosgenin
500
‫ميكروجرام‬
/
‫مل‬
‫القياسي‬
‫علي‬ ‫للحصول‬ ‫المركز‬
‫تراكيزات‬
5
،
15
،
10
،
25
،
50
‫ميكروجم‬
/
‫كالتالي‬ ‫مل‬
:
•
‫محلول‬ ‫تخفيف‬ ‫اجراء‬ ‫يتم‬
diosgenin
(
500
‫ميكروجم‬
/
‫مل‬
)
‫علي‬ ‫للحصول‬
‫التخفيف‬ ‫ن‬ ‫قانو‬ ‫باستخدام‬ ‫المطلوبة‬ ‫التراكيز‬
C.V = C'. V'
•
‫علي‬ ‫للحصول‬ ‫فمثال‬
10
‫محلول‬ ‫من‬ ‫مل‬
diosgenin
‫تركيز‬
5
‫ميكروجم‬
/
‫فان‬ ‫مل‬
‫محلول‬ ‫حجم‬
diosgenin
‫القياسي‬
‫المطلوب‬
•
500x V = 5 x 10
•
V= 0.1 ml
•
‫يؤخذ‬
0.1
ml
‫محلول‬ ‫من‬
diosgenin
‫القياسي‬
‫اليه‬ ‫ويضاف‬ ‫المركز‬
9.9
‫ماء‬ ‫مل‬
‫مقطر‬
.

6. ‫التقدير‬ ‫طريقة‬
•
‫البالنك‬‫ثانيا‬
‫ي‬
‫ي‬‫جر‬
‫باستخدام‬ ‫وذلك‬ ‫البالنك‬‫نبوبة‬‫ا‬ ‫إعداد‬
250
‫ليتر‬‫و‬‫ميكر‬
‫ميثانول‬
(
80
)%
.
•
‫ثالثا‬
‫العينة‬
‫ينقل‬
250
‫من‬‫ليتر‬‫و‬‫ميكر‬
‫نابيب‬‫ا‬‫إلي‬‫نباتي‬‫مستخلص‬ ‫عينة‬‫كل‬
‫اختبارم‬
‫رقمة‬
(
‫ثالثة‬
‫عينة‬‫لكل‬ ‫ات‬‫ر‬‫مكر‬
.)

7. ‫التقدير‬ ‫طريقة‬
2
-
‫يضاف‬
250
‫ميكرولتر‬
‫بالضبط‬
‫من‬
‫محلول‬
‫الفانيلين‬
‫إلى‬
‫محال‬
‫يل‬
diosgenin
‫القياسية‬
‫المحضرة‬
‫في‬
‫الخطوة‬
(
1
)
‫وكذلك‬
‫البالنك‬
‫وكل‬
‫عينة‬
‫من‬
‫العينات‬
‫المراد‬
‫تقدير‬
‫تركيز‬
‫الصابونين‬
‫فيها‬
‫ثم‬
‫تخل‬
‫ط‬
‫جيدا‬
.
3
-
‫يضاف‬
‫إلي‬
‫كل‬
‫أنبوبة‬
2.5
‫مل‬
‫من‬
‫محلول‬
(
72
%
)
‫حامض‬
‫كبريتيك‬
‫ببطء‬
‫علي‬
‫الجدار‬
‫الداخلي‬
‫لألنبوبة‬
.
4
-
‫تخلط‬
‫األنابيب‬
‫ًا‬‫د‬‫جي‬
‫ثم‬
‫تنقل‬
‫إلي‬
‫حمام‬
‫مائي‬
‫علي‬
‫درجة‬
60
‫مئوية‬
‫لمدة‬
10
‫دقائق‬
.

8. ‫التقدير‬ ‫طريقة‬
5
-
‫ف‬ ‫بوضعها‬ ‫األنابيب‬ ‫تبرد‬ ‫المائي‬ ‫الحمام‬ ‫في‬ ‫التحضين‬ ‫فترة‬ ‫انتهاء‬ ‫بعد‬
‫مثلج‬ ‫ماء‬ ‫ي‬
ice-cold water
‫لمدة‬
3
-
4
‫دقائق‬
.
6
-
‫على‬ ‫الموجة‬ ‫طول‬ ‫ضبط‬ ‫و‬ ‫االسبكتروفوتومتر‬ ‫جهاز‬ ‫تشغيل‬ ‫يتم‬
544
‫نانومتر‬
.
8
-
‫محاليل‬ ‫تركيزات‬ ‫بين‬ ‫العالقة‬ ‫يوضح‬ ‫قياسي‬ ‫منحنى‬ ‫يرسم‬
diosgenin
‫القياسية‬
‫على‬ ‫المختلفة‬
(
‫األفقي‬ ‫المحور‬
)
‫للضوء‬ ‫وامتصاصها‬
(
‫الرأسي‬ ‫المحور‬ ‫على‬
.)

9. ‫التقدير‬ ‫طريقة‬
9
-
‫المجهول‬ ‫للمحلول‬ ‫الضوئي‬ ‫االمتصاص‬ ‫مقدار‬ ‫قياس‬ ‫بعد‬
‫ت‬ ‫الذي‬ ‫القياسي‬ ‫المنحني‬ ‫من‬ ‫تركيزه‬ ‫يستخرج‬ ‫التركيز‬
‫إعداده‬ ‫م‬
.
‫بالملجم‬ ‫كديوسيجينين‬ ‫مقدرة‬‫الكلية‬‫الصابونينات‬ ‫كمية‬
/
‫المس‬‫من‬‫جم‬
‫النباتي‬‫تخلص‬
‫الجاف‬
:
‫للعينة‬‫الديوسيجنين‬‫تركيز‬
(
‫القياسي‬‫المنحني‬‫من‬
)
X
‫بالمل‬ ‫المستخلص‬ ‫حجم‬
/
‫المستخلص‬ ‫زن‬‫و‬
‫ام‬‫ر‬‫بالج‬ ‫الجاف‬
.

10. ((
َ‫ك‬ُ‫ل‬َ‫أ‬ْ‫س‬َ‫أ‬ ‫ي‬ِِّ‫ن‬ِ‫إ‬ َّ‫م‬ُ‫ه‬َّ‫ل‬‫ال‬
َ‫أ‬ َ‫و‬ ،‫ا‬ً‫ع‬ِ‫ف‬‫َا‬‫ن‬ ‫ا‬ً‫م‬ْ‫ل‬ِ‫ع‬
ْ‫ن‬ِ‫م‬ َ‫ك‬ِ‫ب‬ ُ‫ذ‬‫و‬ُ‫ع‬
‫م‬ْ‫ل‬ِ‫ع‬
ُ‫ع‬َ‫ف‬ْ‫ن‬َ‫ي‬ َ‫ال‬
))