1. HBV QUANTITATIVE REAL TIME PCR KIT

2. HBV QUANTITATIVE REAL TIME PCR KIT
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BP-HBV Real Time PCR Kit
Detection and Quantification of
HBV Genome
For
ABI Series & RororGene
‫ﻓﻨﺎور‬ ‫ﺑﺎﯾﺮﭘﻞ‬ ‫ﺑﻨﯿﺎن‬ ‫داﻧﺶ‬ ‫ﺷﺮﮐﺖ‬
‫ﻧﺎﻧﻮﺑﯿﻮﺗﮑﻨﻮﻟﻮژي‬ ‫ﻫﺎي‬ ‫ﻓﺮاورده‬ ‫و‬ ‫ﺗﺸﺨﯿﺼﯽ‬ ‫ﻫﺎي‬ ‫ﮐﯿﺖ‬ ،‫واﮐﺴﻦ‬
‫ﺗﺤﻘﯿﻖ‬ ‫ﺳﺎﯾﺖ‬‫ﺗﻮﻟﯿﺪ‬ ‫و‬:
‫ﭘﻼك‬ ،‫ﻧﻬﻢ‬ ‫ﻧﻮآوري‬ ‫ﺧﯿﺎﺑﺎن‬ ،‫ﭘﺮدﯾﺲ‬ ‫ﻓﻨﺎوري‬ ‫ﭘﺎرك‬ ،‫ﺗﻬﺮان‬96
‫ﺗﻠﻔﻦ‬:4-76250681-021‫ﻧﻤﺎﺑﺮ‬:76250680
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‫ﮐﻨﻨﺪه‬ ‫ﺗﻮﻟﯿﺪ‬:
‫ﺷﺮﮐﺖ‬‫ﻓﻨﺎور‬ ‫ﺑﺎﯾﺮﭘﻞ‬ ‫ﺑﻨﯿﺎن‬ ‫داﻧﺶ‬
‫ﭘﻼك‬ ‫ﻧﻬﻢ‬ ‫ﻧﻮآوري‬ ‫ﺧﯿﺎﺑﺎن‬ ،‫ﭘﺮدﯾﺲ‬ ‫ﻓﻨﺎوري‬ ‫ﭘﺎرك‬ ،‫ﺗﻬﺮان‬96‫ﺗﻠﻔﻦ‬:66949644
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‫ﮐﻠﯿﺎت‬

3. HBV QUANTITATIVE REAL TIME PCR KIT
‫وﯾﺮوس‬HBV‫ﮐﻪ‬ ‫اﺳﺖ‬ ‫اﻧﺴﺎﻧﯽ‬ ‫ﺑﯿﻤﺎرﯾﺰاي‬ ‫ﻋﻮاﻣﻞ‬ ‫ﺗﺮﯾﻦ‬ ‫ﻋﻤﺪه‬ ‫از‬ ‫ﯾﮑﯽ‬‫ﻋﻔﻮﻧﺖ‬‫در‬ ‫ﻋﻤﺪه‬ ‫ﻣﺸﮑﻞ‬ ‫وﯾﺮوس‬ ‫اﯾﻦ‬ ‫از‬ ‫ﻧﺎﺷﯽ‬
‫ﺷﻮد‬ ‫ﻣﯽ‬ ‫ﻣﺤﺴﻮب‬ ‫ﺟﻬﺎﻧﯽ‬ ‫ﺳﻼﻣﺖ‬.‫ﻓﺮد‬ ‫ﺟﻨﺴﯽ‬ ‫ارﺗﺒﺎط‬ ‫ﯾﺎ‬ ‫و‬ ‫ﺧﻮﻧﯽ‬ ‫ﻫﺎي‬ ‫ﻓﺮاورده‬ ‫و‬ ‫ﺧﻮن‬ ‫ﻃﺮﯾﻖ‬ ‫از‬ ‫ﻣﻌﻤﻮﻻ‬ ‫ﻋﻔﻮﻧﺖ‬ ‫اﻧﺘﻘﺎل‬
‫ﺷﻮد‬ ‫ﻣﯽ‬ ‫ﻣﻨﺘﻘﻞ‬ ‫ﺟﻨﯿﻦ‬ ‫ﺑﻪ‬ ‫آﻟﻮده‬ ‫ﻣﺎدر‬ ‫از‬ ‫ﯾﺎ‬ ‫و‬ ‫ﺳﺎﻟﻢ‬ ‫ﻓﺮد‬ ‫ﺑﺎ‬ ‫آﻟﻮده‬.‫از‬ ‫ﮐﻪ‬ ‫ﺗﺰرﯾﻘﯽ‬ ‫ﻣﻌﺘﺎدﯾﻦ‬ ‫ﺑﯿﻦ‬ ‫ﻋﻔﻮﻧﺖ‬ ‫اﻧﺘﻘﺎل‬ ‫اﻣﺮوزه‬
‫اﺳﺘﻔﺎ‬ ‫ﻣﺸﺘﺮك‬ ‫ﻫﺎي‬ ‫ﺳﺮﻧﮓ‬‫ﮔﺮدد‬ ‫ﻣﯽ‬ ‫ﻣﺤﺴﻮب‬ ‫اﻧﺘﺸﺎر‬ ‫ﻋﻤﺪه‬ ‫راﻫﻬﺎي‬ ‫از‬ ‫ﯾﮑﯽ‬ ‫ﮐﻨﻨﺪ‬ ‫ﻣﯽ‬ ‫ده‬.‫ﻣﻮﺟﻮد‬ ‫ﻫﺎي‬ ‫آﻣﺎر‬ ‫اﺳﺎس‬ ‫ﺑﺮ‬
‫ﺣﺪود‬2‫از‬ ‫ﺑﯿﺶ‬ ‫ﮐﻪ‬ ‫ﻫﺴﺘﻨﺪ‬ ‫آﻟﻮده‬ ‫وﯾﺮوس‬ ‫اﯾﻦ‬ ‫ﺑﻪ‬ ‫ﺟﻬﺎن‬ ‫ﺳﺮاﺳﺮ‬ ‫در‬ ‫ﻧﻔﺮ‬ ‫ﻣﯿﻠﯿﺎرد‬350‫ﻧﻔﺮ‬ ‫ﻣﯿﻠﯿﻮن‬‫ﺑﻪ‬ ‫ﻣﺒﺘﻼ‬‫ﻣﺰﻣﻦ‬ ‫ﻋﻔﻮﻧﺖ‬
‫ﻫﺴﺘﻨﺪ‬.‫ﺷﻮد‬ ‫ﻣﯽ‬ ‫ﻣﺮگ‬ ‫و‬ ‫ﮐﺒﺪ‬ ‫ﺳﺮﻃﺎن‬ ،‫ﺳﯿﺮوز‬ ‫ﺑﻪ‬ ‫ﻣﻨﺠﺮ‬ ‫ﻣﻌﻤﻮﻻ‬ ‫ﻣﺰﻣﻦ‬ ‫ﻋﻔﻮﻧﺖ‬.‫اﯾﻦ‬ ‫ﺣﺎد‬ ‫ﻧﻮع‬‫اﻟﺘﻬﺎب‬ ‫ﻋﻼﺋﻢ‬ ‫ﺑﺎ‬ ‫ﺑﯿﻤﺎري‬
‫ﺷﻮد‬ ‫ﻣﯽ‬ ‫ﻣﺮگ‬ ‫ﺳﺒﺐ‬ ‫ﻧﺪرت‬ ‫ﺑﻪ‬ ‫و‬ ‫اﺳﺖ‬ ‫ﻫﻤﺮاه‬ ‫زردي‬ ،‫اﺳﺘﻔﺮاغ‬ ،‫ﮐﺒﺪ‬.
‫ﻫﭙﺎﺗﯿﺖ‬ ‫ﺗﺸﺨﯿﺺ‬ ‫ﮐﯿﺖ‬B‫ﻣﻠﮑﻮﻟﯽ‬ ‫روش‬ ‫ﺑﺎ‬PCRReal TimeQuantitative‫ﻋﻼوه‬ ‫ﮐﻪ‬ ‫ﮐﻨﺪ‬ ‫ﻣﯽ‬ ‫ﻓﺮاﻫﻢ‬ ‫را‬ ‫اﻣﮑﺎن‬ ‫اﯾﻦ‬
‫ا‬ ‫ﻟﯿﺘﺮ‬ ‫ﻣﯿﻠﯽ‬ ‫ﯾﮏ‬ ‫در‬ ‫ﻧﯿﺰ‬ ‫را‬ ‫وﯾﺮوس‬ ‫ﺗﻌﺪاد‬ ‫اﺳﺖ‬ ‫ﻗﺎدر‬ ‫ﮐﻢ‬ ‫ﺑﺴﯿﺎر‬ ‫ﻣﻘﺎدﯾﺮ‬ ‫در‬ ‫وﯾﺮوس‬ ‫ﺗﺸﺨﯿﺺ‬ ‫ﺑﺮ‬‫ﺗﻌﯿﯿﻦ‬ ‫ﺳﺮم‬ ‫ﯾﺎ‬ ‫و‬ ‫ﭘﻼﺳﻤﺎ‬ ‫ز‬
‫ﻧﻤﺎﯾﺪ‬.
