2. FIZIOLOGIJA KRVNIH ŽILA
• Dobro razumijevanje fiziologije vaskularnog sustava nužno je za
razumijevanje tijeka pokusa
• Mehanizmi vazodilatacije i vazokonstrikcije
3. Unutarstanična signalizacija
V r s t e r e c e p t o r a:
1. R e c e p t o r o v i s n i i o n s k i k a n a l i (ionotropni receptori)
2. R e c e p t o r i s p r e g n u t i s G -p r o t e i n o m (metabotropni
receptori)
3. K i n a z n i r e c e p t o r i
4. N u k l e a r n i r e c e p t o r i
4. R R E R
G G
Stanični
odgovor Stanični odgovor
Stanični
odgovor
Stanični
odgovor
Hiperpolarizacija ili
depolarizacija
Promjena
podražlji-
vosti
Drugi glasnici
Otpuštanje
Ca2+
Fosforilacija
proteina drugo
Fosforilacija
proteina
Transkripcija gena
Sinteza proteina
R
Transkripcija
gena
Sinteza proteina
1. Receptor-ovisni
ionski kanali
2. Receptori spregnuti sa
G-proteinima
(metabotropni receptori)
3. Kinazni
receptori
4. Nuklearni
receptor
Vremenska skala:
Milisekunde
Primjer:
Nikotinski
receptor za Ach
Vremenska skala:
Sati
Primjer:
Citokinski
receptor
Vremenska skala:
Sati
Primjer:
Estrogenski
receptori
Vremenska skala:
sekunde
Primjer:
Muskarinski receptor za Ach
6. Unutarstanična signalizacija
Receptori spregnuti sa G proteinom
Meta
1
Meta
2 α βγ
GDP
Meta
1
Meta
2 α βγ
GDP
GTP
Meta
1
Meta
2 α βγ
GTP
Meta
1
Meta
2 α βγ
GDP
+
P
Receptor zauzet
Meta aktiviranaGTP hidroliziran
1.
4. 3.
2.
GDP
12. News Physiol. Sci. 14;238-242, 1999; posuđeno iz prezentacije prof.dr.sc. Ines Drenjančević - Perić
20-HETE and EETs in Control of Renal Vascular Tone
25. PRIPREMA ZA POKUS
• Pokretanje sustava (temp . 37 ⁰C, doprema O2 itd.)
• Kalibracija sustava
• Priprema Krebs Henseleitove otopine
• Razrijađivanje lijekova
26. 4-vero kanalni sustav kupki za izolirane organe
sadrži:
Četverokanalni standardni sustav kupki za izolirane organe (tkivne prstenove i trakice) sa svom
priključnom opremom (cijevi, kablovi itd.)
Četverokanalni pojačivać mjerene sile
Izometrični pretvarač sile
Softwer za prikupljanje i obradu podataka
Sustav za primanje i prijenos siganala sa sustava kupki za izolirane organe na računalo (četverokanalni s
mogućnošću proširivanja na osamkanalni sustav)
Sustav za grijanje i cirkulaciju vode sa spremnikom od 20 l i mogućnošću prilagodbe temperature u
rasponu od 20 – 50 ºC te s preciznošću od ±0,1 ºC
31. PRIPREMA LIJEKOVA ZA POKUS
• Lijekovi se pripremaju kao 20 mM (iznimno 3M i 2mM)
• Čuvaju se 2 do 3 mjeseca na -20 ⁰C
• KCl
32. Lijek/aktivna tvar Mr (g/L)
Priprema
20 mM
otopine
Koncentra-cija u
bazenu
Potrebno dodatno razrjeđenje