1-‫ﻣﺤﺼﻮل‬ ‫ﻣﺸﺨﺼﺎت‬
‫ﻫﭙﺎﺗﯿﺖ‬ ‫ﺗﺸﺨﯿﺺ‬ ‫ﮐﯿﺖ‬B‫ﻣﻠﮑﻮﻟﯽ‬ ‫روش‬ ‫ﺑﺎ‬PCRReal Time‫ﮐﻤﯽ‬ ‫ﺗﺸﺨﯿﺺ‬ ‫ﻣﻨﻈﻮر‬ ‫ﺑﻪ‬DNA‫ﻫﭙﺎﺗﯿﺖ‬ ‫وﯾﺮوس‬B‫در‬
‫ﺷﺪه‬ ‫ﺗﻮﻟﯿﺪ‬ ‫ﻃﺒﯽ‬ ‫ﺗﺸﺨﯿﺺ‬ ‫آزﻣﺎﯾﺸﮕﺎﻫﻬﺎي‬ ‫و‬ ‫ﺗﺸﺨﯿﺼﯽ‬ ‫ﻣﺮاﮐﺰ‬ ‫در‬ ‫اﺳﺘﻔﺎده‬ ‫ﺑﺮاي‬ ‫ﮐﻪ‬ ‫اﻧﺴﺎن‬ ‫ﭘﻼﺳﻤﺎي‬ ‫ﯾﺎ‬ ‫و‬ ‫ﺳﺮم‬ ‫ﻧﻤﻮﻧﻪ‬
‫اﺳﺖ‬.‫وﯾﺮوس‬ ‫ﻫﺎي‬ ‫ژﻧﻮﺗﺎﯾﭗ‬ ‫ﺗﻤﺎم‬ ‫ﮐﯿﺖ‬ ‫اﯾﻦ‬HBV)A..H(‫دﻫﺪ‬ ‫ﻣﯽ‬ ‫ﺗﺸﺨﯿﺺ‬ ‫را‬.‫ﻗﺎﺑﻞ‬ ‫آزﻣﻮن‬ ‫ﺗﻌﺪاد‬ ‫اﺳﺎس‬ ‫ﺑﺮ‬ ‫ﻫﺎ‬ ‫ﮐﯿﺖ‬
‫ﺑﺼﻮرت‬ ‫ﮐﯿﺖ‬ ‫ﻫﺮ‬ ‫در‬ ‫اﻧﺠﺎم‬25، ‫ﺗﺎﯾﯽ‬50‫و‬ ‫ﺗﺎﯾﯽ‬100‫اﺳﺖ‬ ‫ﺷﺪه‬ ‫ﻃﺮاﺣﯽ‬ ‫ﺗﺎﯾﯽ‬.
2-‫ﻧﻤﻮﻧﻪ‬‫آن‬ ‫ﻧﮕﻬﺪاري‬ ‫ﺷﺮاﯾﻂ‬ ‫و‬
‫ﮐﻤﯽ‬ ‫آزﻣﻮن‬ ‫اﻧﺠﺎم‬ ‫ﺟﻬﺖ‬ ‫ﻣﻨﺎﺳﺐ‬ ‫ﻧﻤﻮﻧﻪ‬BK Virus‫اﺳﺘﻔﺎده‬ ‫ﺗﻮان‬ ‫ﻣﯽ‬ ‫ﻧﯿﺰ‬ ‫ﺳﺮم‬ ‫از‬ ‫اﯾﻨﮑﻪ‬ ‫ﺿﻤﻦ‬ ‫اﺳﺖ‬ ‫ﺑﯿﻤﺎر‬ ‫ﭘﻼﺳﻤﺎي‬
‫ﮐﺮد‬.‫اﻧﻌﻘﺎد‬ ‫ﺿﺪ‬ ‫ﻣﺎده‬ ‫ﺣﺎوي‬ ‫اﺳﺘﺮﯾﻞ‬ ‫ﻟﻮﻟﻪ‬ ‫در‬ ‫ﺑﺎﯾﺪ‬ ‫ﭘﻼﺳﻤﺎ‬ ‫ﻧﻤﻮﻧﻪ‬EDTA‫ﻧﺴﺒﺖ‬ ‫ﺑﻼﻓﺎﺻﻠﻪ‬ ‫آن‬ ‫ﺟﺪاﺳﺎزي‬ ‫از‬ ‫ﺑﻌﺪ‬ ‫ﮐﻪ‬ ‫ﺑﺎﺷﺪ‬
‫اﺳﺘﺨﺮاج‬ ‫ﺑﻪ‬‫ﻧﻤﺎﯾﯿﺪ‬ ‫اﻗﺪام‬ ‫ژﻧﻮم‬.‫اﺳﺘﺨﺮاج‬ ‫اﻣﮑﺎن‬ ‫ﺻﻮرﺗﯿﮑﻪ‬ ‫در‬‫ﺳﺮم‬ ‫ﯾﺎ‬ ‫و‬ ‫ﭘﻼﺳﻤﺎ‬ ‫ﻧﻤﻮﻧﻪ‬ ‫ﻧﺒﺎﺷﺪ‬ ‫ﻓﺮاﻫﻢ‬ ‫ژﻧﻮم‬‫زﻣﺎن‬ ‫ﺗﺎ‬ ‫ﺑﺎﯾﺪ‬
‫ﻣﻨﻬﺎي‬ ‫ﻓﺮﯾﺰر‬ ‫در‬ ‫ﺣﺘﻤﺎ‬ ‫اﺳﺘﺨﺮاج‬20‫ﺷﻮد‬ ‫ﻧﮕﻬﺪاري‬.‫آزﻣﻮن‬ ‫اﻧﺠﺎم‬ ‫ﺑﺮاي‬ ‫ﻻزم‬ ‫ﻧﻤﻮﻧﻪ‬ ‫ﺣﺪاﻗﻞ‬200‫ﯾﺎ‬ ‫ﭘﻼﺳﻤﺎ‬ ‫ﻣﯿﮑﺮوﻟﯿﺘﺮ‬
‫اﺳﺖ‬ ‫ﺳﺮم‬.
3-‫ﮐﯿﺖ‬ ‫ﻣﺤﺘﻮﯾﺎت‬
‫اﺳﺖ‬ ‫ﺷﺪه‬ ‫آﻣﺎده‬ ‫زﯾﺮ‬ ‫ﺟﺪول‬ ‫ﻃﺒﻖ‬ ‫اﻧﺠﺎم‬ ‫ﻗﺎﺑﻞ‬ ‫واﮐﻨﺶ‬ ‫ﺗﻌﺪاد‬ ‫ﻣﺒﻨﺎي‬ ‫ﺑﺮ‬ ‫ﮐﯿﺖ‬ ‫ﻣﺤﺘﻮﯾﺎت‬
‫ﺷﻤﺎره‬ ‫ﺟﺪول‬1
100
reaction
50
reaction
25
reaction
ContentsLabel
4×314µL2×314µL1×314µLBuffer Mix*B MIX
4×65µL2×65µL1×65µLHBV & IC
Primer Probe Mix
**
HBV & IC
Primer Probe
2×50µL1×50µL1×50µL5.00E+007 IU/ml
***
HBV Standard 1
2×50µL1×50µL1×50µL5.00E+006 IU/ml
***
HBV Standard 2
2×50µL1×50µL1×50µL5.00E+005 IU/ml
***
HBV Standard 3
2×50µL1×50µL1×50µL5.00E+004 IU/ml
***
HBV Standard 4
2×50µL1×50µL1×50µL5.00E+003 IU/ml
***
HBV Standard 5
‫ﺟﺪول‬1
/*‫ﻣﯿﮑﺲ‬ ‫ﺑﺎﻓﺮ‬ ‫ﻣﺤﻠﻮل‬
* *‫وﯾﺮوس‬ ‫ﭘﺮاﯾﻤﺮ‬ ‫و‬ ‫ﭘﺮوب‬ ‫ﺣﺎوي‬CMV‫ﮐﻨﺘﺮل‬ ‫اﯾﻨﺘﺮﻧﺎل‬ ‫و‬
***‫اﺳﺘﺎﻧﺪارد‬ ‫ﻣﻨﺤﻨﯽ‬ ‫ﺗﻬﯿﻪ‬ ‫ﺑﺮاي‬)‫ﻣﺜﺒﺖ‬ ‫ﻫﺎي‬ ‫ﮐﻨﺘﺮل‬(
4-‫ﻫﺎي‬ ‫دﺳﺘﮕﺎه‬Real Time PCR‫ﺳﺎزﮔﺎر‬‫ﮐﯿﺖ‬ ‫اﯾﻦ‬ ‫ﺑﺮاي‬
‫ﺟﺪول‬ ‫در‬ ‫ﺷﺪه‬ ‫اﺷﺎره‬ ‫ﻣﯿﮑﺲ‬ ‫ﺑﺎﻓﺮ‬ ‫ﻧﻮع‬ ‫اﺳﺎس‬ ‫ﺑﺮ‬2‫ﮐﺮد‬ ‫اﺳﺘﻔﺎده‬ ‫زﯾﺮ‬ ‫ﻫﺎي‬ ‫دﺳﺘﮕﺎه‬ ‫از‬ ‫ﺗﻮان‬ ‫ﻣﯽ‬.
ü‫دﺳﺘﮕﺎه‬ ‫ﺗﻤﺎم‬ ‫ﺑﺮاي‬ ‫دﯾﮕﺮ‬ ‫اﻟﺰام‬Real Time PCR‫ﮐﺎﻧﺎل‬ ‫داﺷﺘﻦ‬FAM‫و‬JOE‫اﺳﺖ‬.
ü‫دﺳﺘﮕﺎه‬ ‫ﻣﺨﺼﻮص‬ ‫ﻣﺴﺘﺮﻣﯿﮑﺲ‬ ‫ﺗﺎ‬ ‫ﻧﻤﺎﯾﺪ‬ ‫اﻋﻼم‬ ‫را‬ ‫ﺧﻮد‬ ‫دﺳﺘﮕﺎه‬ ‫ﻧﻮع‬ ‫ﻣﺤﺼﻮل‬ ‫اﯾﻦ‬ ‫ﺳﻔﺎرش‬ ‫ﻫﻨﮕﺎم‬‫ﯾﺘﺎن‬
‫ﮔﯿﺮد‬ ‫ﻗﺮار‬ ‫ﺷﻤﺎ‬ ‫اﺧﺘﯿﺎر‬ ‫در‬.
RocheBio-RadQiagen/CorbettLife TechnologiesBuffer Mix
‫ﻫﺎ‬ ‫ﻣﺪل‬ ‫ﻫﻤﻪ‬7700,7300,7900,7900HTLOT: HR3111

4. HBV QUANTITATIVE REAL TIME PCR KIT
7500,7500 FastLOT: LR3111
‫ﻫﺎ‬ ‫ﻣﺪل‬ ‫ﻫﻤﻪ‬Rotor-Gene Q,
6000
LOT:
WR3111
‫ﺟﺪول‬2
5-‫ﻫﺎ‬ ‫ﻫﺸﺪار‬ ‫و‬ ‫اﺣﺘﯿﺎط‬:
-‫رﯾﺠﻨﺖ‬ ‫و‬ ‫ﻫﺎ‬ ‫ﻣﺤﻠﻮل‬ ،‫ﻧﻤﻮﻧﻪ‬ ‫ﺑﺎ‬ ‫ﮐﺎر‬ ‫ﻫﻨﮕﺎم‬ ‫در‬ ‫ﻋﻤﻮﻣﯽ‬ ‫اﯾﻤﻨﯽ‬ ‫اﻗﺪاﻣﺎت‬ ‫رﻋﺎﯾﺖ‬‫اﻟﺰاﻣﯿﺴﺖ‬ ‫ﻫﺎ‬
-‫دﺳﺘﮕﺎه‬ ‫ﺑﺎ‬ ‫ﮐﯿﺖ‬ ‫اﯾﻦ‬DXReal Time PCR 7500/ 7500 Fast‫ﮐﻤﭙﺎﻧﯽ‬ ‫از‬Applied Biosystems‫اﻋﺘﺒﺎر‬
‫اﺳﺖ‬ ‫ﺷﺪه‬ ‫ﺳﻨﺠﯽ‬.‫از‬ ‫اﺳﺘﻔﺎده‬ ‫ﺻﻮرت‬ ‫در‬‫ﺳﺎﯾﺮ‬‫ﻧﻤﺎﺋﯿﺪ‬ ‫ﻣﺸﻮرت‬ ‫ﻓﻨﺎور‬ ‫ﭘﻞ‬ ‫ﺑﺎﯾﺮ‬ ‫ﺷﺮﮐﺖ‬ ‫ﺷﻨﺎﺳﺎن‬ ‫ﮐﺎر‬ ‫ﺑﺎ‬ ‫ﻫﺎ‬ ‫دﺳﺘﮕﺎه‬.
-‫ﺑ‬ ‫ﮐﺎﻣﻞ‬ ‫آﺷﻨﺎﯾﯽ‬ ‫ﮐﻪ‬ ‫ﺷﻮد‬ ‫اﻧﺠﺎم‬ ‫اﻓﺮادي‬ ‫ﺗﻮﺳﻂ‬ ‫ﺑﺎﯾﺪ‬ ‫ﮐﯿﺖ‬ ‫از‬ ‫اﺳﺘﻔﺎده‬‫ﻣﻮﻟﮑﻮﻟﯽ‬ ‫روش‬ ‫اﻧﺠﺎم‬ ‫و‬ ‫اﺻﻮل‬ ‫ﺎ‬Real Time
PCR‫ﺑﺎﺷﻨﺪ‬ ‫داﺷﺘﻪ‬ ‫را‬ ‫ﻫﺎ‬ ‫داده‬ ‫ﺗﻔﺴﯿﺮ‬ ‫و‬ ‫آﻧﺎﻟﯿﺰ‬ ‫ﺗﻮاﻧﺎﯾﯽ‬ ‫ﻧﯿﺰ‬ ‫و‬ ‫دارﻧﺪ‬ ‫را‬.
-‫آزﻣﺎﯾﺸﮕﺎﻫﯽ‬ ‫ﺻﺤﯿﺢ‬ ‫اﺻﻮل‬ ‫رﻋﺎﯾﺖ‬ ‫اﺳﺎس‬ ‫ﺑﺮ‬ ‫ﺑﺎﯾﺪ‬ ‫ﻧﻤﻮﻧﻪ‬ ‫ﺑﺎ‬ ‫ﮐﺎر‬ ‫ﻣﻘﺮرات‬(GLP)‫ﺷﻮد‬ ‫اﻧﺠﺎم‬.
-‫از‬ ‫ﺟﻠﻮﮔﯿﺮي‬ ‫ﺟﻬﺖ‬‫ﮐﺎر‬ ‫ﺣﯿﻦ‬ ‫آﻟﻮدﮔﯽ‬)(Carry over contamination‫ﻣﮑﺎن‬ ‫از‬ ‫اﺳﺘﻔﺎده‬‫اﻧﺠﺎم‬ ‫ﺟﻬﺖ‬ ‫ﻣﺠﺰا‬ ‫ﻫﺎي‬
‫اﺳﺖ‬ ‫ﺿﺮوري‬ ‫واﮐﻨﺶ‬ ‫اﻧﺠﺎم‬ ‫ﻧﯿﺰ‬ ‫و‬ ‫ﺳﺎزي‬ ‫آﻣﺎده‬.
-‫واﯾﺘﮑﺲ‬ ‫ﺑﻪ‬ ‫آﻏﺸﺘﻪ‬ ‫اﺳﺘﺮﯾﻞ‬ ‫ﮔﺎز‬ ‫ﯾﮏ‬ ‫از‬ ‫اﺳﺘﻔﺎده‬ ‫ﺑﺎ‬ ‫و‬ ‫ﭘﻮﺷﯿﺪه‬ ‫ﭘﻮدر‬ ‫ﺑﺪون‬ ‫ﻻﺗﮑﺲ‬ ‫دﺳﺘﮑﺶ‬ ‫آزﻣﻮن‬ ‫اﻧﺠﺎم‬ ‫از‬ ‫ﻗﺒﻞ‬
10%‫ﺟﺪﯾﺪي‬ ‫دﺳﺘﮑﺶ‬ ‫و‬ ‫اﻧﺪاﺧﺘﻪ‬ ‫دور‬ ‫را‬ ‫اﺳﺘﺮﯾﻞ‬ ‫ﮔﺎز‬ ‫و‬ ‫دﺳﺘﮑﺶ‬ ‫ﭘﺎﯾﺎن‬ ‫در‬ ‫ﻧﻤﺎﯾﯿﺪ‬ ‫ﻋﻔﻮﻧﯽ‬ ‫ﺿﺪ‬ ‫و‬ ‫ﺗﻤﯿﺰ‬ ‫را‬ ‫ﮐﺎري‬ ‫ﺳﻄﻮح‬
‫ﭘﻮﺷ‬‫اﻟﮑﻞ‬ ‫ﺑﺎ‬ ‫ﻣﺠﺪدا‬ ‫و‬ ‫دﯾﻮﻧﺎﯾﺰ‬ ‫آب‬ ‫ﺑﻪ‬ ‫آﻏﺸﺘﻪ‬ ‫اﺳﺘﺮﯾﻞ‬ ‫ﮔﺎز‬ ‫ﺑﺎ‬ ‫و‬ ‫ﯿﺪه‬%70‫ﻧﻤﺎﯾﯿﺪ‬ ‫ﺿﺪﻋﻔﻮﻧﯽ‬ ‫ﮐﺎﻣﻼ‬ ‫را‬ ‫ﮐﺎري‬ ‫ﺳﻄﻮح‬.‫ﺳﭙﺲ‬
‫ﻣﺪت‬ ‫ﺑﻪ‬20‫ﻻﻣﭗ‬ ‫دﻗﯿﻘﻪ‬UV‫ﯾﺎ‬ ‫و‬ ‫ﻫﻮد‬Work station‫ﮔﺮدد‬ ‫ﺿﺪﻋﻔﻮﻧﯽ‬ ‫ﮐﺎﻣﻼ‬ ‫آن‬ ‫زﯾﺮ‬ ‫ﻓﻀﺎي‬ ‫ﺗﺎ‬ ‫ﻧﻤﺎﯾﯿﺪ‬ ‫روﺷﻦ‬ ‫را‬.