20 mM otopine
Vol. koji se dodaje
u bazenčić (μL)
KCl 74,56
Priprema se 3M
11,3g/50mL
60 mM Ne 400
Noradrenalin 205,0 41mg/10mL 10-4 M
Zamorac: 100 x (10-6)
Štakor: 1000x (10-7)
100
Acetilkolin 181,7 36,4mg/10mL 10-4 M
Zamorac: 10 x (10-5)
Štakor: 100x (10-6)
100
L-NAME 268,0 53,6mg/10mL 3x10-4 M Ne 300
Indometacin 358,0 71,6mg/10mL 10-4 M 10x (10-5 M) 100
Klotrimazol 344,8 69mg/10mL 10-4 M 10x (10-5 M) 100
Verapamil
491,0
amp: 5mg/2mL
Priprema se 2 mM
4 mL iz amp. + 6 mL H2O
20 μM Ne 200
* Otapalo za Indometasin je 96% etanol ili DMSO/ ponekad i dr. Ovisno o proizvođaču
37. STANDARDNI PROTOKOL
1. Stabilizacija krvne žile
2. Inicijalni prekontrakcijski test
3. Test intaktnosti endotela
4. Ispitivanje vazoaktivne tveri
38. 1. Stabilizacija krvne žile (60 min)
Krvna žila se prenapregne za 20 mN
U više navrata napetosti krvne žile se ispravlja
na 20 mN (ili 0 mN ako sustav bazično podešen
na – 20 mN)
Tijekom tog perioda bazenčići se ispiru 3-4puta
(cca. svakih 15 min)
40. 3. Testiranje intaktnosti endotela
100μL 1000x razr. 20 mM
NORADRENALINA
(10-7M)
100μL 100x razr. 20 mM
ACETILKOLINA
(10-6M)
Ispiranje4 min 1 min
1 min
Ispiranje
Ispiranje
4 min
41. 4. Testiranje vazoaktivne tvari
100μL 1000x razr. 20 mM
NORADRENALINA
(10-7M)
VAZODILATATOR
u različitim dozama
4 min
47. Skupina GUK (mmol/l) Težina (g) Sustav na kojem se radilo Opaske Oznake prstenova
A - Kontrola Citrat (okot
10.08.2009., TH: 09.09.2009, m 90. g)
A1a 9,7 310 I. Aorta bila skvrčena i kontrahirana A1a 1-4
A1b 9,7 320 II. A1b 1-4
A1c 9,7 305 I. Aorta bila skvrčena i kontrahirana A1c 1-4
A2a 11,3 310 I. A2a 1-4
A2b 10 290 II.
Problemi tijekom pokusa - žila bila duže na suhom jer
sust. nije bio spreman
A2b 1-4
A2c Falilo trakica 300 II. A2c 1-4
B - Kontrola netretirana (okot
12.08.2009.)
B1a 9,3 360 I. B1a 1-4
B1b 8,6 320 II. B1b 1-4
B1c 10,9 305 I. B1c 1-4
B2a 9,5 350 I.
Serum odmrzavan zajedno s A2a, A2b i B2b - da
Danijeli ostavim 0,5 ml za Oksi.kapac.
B2a 1-4
B2b 10,7 285 II. Serum moguće razrijeđen kod odmrzavanja B2b 1-4
B2c 10,3 280 I. B2c 1-4
C - Dijabetičari + HBTh (okot
25.07.2009., TH: 09.09.2009, m 90. g)
C1a > 33 250 I. C1a 1-4
C1b > 33 285 II. C1b 1-4
C1c 8 290 II. C1c 1-4
C2a > 33 225 I. C2a 1-4
C2b > 33 250 II. C2b 1-4
C2c > 33 225 II. C2c 1-4
D - Dijabetičari netretirani (okot
01.08.2009., TH: 09.09.2009, m 90. g)
D1a > 33 250 I. D1a 1-4
D1b 7,8 320 II. D1b 1-4
D1c > 33 210 II. D1c 1-4
D2a > 33 200 I. D2a 1-4
D2b > 33 170 II. D2b 1-4
D2c 10,2 300 I. Kod odvajanja serum bijel + bijeli ugrušak D2c 1-4
Nisu razvili dijabetes