-‫ﺳﺎزي‬ ‫آﻣﺎده‬ ،‫ﻧﻤﻮﻧﻪ‬ ‫اﺳﺘﺨﺮاج‬ ‫ﻧﻈﯿﺮ‬ ‫ﻋﻤﻠﯿﺎﺗﯽ‬ ‫ﺑﺮاي‬ ‫ﻣﺠﺰا‬ ‫ﻣﮑﺎن‬ ‫ﺳﻪ‬ ‫از‬‫ﮐﻨﯿﺪ‬ ‫اﺳﺘﻔﺎده‬ ‫ﺗﮑﺜﯿﺮ‬ ‫ﻓﺮاﯾﻨﺪ‬ ‫و‬ ‫ﻫﺎ‬ ‫واﮐﻨﺶ‬.
-‫ﻧﮑﻨﯿﺪ‬ ‫ﺑﺎز‬ ‫را‬ ‫ﺷﺪه‬ ‫ﺗﮑﺜﯿﺮ‬ ‫ﻫﺎي‬ ‫وﯾﺎل‬ ‫درب‬ ‫ﻫﺮﮔﺰ‬.‫ﻧﻤﻮده‬ ‫ﺧﺎرج‬ ‫ﺗﺎم‬ ‫رﯾﻞ‬ ‫دﺳﺘﮕﺎه‬ ‫از‬ ‫را‬ ‫آﻧﺨﻬﺎ‬ ‫ﻓﻮرا‬ ‫آزﻣﻮن‬ ‫اﺗﻤﺎم‬ ‫از‬ ‫ﺑﻌﺪ‬
‫ﺳﺪﯾﻢ‬ ‫ﻫﯿﭙﻮﮐﻠﺮﯾﺖ‬ ‫ﻣﺤﺘﻮي‬ ‫ﻇﺮف‬ ‫در‬ ‫و‬10%‫از‬ ‫ﺧﺎرج‬ ‫ﻓﻀﺎﯾﯽ‬ ‫در‬ ‫و‬ ‫ﻧﻤﻮده‬ ‫اﻗﺪام‬ ‫آن‬ ‫اﺗﻮﮐﻼو‬ ‫ﺑﻪ‬ ‫ﻧﺴﺒﺖ‬ ‫و‬ ‫دﻫﯿﺪ‬ ‫ﻗﺮار‬
‫ﻧﻤﺎﯾﺪ‬ ‫ﻣﻌﺪوم‬ ‫آزﻣﺎﯾﺸﮕﺎه‬.
-‫ﻓﺮﯾﺰر‬ ‫در‬ ‫اﻧﻘﻀﺎء‬ ‫زﻣﺎن‬ ‫ﺗﺎ‬ ‫را‬ ‫ﮐﯿﺖ‬– 20‫ﻧﻤﺎﺋﯿﺪ‬ ‫ﻧﮕﻬﺪاري‬.‫ﺳﺮﯾﺎل‬ ‫ﺷﻤﺎره‬ ‫ﮐﻪ‬ ‫ﻣﻮادي‬ ‫و‬ ‫ﻣﺤﻠﻮﻟﻬﺎ‬ ‫ﮐﺮدن‬ ‫ﻣﺨﻠﻮط‬ ‫از‬
(Lot Number)‫ﮐﯿﺖ‬ ‫از‬ ‫و‬ ‫ﻧﻤﺎﯾﯿﺪ‬ ‫ﺧﻮدداري‬ ‫دارﻧﺪ‬ ‫ﻣﺘﻔﺎوت‬‫اﻧﻘﻀﺎ‬ ‫ﺗﺎرﯾﺦ‬ ‫ﮐﻪ‬ ‫ﻫﺎﯾﯽ‬‫ﻧﮑﻨﯿﺪ‬ ‫اﺳﺘﻔﺎده‬ ‫اﺳﺖ‬ ‫ﮔﺬﺷﺘﻪ‬ ‫آن‬ ‫ي‬.
-‫ﻫﺮ‬ ‫را‬ ‫ﻫﺎ‬ ‫ﺳﻤﭙﻠﺮ‬6‫دار‬ ‫ﻓﯿﻠﺘﺮ‬ ‫ﺳﻤﭙﻠﺮ‬ ‫ﺳﺮ‬ ‫از‬ ‫و‬ ‫ﻧﻤﺎﯾﺪ‬ ‫ﮐﺎﻟﯿﺒﺮه‬ ‫ﺑﺎر‬ ‫ﯾﮏ‬ ‫ﻣﺎه‬freeRNase- DNase‫ﻧﻤﺎﯾﯿﺪ‬ ‫اﺳﺘﻔﺎده‬.
-‫اﺑﺘﺪا‬ ‫آزﻣﻮن‬ ‫اﻧﺠﺎم‬ ‫در‬ ‫ﺳﻮال‬ ‫ﻫﺮﮔﻮﻧﻪ‬ ‫ﺑﺮوز‬ ‫ﺻﻮرت‬ ‫در‬‫دﻗﺖ‬ ‫ﺑﻪ‬‫ﺑﺎ‬ ‫ﺳﭙﺲ‬ ‫و‬ ‫ﻧﻤﺎﯾﯿﺪ‬ ‫ﻣﻄﺎﻟﻌﻪ‬ ‫را‬ ‫ﮐﯿﺖ‬ ‫دﺳﺘﻮراﻟﻌﻤﻞ‬
‫ﺑﺎﯾﺮﭘﻞ‬ ‫ﺷﺮﮐﺖ‬ ‫ﻓﻨﯽ‬ ‫ﮐﺎرﺷﻨﺎس‬‫ﻧﻤﺎﺋﯿﺪ‬ ‫ﻣﺸﻮرت‬ ‫ﻓﻨﺎور‬.
6-‫ﻻزم‬ ‫ﺗﺠﻬﯿﺰات‬ ‫و‬ ‫ﻣﻮاد‬
•‫دﺳﺘﮕﺎه‬Real Time PCR 7500/ Or 7500 Fast‫ﮐﻤﭙﺎﻧﯽ‬ ‫از‬Applied Biosystems
•‫آر‬ ‫ﺳﯽ‬ ‫ﭘﯽ‬ ‫ﺗﺎﯾﻢ‬ ‫رﯾﻞ‬ ‫ﻫﺎي‬ ‫دﺳﺘﮕﺎه‬ ‫ﺳﺎﯾﺮ‬)‫ﺟﺪول‬ ‫ﺑﻪ‬ ‫رﺟﻮع‬ ‫دﺳﺘﮕﺎه‬ ‫وﯾﺰه‬ ‫ﻣﯿﮑﺲ‬ ‫ﺑﺎﻓﺮ‬ ‫درﯾﺎﻓﺖ‬1.(
•‫ﻫﺎي‬ ‫ﺗﯿﻮب‬FastReaction tube(8 tube strip)MicroAmp®‫ﺑﺎ‬ ‫ﻫﻤﺮا‬cap‫دﺳﺘﮕﺎه‬ ‫ﺑﺮاي‬ ‫آن‬
ABI 7500 Fast‫و‬optical 8-tube strip( 0.2mL)MicroAm™‫ﺑﺎ‬ ‫ﻫﻤﺮا‬cap‫دﺳﺘﮕﺎه‬ ‫ﺑﺮاي‬ ‫آن‬ABI 7500
•‫آﻟﻮﻣﯿﻨﯿﻮﻣﯽ‬ ‫ﻫﺎي‬ ‫ﺑﻠﻮك‬‫ﺑﺎﺷﻨﺪ‬ ‫ﺳﺮد‬ ‫و‬ ‫ﮔﺮﻓﺘﻪ‬ ‫ﻗﺮار‬ ‫ﯾﺨﭽﺎل‬ ‫در‬ ‫ﻗﺒﻞ‬ ‫از‬ ‫ﮐﻪ‬.
•‫ﻣﺘﻐﯿﺮ‬ ‫ﻫﺎي‬ ‫ﺳﻤﭙﻠﺮ‬)0.5-10 µL‫و‬10-100 µL(
•‫دار‬ ‫ﻓﯿﻠﺘﺮ‬ ‫ﺳﻤﭙﻠﺮ‬ ‫ﺳﺮ‬DNase-RNase Free
•‫اﺳﭙﯿﻦ‬ ‫ﻣﯿﻨﯽ‬ ‫ورﺗﮑﺲ‬ ‫دﺳﺘﮕﺎه‬
•‫اﺳﺘﺨﺮاج‬ ‫ﮐﯿﺖ‬DNA
•‫ﭘﻮدر‬ ‫ﺑﺪون‬ ‫ﻻﺗﮑﺲ‬ ‫دﺳﺘﮑﺶ‬
7-‫وﯾﺮوس‬ ‫ﺗﯿﺘﺮ‬ ‫ﻣﺤﺎﺳﺒﻪ‬
‫ﮐﯿﺖ‬‫ﺣﺎوي‬5‫اﺳﺘﺎﻧﺪارد‬‫ﮐﻤﯽ‬‫ﺑﺎ‬‫ﻏﻠﻈﺖ‬‫ﻣﺸﺨﺺ‬‫ﻣﯽ‬‫ﺑﺎﺷﺪ‬.‫اﺳﺘﺎﻧﺪاردﻫﺎي‬‫ﮐﯿﺖ‬‫ﺑﺎ‬‫واﺣﺪ‬IU‫در‬‫ﻟﯿﺘﺮ‬ ‫ﻣﯿﻠﯽ‬ ‫ﯾﮏ‬
(IU/mL)‫ﻣﺸﺨﺺ‬‫ﺷﺪه‬‫اﻧﺪ‬.‫ﺳﺎزي‬ ‫اﺳﺘﺎﻧﺪارد‬ ‫ﭘﻨﻞ‬ ‫آﺧﺮﯾﻦ‬ ‫اﺳﺎس‬ ‫ﺑﺮا‬)WHONIBSC: 97/746(‫آزﻣﻮن‬ ‫ﺑﺮاي‬
‫ﻫﺎي‬NAT‫ﯾﮏ‬IU‫از‬HBV‫ﺑﺎ‬ ‫ﺑﺮاﺑﺮ‬5‫اﺳﺖ‬ ‫وﯾﺮوس‬ ‫از‬ ‫ﮐﭙﯽ‬.‫اﺳﺎس‬ ‫ﺑﺮ‬ ‫ﻧﺘﺎﯾﺞ‬ ‫ﮔﺰارش‬ ‫ﺑﺮاي‬ ‫ﺑﻨﺎﺑﺮاﯾﻦ‬
Copies/mL‫ﺑﺎﯾﺪ‬‫را‬ ‫آزﻣﻮن‬ ‫از‬ ‫ﺣﺎﺻﻞ‬ ‫ﻧﺘﺎﯾﺞ‬‫ﻋﺪد‬ ‫در‬5‫ﮐﺮد‬ ‫ﺿﺮب‬.
8-‫ژﻧﻮم‬ ‫اﺳﺘﺨﺮاج‬ ‫روش‬
‫اﺳﺘﺨﺮاج‬ ‫ﺑﺮاي‬ ‫ﺷﻮد‬ ‫ﻣﯽ‬ ‫ﺗﻮﺻﯿﻪ‬DNA‫ﻫﺎي‬ ‫دﺳﺘﮕﺎه‬ ‫از‬ ‫ﯾﺎ‬ ‫و‬ ‫ﻣﻌﺘﺒﺮ‬ ‫ﺑﺮﻧﺪﻫﺎي‬ ‫از‬ ‫اﺳﺘﺎﻧﺪارد‬ ‫اﺳﺘﺨﺮاج‬ ‫ﻫﺎي‬ ‫ﮐﯿﺖ‬ ‫از‬
‫ﮔﺮدد‬ ‫اﺳﺘﻔﺎده‬ ‫ﻣﻌﺘﺒﺮ‬ ‫ﻫﺎي‬ ‫ﮐﻤﭙﺎﻧﯽ‬ ‫از‬ ‫اﺗﻮﻣﺎﺗﯿﮏ‬ ‫اﺳﺘﺨﺮاج‬.
‫ﻧﮑﺘﻪ‬:‫ﮐﻪ‬ ‫ﮐﺮد‬ ‫دﻗﺖ‬ ‫ﺑﺎﯾﺪ‬ ‫دﯾﮕﺮ‬ ‫روﺷﻬﺎي‬ ‫از‬ ‫اﺳﺘﻔﺎده‬ ‫ﺻﻮرت‬ ‫در‬CT‫ﻧﻤﻮﻧﻪ‬‫وﯾﺮوس‬ ‫ﻓﺎﻗﺪ‬‫دﺗﮑﺘﻮر‬ ‫ﺑﺮاي‬JOE‫ﺑﻪ‬ ‫ﻣﺮﺑﻮط‬
‫داﺧﻠﯽ‬ ‫ﮐﻨﺘﺮل‬)IC(‫ﻣﺤﺪوده‬ ‫در‬CT= 32± 3‫ﺑﺎﺷ‬‫ﺪ‬.‫اﺳﺖ‬ ‫ﻣﻌﺘﺒﺮ‬ ‫ژﻧﻮم‬ ‫اﺳﺘﺨﺮاج‬ ‫ﻣﺮﺣﻠﻪ‬ ‫اﯾﻨﺼﻮرت‬ ‫در‬ ‫ﻓﻘﻂ‬.
‫اﺳﺘﺨﺮاج‬ ‫از‬ ‫ﭘﺲ‬DNA‫واﮐﻨﺶ‬ ‫اﻧﺠﺎم‬ ‫و‬ ‫ﺑﯿﻤﺎر‬ ‫ﻧﻤﻮﻧﻪ‬ ‫از‬ ‫وﯾﺮوس‬Real Time PCR‫ﺗﻮاﻟﯽ‬ ‫ﺣﻀﻮر‬DNA‫اﺧﺘﺼﺎﺻﯽ‬
‫ﻋﻨﻮان‬ ‫ﺑﻪ‬ ‫و‬ ‫ﺷﻮد‬ ‫ﻣﯽ‬ ‫داده‬ ‫ﺗﺸﺨﯿﺺ‬ ‫واﮐﻨﺶ‬ ‫از‬ ‫ﺳﯿﮑﻞ‬ ‫ﻫﺮ‬ ‫در‬ ‫ﻓﻠﻮرﺳﺎﻧﺲ‬ ‫ﻣﯿﺰان‬ ‫اﻓﺰاﯾﺶ‬ ‫ﺑﺎ‬ ‫واﮐﻨﺶ‬ ‫در‬ ‫وﯾﺮوس‬CT‫ﺗﻮﺳﻂ‬
‫دﺳﺘﮕﺎه‬Real Time‫ﮔﺮدد‬ ‫ﻣﯽ‬ ‫ﮔﺰارش‬.‫اﺳﺘﺎﻧﺪارد‬ ‫ﻣﻨﺤﻨﯽ‬)Standards Curve(‫ﺷﺪه‬ ‫ﻣﺸﺨﺺ‬ ‫ﻏﻠﻈﺖ‬ ‫ﺗﺮﺳﯿﻢ‬ ‫ﺑﺎ‬

5. HBV QUANTITATIVE REAL TIME PCR KIT
‫ﻣﻘﺎدﯾﺮ‬ ‫ﺑﺮاﺑﺮ‬ ‫در‬ ‫ﮐﻤﯽ‬ ‫ﻫﺎي‬ ‫اﺳﺘﺎﻧﺪارد‬CT‫ﮔﺮدد‬ ‫ﻣﯽ‬ ‫رﺳﻢ‬.‫ﻣﻘﺪار‬ ‫ﺳﭙﺲ‬CT‫ﻫﺎي‬ ‫ﻣﻨﺤﻨﯽ‬ ‫ﺑﺎ‬ ‫ﻣﻘﺎﯾﺴﻪ‬ ‫در‬ ‫ﺑﯿﻤﺎر‬ ‫ﻧﻤﻮﻧﻪ‬
‫ﻣﯿﺰان‬ ‫و‬ ‫ﺷﺪه‬ ‫ﻣﺤﺎﺳﺒﻪ‬ ‫اﺳﺘﺎﻧﺪارد‬Viral Load‫ﺷﻮد‬ ‫ﻣﯽ‬ ‫ﮔﺰارش‬ ‫و‬ ‫آﻧﺎﻟﯿﺰ‬ ‫دﺳﺘﮕﺎه‬ ‫ﺗﻮﺳﻂ‬ ‫ﻧﻤﻮﻧﻪ‬.
8-1-‫ﺷﻮد‬ ‫ذوب‬ ‫اﺗﺎق‬ ‫دﻣﺎي‬ ‫در‬ ‫ﺗﺎ‬ ‫دﻫﯿﺪ‬ ‫اﺟﺎزه‬ ‫و‬ ‫ﮐﺮده‬ ‫ﺧﺎرج‬ ‫ﻓﺮﯾﺰر‬ ‫از‬ ‫را‬ ‫ﺑﯿﻤﺎر‬ ‫ﺳﺮم‬ ‫ﯾﺎ‬ ‫و‬ ‫ﭘﻼﺳﻤﺎ‬ ‫ﻧﻤﻮﻧﻪ‬.‫ﻧﻤﻮﻧﻪ‬ ‫ﺳﭙﺲ‬
‫ﻣﺪت‬ ‫ﺑﻪ‬ ‫را‬ ‫ﺳﺮم‬ ‫ﯾﺎ‬ ‫و‬ ‫ﭘﻼﺳﻤﺎ‬30‫ﺳﺎﻧﺘﺮﯾﻔﯿﻮژ‬ ‫ﮐﻮﺗﺎﻫﯽ‬ ‫ﻣﺪت‬ ‫ﺑﺮاي‬ ‫و‬ ‫ﮐﺮده‬ ‫ورﺗﮑﺲ‬ ‫ﺛﺎﻧﯿﻪ‬‫ﻧﻤﺎﯾﺪ‬.‫ﻣﻘﺪار‬ ‫ﺳﭙﺲ‬200 µL‫از‬
‫ﻣﯿﮑﺮوﺗﯿﻮب‬ ‫ﯾﮏ‬ ‫در‬ ‫را‬ ‫ﺑﯿﻤﺎر‬ ‫ﭘﻼﺳﻤﺎي‬ ‫ﯾﺎ‬ ‫و‬ ‫ﺳﺮم‬1.5 mL‫رﯾﺨﺘﻪ‬‫اﺳﺘﺨﺮاج‬ ‫دﺳﺘﮕﺎﻫﻬﺎي‬ ‫ﯾﺎ‬ ‫و‬ ‫ﮐﯿﺖ‬ ‫از‬ ‫اﺳﺘﻔﺎده‬ ‫ﺑﺎ‬
‫اﺗﻮﻣﺎﺗﯿﮏ‬DNA‫ﻧﻤﺎﺋﯿﺪ‬ ‫اﺳﺘﺨﺮاج‬ ‫را‬ ‫ﻧﻤﻮﻧﻪ‬ ‫در‬ ‫وﯾﺮوس‬.
ü‫اﺳﺘﺨﺮاج‬ ‫ﮐﯿﺖ‬QIAamp DNA Blood mini Kit)‫ﮐﯿﺎژن‬(‫ﺷﻮد‬ ‫ﻣﯽ‬ ‫ﺗﻮﺻﯿﻪ‬.
ü‫ﻣﻬﻢ‬ ‫ﺗﻮﺟﻪ‬:‫ﻣﻨﻔﯽ‬ ‫ﻧﺘﺎﯾﺞ‬ ‫ﺻﺤﺖ‬ ‫از‬ ‫اﻃﻤﯿﻨﺎن‬ ‫ﺑﺮاي‬Viral Load‫ﻫﺎي‬ ‫ﮐﻨﻨﺪه‬ ‫ﻣﻤﺎﻧﻌﺖ‬ ‫ﺣﻀﻮر‬ ‫ﻋﺪم‬ ، ‫ﺑﯿﻤﺎران‬
‫واﮐﻨﺶ‬PCR‫اﺳﺘﺨﺮاج‬ ‫ﻫﻨﮕﺎم‬ ‫در‬ ‫اﺳﺘﺨﺮاج‬ ‫ﮐﻨﺘﺮل‬ ‫از‬ ‫اﻃﻤﯿﻨﺎن‬ ‫و‬5µL‫ﻣﺨﻠﻮط‬ ‫ﺑﻪ‬ ‫داﺧﻠﯽ‬ ‫ﮐﻨﺘﺮل‬ ‫ﻧﻤﻮﻧﻪ‬ ‫از‬
‫ﮐﻨﻨﺪه‬ ‫ﻟﯿﺰ‬ ‫ﺑﺎﻓﺮ‬/‫ﮐﻨﯿﺪ‬ ‫اﺿﺎﻓﻪ‬ ‫ﭘﻼﺳﻤﺎ‬.
ü‫ﻧﮑﻨﯿﺪ‬ ‫اﺿﺎﻓﻪ‬ ‫ﺳﺮم‬ ‫ﯾﺎ‬ ‫ﭘﻼﺳﻤﺎ‬ ‫ﺑﻪ‬ ‫ﻣﺴﺘﻘﯿﻤﺎ‬ ‫را‬ ‫داﺧﻠﯽ‬ ‫ﮐﻨﺘﺮل‬ ‫ﻧﻤﻮﻧﻪ‬ ‫ﻫﺮﮔﺰ‬.
7-2‫ﮐﻨﯿﺪ‬ ‫اﺳﺘﺨﺮاج‬ ‫ﻫﻢ‬ ‫را‬ ‫ﻣﻨﻔﯽ‬ ‫ﮐﻨﺘﺮل‬ ‫ﻧﻤﻮﻧﻪ‬ ‫ﯾﮏ‬ ‫آزﻣﻮن‬ ‫ﻫﺮ‬ ‫در‬.‫ﺣﺠﻢ‬BufferElution‫ﻧﻬﺎﯾﯽ‬50µL‫ﺑﺎﺷﺪ‬.‫زﻣﺎن‬ ‫ﺗﺎ‬
‫آزﻣﺎﯾﺶ‬ ‫اﻧﺠﺎم‬‫ﺗﻮان‬ ‫ﻣﯽ‬DNA‫ﻓﺮﯾﺰر‬ ‫در‬ ‫را‬ ‫ﺷﺪه‬ ‫اﺳﺘﺨﺮاج‬-20‫داد‬ ‫ﻗﺮار‬.
‫ﺗﻮﺟﻪ‬:
v‫ﺣﺠﻢ‬ ‫اﮔﺮ‬Elution Buffer‫ﻧﻬﺎﯾﯽ‬‫ﺑﮕﯿﺮﯾﺪ‬ ‫ﺗﻤﺎس‬ ‫ﺷﺮﮐﺖ‬ ‫ﻓﻨﯽ‬ ‫ﮐﺎرﺷﻨﺎس‬ ‫ﺑﺎ‬ ‫ﺣﺘﻤﺎ‬ ‫دادﯾﺪ‬ ‫ﺗﻐﯿﯿﺮ‬ ‫را‬.
v
v‫اﺳﺘﺎﻧﺪارد‬ ‫ﻫﺎي‬ ‫وﯾﺎل‬)‫ﺳﺒﺰ‬ ‫درب‬(‫ﻧﮑﻨﯿﺪ‬ ‫اﺳﺘﺨﺮاج‬ ‫ﻫﺮﮔﺰ‬ ‫را‬.
9-‫ﺳﺎزي‬ ‫آﻣﺎده‬‫ﻫﺎ‬ ‫واﮐﻨﺶ‬
9-1-‫ﻣﯿﮑﺲ‬ ‫ﻣﺴﺘﺮ‬ ‫ﺗﻬﯿﻪ‬
‫دﻫﯿﺪ‬ ‫اﻧﺠﺎم‬ ‫ﺧﻮاﻫﯿﺪ‬ ‫ﻣﯽ‬ ‫ﮐﻪ‬ ‫ﻫﺎي‬ ‫واﮐﻨﺶ‬ ‫ﺗﻌﺪاد‬ ‫اﺳﺎس‬ ‫ﺑﺮ‬.‫ﺷﺎﻣﻞ‬ ‫ﮐﯿﺖ‬ ‫ﻫﺎي‬ ‫وﯾﺎل‬Buffer Mix, Probe Prime, IC‫و‬
‫اﺳﺘﺎﻧﺪاردﻫﺎ‬)QS1,QS2,QS3,QS4(‫ذوب‬ ‫ﺑﺘﺪرﯾﺞ‬ ‫ﺷﺪه‬ ‫ﺧﺮد‬ ‫ﯾﺦ‬ ‫روي‬ ‫ﺑﺮ‬ ‫ﺗﺎ‬ ‫دﻫﯿﺪ‬ ‫اﺟﺎزه‬ ‫و‬ ‫ﮐﺮده‬ ‫ﺧﺎرج‬ ‫ﻓﺮﯾﺰر‬ ‫از‬ ‫را‬
‫زﯾﺮ‬ ‫ﺟﺪوال‬ ‫اﺳﺎس‬ ‫ﺑﺮ‬ ‫و‬ ‫ﮐﻨﯿﺪ‬ ‫اﺳﭙﯿﻦ‬ ‫ﺳﭙﺲ‬ ‫و‬ ‫ورﺗﮑﺲ‬ ‫را‬ ‫آﻧﻬﺎ‬ ‫ﻣﺨﺘﺼﺮ‬ ‫ﺑﻄﻮر‬ ‫آﻧﻬﺎ‬ ‫ﺷﺪن‬ ‫ذوب‬ ‫از‬ ‫اﻃﻤﯿﻨﺎن‬ ‫از‬ ‫ﭘﺲ‬ ‫و‬ ‫ﺷﻮﻧﺪ‬
‫ﮐﻨﯿﺪ‬ ‫اﻗﺪام‬ ‫ﻣﯿﮑﺲ‬ ‫ﻣﺴﺘﺮ‬ ‫ﺗﻬﯿﻪ‬ ‫ﺑﻪ‬ ‫ﻧﺴﺒﺖ‬.‫ﻣﯿﮑﺲ‬ ‫ﻣﺴﺘﺮ‬ ‫ﺗﻬﯿﻪ‬‫ﺷﻮد‬ ‫ﻣﯽ‬ ‫اﻧﺠﺎم‬ ‫ﺻﻮرت‬ ‫دو‬ ‫ﺑﻪ‬.
v‫دا‬ ‫ﮐﻨﺘﺮل‬ ‫اﮔﺮ‬‫ﺧﻠﯽ‬‫ﺟﻬﺖ‬‫ﻫﺎي‬ ‫ﮐﻨﻨﺪه‬ ‫ﻣﻤﺎﻧﻌﺖ‬ ‫ﺣﻀﻮر‬ ‫ﻋﺪم‬ ‫از‬ ‫اﻃﻤﯿﻨﺎن‬PCR‫رود‬ ‫ﻣﯽ‬ ‫ﺑﮑﺎر‬‫را‬ ‫ﻣﺴﺘﺮﻣﯿﮑﺲ‬
‫ﺟﺪول‬ ‫اﺳﺎس‬ ‫ﺑﺮ‬3‫ﻧﻤﺎﯾﺪ‬ ‫ﺗﻬﯿﻪ‬ ‫زﯾﺮ‬.
24‫ﺗﺴﺖ‬1‫ﺗﺴﺖ‬‫ﻣﺤﻠﻮل‬
300 µL12.5 µLBuffer Mix
60 µL2.5 µLPrimer probe
12 µL0.5Internal Control
360 µL15 µLVolume Master Mix
‫ﺟﺪول‬3
v‫ﺗﻮﺟﻪ‬:‫واﮐﻨﺶ‬ ‫ﻫﺮ‬ ‫ازاي‬ ‫ﺑﻪ‬ ‫ﻓﻘﻂ‬ ‫و‬ ‫ﺷﻮد‬ ‫ﻧﻤﯽ‬ ‫ﻟﺤﺎظ‬ ‫داﺧﻠﯽ‬ ‫ﮐﻨﺘﺮل‬ ‫ﺷﺪن‬ ‫اﺿﺎﻓﻪ‬ ‫ﺣﺠﻢ‬PCR‫ﻣﻘﺪار‬0.5 µL‫از‬
‫ﺷﻮد‬ ‫ﻣﯽ‬ ‫اﺿﺎﻓﻪ‬ ‫ﻣﺴﺘﺮﻣﯿﮑﺲ‬ ‫ﺗﻬﯿﻪ‬ ‫ﺟﻬﺖ‬ ‫داﺧﻠﯽ‬ ‫ﮐﻨﺘﺮل‬ ‫وﯾﺎل‬.
v‫ﺑﺮاي‬ ‫داﺧﻠﯽ‬ ‫ﮐﻨﺘﺮل‬ ‫اﮔﺮ‬‫ﮐﻨﺘﺮل‬‫ﻫﺎي‬ ‫ﮐﻨﻨﺪه‬ ‫ﻣﻤﺎﻧﻌﺖ‬ ‫ﺣﻀﻮر‬ ‫ﻋﺪم‬ ‫از‬ ‫اﻃﻤﯿﻨﺎن‬ ‫و‬ ‫اﺳﺘﺨﺮاج‬ ‫روش‬PCR
‫رود‬ ‫ﻣﯽ‬ ‫ﺑﮑﺎر‬‫ﮐﻨ‬ ‫ﻧﻤﻮﻧﻪ‬‫ﺘ‬‫ﺷﺪه‬ ‫اﺿﺎﻓﻪ‬ ‫ﭘﻼﺳﻤﺎ‬ ‫ﻧﻤﻮﻧﻪ‬ ‫ﺑﻪ‬ ‫ﻧﻮﮐﻠﺌﯿﮏ‬ ‫اﺳﯿﺪ‬ ‫اﺳﺘﺨﺮاج‬ ‫ﻫﻨﮕﺎم‬ ‫در‬ ‫ﺑﺎﯾﺪ‬ ‫داﺧﻠﯽ‬ ‫ﺮل‬
‫ﺑﺎﺷﺪ‬)‫ﻗﺒﻼ‬‫در‬‫ﻗﺴﻤﺖ‬8‫دﻓﺘﺮﭼﻪ‬‫ﺷﺪ‬ ‫داده‬ ‫ﺗﻮﺿﯿﺢ‬.(‫ﺑﻨﺎﺑﺮاﯾﻦ‬‫ﺟﺪول‬ ‫اﺳﺎس‬ ‫ﺑﺮ‬ ‫را‬ ‫ﻣﺴﺘﺮﻣﯿﮑﺲ‬4‫ﺗﻬﯿﻪ‬ ‫زﯾﺮ‬
‫ﻧﻤﺎﯾﺪ‬.
24‫ﺗﺴﺖ‬1‫ﺗﺴﺖ‬‫ﻣﺤﻠﻮل‬
300 µL12.5 µLBuffer Mix
60 µL2.5 µLPrimer probe
360 µL15 µLVolume Master Mix
‫ﺟﺪول‬4
•‫اﺳﭙﯿﻦ‬ ‫ﺳﭙﺲ‬ ‫و‬ ‫ورﺗﮑﺲ‬ ‫ﻣﺨﺘﺼﺮ‬ ‫ﺑﻄﻮر‬ ‫را‬ ‫ﺷﺪه‬ ‫ﺗﻬﯿﻪ‬ ‫ﻣﯿﮑﺲ‬ ‫ﻣﺴﺘﺮ‬)‫ﻣﯿﮑﺮوﺳﺎﻧﺘﺮﯾﻔﯿﻮژ‬(‫ﻧﻤﺎﯾﺪ‬.
•‫ﻣﻘﺪار‬10 µL‫از‬DNA‫ﺷﺪه‬ ‫اﺳﺘﺨﺮاج‬)‫ﺑﯿﻤﺎران‬ ‫ﺑﺮاي‬(‫ﻫﺎ‬ ‫اﺳﺘﺎﻧﺪارد‬ ‫از‬ ‫ﯾﮏ‬ ‫ﻫﺮ‬ ‫و‬‫اﺿﺎﻓﻪ‬ ‫ﻣﯿﮑﺮوﺗﯿﻮب‬ ‫ﻫﺮ‬ ‫در‬
‫ﮐﻨﯿﺪ‬.
•‫ﻣﻘﺪار‬15 µL‫دارﻧﺪ‬ ‫ﻗﺮار‬ ‫ﺷﺪه‬ ‫ﺳﺮد‬ ‫آﻟﻮﻣﯿﻨﯿﻮﻣﯽ‬ ‫ﺑﻠﻮك‬ ‫روي‬ ‫ﺑﺮ‬ ‫ﮐﻪ‬ ‫ﻫﺎ‬ ‫ﺗﯿﻮب‬ ‫ﻣﯿﮑﺮو‬ ‫ﺑﻪ‬ ‫ﺷﺪه‬ ‫ﺗﻬﯿﻪ‬ ‫ﻣﯿﮑﺲ‬ ‫ﻣﺴﺘﺮ‬ ‫از‬
‫ﻧﻤﺎﯾﺪ‬ ‫اﺿﺎﻓﻪ‬.‫آﻧﺮا‬ ‫ﺳﻤﭙﻠﺮ‬ ‫ﺳﺮ‬ ‫ﻧﻮك‬ ‫ﮐﻤﮏ‬ ‫ﺑﺎ‬10‫ﭘﯿﭙﺘﺎژ‬ ‫ﺑﺎر‬‫ﻣﺨﻠﻮط‬ ‫ﮐﺎﻣﻞ‬ ‫ﺑﻄﻮر‬ ‫ﻣﯿﮑﺮوﺗﯿﻮب‬ ‫ﻫﺮ‬ ‫ﻣﺤﺘﻮﯾﺎت‬ ‫ﺗﺎ‬ ‫ﮐﻨﯿﺪ‬
‫ﮔﺮدد‬.

6. HBV QUANTITATIVE REAL TIME PCR KIT
•‫دﺳﺘﮕﺎه‬ ‫ﮐﻪ‬ ‫اﺗﺎﻗﯽ‬ ‫ﺑﻪ‬ ‫را‬ ‫آﻟﻮﻣﯿﻨﯿﻮﻣﯽ‬ ‫ﺑﻠﻮك‬ ‫ﺳﭙﺲ‬Real Time PCR‫زﯾﺮ‬ ‫ﻃﺮح‬ ‫ﻫﻤﺎﻧﻨﺪ‬ ‫و‬ ‫ﮐﻨﯿﺪ‬ ‫ﻣﻨﺘﻘﻞ‬ ‫دارد‬ ‫ﻗﺮار‬
‫ﭘﻠﯿﺖ‬ ‫داﺧﻞ‬ABI7500/ABI 7500 Fast‫دﻫﯿﺪ‬ ‫ﻗﺮار‬.
ü‫ﻣﻬﻢ‬ ‫ﻧﮑﺘﻪ‬:‫ﮐﺎر‬ ‫ﺣﯿﻦ‬ ‫آﻟﻮدﮔﯽ‬ ‫از‬ ‫ﺟﻠﻮﮔﯿﺮي‬ ‫ﺑﺮاي‬‫و‬ ‫ﻣﻨﻔﯽ‬ ‫ﮐﻨﺘﺮل‬ ،‫ﺑﯿﻤﺎر‬ ‫ﻫﺎي‬ ‫ﻧﻤﻮﻧﻪ‬ ‫ﺗﺮﺗﯿﺐ‬ ‫ﺑﻪ‬NTC‫اﻣﺎده‬ ‫را‬‫و‬ ‫ﻧﻤﻮده‬
‫ﻧﻤﺎﯾﯿﺪ‬ ‫آﻣﺎده‬ ‫را‬ ‫اﺳﺘﺎﻧﺪارد‬ ‫ﻫﺎي‬ ‫ﻧﻤﻮﻧﻪ‬ ‫ﺳﭙﺲ‬.
121110987654321
NTCNCS 6S 5S 4S 3S 2S 1A
QS4QS3QS2QS1B
C
D
E
F
G
H
S: Sample, NC: Negative Control, QS1, QS2, QS3, QS4: Standards
‫ﻧﮑﺘﻪ‬:‫ﻧﻤﻮﻧﻪ‬ ‫ﺷﻮد‬ ‫ﻣﯽ‬ ‫ﺗﻮﺻﯿﻪ‬ ‫آزﻣﻮن‬ ‫در‬ ‫آﻟﻮدﮔﯽ‬ ‫ﮔﻮﻧﻪ‬ ‫ﻫﺮ‬ ‫ﺣﻀﻮر‬ ‫ﻋﺪم‬ ‫از‬ ‫اﻃﻤﯿﻨﺎن‬ ‫ﺟﻬﺖ‬NTC)‫ﻫﺮﮔﻮﻧﻪ‬ ‫ﻓﺎﻗﺪ‬DNA‫اﺳﺖ‬
‫آن‬ ‫ﺟﺎي‬ ‫ﺑﻪ‬ ‫و‬10‫اﺳﺖ‬ ‫ﺷﺪه‬ ‫اﺿﺎﻓﻪ‬ ‫ﻣﻘﻄﺮ‬ ‫آب‬ ‫ﻣﯿﮑﺮوﻟﯿﺘﺮ‬(‫ﻧﻤﺎﯾﯿﺪ‬ ‫وارد‬ ‫آزﻣﻮن‬ ‫در‬ ‫ﻫﻢ‬ ‫را‬.
10-‫دﺳﺘﮕﺎه‬ ‫ﺑﺮﻧﺎﻣﻪ‬ ‫ﺗﻨﻈﯿﻢ‬Thermo cycler:
10-1‫ﮐﻨﯿﺪ‬ ‫دﻗﺖ‬ ‫دﺗﮑﺘﻮرﻫﺎ‬ ‫اﻧﺘﺨﺎب‬ ‫در‬.
‫ﺑﺮاي‬‫ﮔﺰارﺷﮕﺮ‬)Reporter(‫ﻫﺪف‬ ‫ﺗﻮاﻟﯽ‬)HBV Virus(:
‫ﻓﻠﻮرﺳﻨﺲ‬ ‫رﻧﮓ‬FAM‫ﮐﻨﻨﺪه‬ ‫ﺧﺎﻣﻮش‬ ‫و‬ ‫اﺳﺖ‬)Quencher(‫آن‬T‫ﮐﻨﯿﺪ‬ ‫اﻧﺘﺨﺎب‬ ‫را‬.
‫ﺑﺮاي‬‫ﮔﺰارﺷﮕﺮ‬)Reporter(‫داﺧﻠﯽ‬ ‫ﮐﻨﺘﺮل‬ ‫ﺗﻮاﻟﯽ‬)IC(:
‫ﻓﻠﻮرﺳﻨﺲ‬ ‫رﻧﮓ‬JOE‫ﮐﻨﻨﺪه‬ ‫ﺧﺎﻣﻮش‬ ‫و‬ ‫اﺳﺖ‬)Quencher(TAMRA‫ﮐﻨﯿﺪ‬ ‫اﻧﺘﺨﺎب‬ ‫را‬.
10-2‫وارد‬‫زﯾﺮ‬ ‫ﺟﺪول‬ ‫ﻣﺎﻧﻨﺪ‬ ‫ﺗﺎم‬ ‫رﯾﻞ‬ ‫دﺳﺘﮕﺎه‬ ‫ﺑﺮﻧﺎﻣﻪ‬ ‫در‬ ‫ﻫﺎ‬ ‫اﺳﺘﺎﻧﺪارد‬ ‫ﻏﻠﻈﺖ‬ ‫ﮐﺮدن‬:
5.00E+007 IU/mlHBV Standard 1
5.00E+006 IU/mlHBV Standard 2
5.00E+005 IU/mlHBV Standard 3
5.00E+004 IU/mlHBV Standard 4
5.00E+003 IU/mlHBV Standard 5
ü‫ﻣﺜﺎل‬ ‫ﺑﺮاي‬5.00E+007‫ﺑﺎ‬ ‫اﺳﺖ‬ ‫ﺑﺮاﺑﺮ‬5×
ü‫اﺧﺘﯿﺎري‬:‫ﺣﻔﻂ‬ ‫ﺑﺮاي‬Baseline‫ﺳﯿﮑﻞ‬ ‫ﻣﺤﺪوده‬ ‫در‬3-15‫ﻫﺎي‬ ‫دﺳﺘﮕﺎه‬ ‫از‬ ‫ﺑﺮﺧﯽ‬ ‫در‬Real Time‫ﻣﺜﻞ‬
Rotor Gene 6000‫ﮐﺮد‬ ‫ﻧﻈﺮ‬ ‫ﺻﺮف‬ ‫اول‬ ‫اﺳﺘﺎﻧﺪارد‬ ‫از‬ ‫ﺗﻮان‬ ‫ﻣﯽ‬.
10-3‫آزﻣﻮن‬ ‫ﺑﺮاي‬ ‫دﻣﺎﯾﯽ‬ ‫ﺑﺮﻧﺎﻣﻪ‬Real Time PCR:
1X15 min95℃Initial denaturation and
polymerase activation
45 X15 sec*95 ℃denaturation
1 min
1
60 ℃Annealing and elongation
•‫دﺳﺘﮕﺎه‬ ‫در‬ABI 7500‫ﺗﻮان‬ ‫ﻣﻲ‬34 sec‫ﻛﺮد‬ ‫اﻧﺘﺨﺎب‬ ‫را‬
•‫ﻫﺎ‬ ‫داده‬ ‫آوري‬ ‫ﺟﻤﻊ‬)Florescence collection(‫روي‬ ‫ﺑﺮ‬ ‫را‬)Stage 2@stape 2Annealing and
elongation(‫ﻧﻤﺎﯾﯿﺪ‬ ‫ﺗﻨﻈﯿﻢ‬.
11-‫آزﻣﻮن‬ ‫آﻧﺎﻟﯿﺰ‬
‫ﻓﺎ‬ ‫و‬ ‫ﮐﺮده‬ ‫ﺧﺎﻣﻮش‬ ‫را‬ ‫دﺳﺘﮕﺎه‬ ‫آزﻣﻮن‬ ‫اﺗﻤﺎم‬ ‫ﺑﻌﺪاز‬‫دﺳﮏ‬ ‫روي‬ ‫ﺑﺮ‬ ‫را‬ ‫آزﻣﻮن‬ ‫ﺑﻪ‬ ‫ﻣﺮﺑﻮط‬ ‫ﯾﻞ‬‫زدن‬ ‫ﺑﺎ‬ ‫ﮐﺎﻣﭙﯿﻮﺗﺮ‬ ‫ﺗﺎب‬×‫ﻣﻮﺟﻮد‬
‫ﺑﺮاي‬ ‫و‬ ‫ﺑﺒﻨﺪﯾﺪ‬ ‫راﺳﺖ‬ ‫ﺳﻤﺖ‬ ‫ﺑﺎﻻي‬ ‫ﮔﻮﺷﻪ‬ ‫در‬‫آﻧﺎﻟﯿﺰ‬‫ﮐﻨﯿﺪ‬ ‫ﮐﻠﯿﮏ‬ ‫آن‬ ‫روي‬ ‫ﺑﺮ‬ ً‫ا‬‫ﻣﺠﺪد‬.‫اﻧﺘﺨﺎب‬ ‫را‬ ‫ﺧﻮد‬ ‫ﻫﺎي‬ ‫ﻧﻤﻮﻧﻪ‬ ‫ﺣﺎل‬
‫دﻓﺘﺮ‬ ‫ﻣﻄﺎﺑﻖ‬ ‫و‬ ‫ﮐﻨﯿﺪ‬‫دﺳﺘﮕﺎه‬ ‫ﭼﻪ‬Real Time‫ﻧﻤﺎﯾﺪ‬ ‫آﻧﺎﻟﯿﺰ‬ ‫را‬ ‫آزﻣﻮن‬ ‫دارﯾﺪ‬ ‫اﺧﺘﯿﺎر‬ ‫در‬ ‫ﮐﻪ‬.
12-‫ازﻣﻮن‬ ‫ﺳﻨﺠﯽ‬ ‫اﻋﺘﺒﺎر‬)Assay Validation(
1
-‫زﻣﺎن‬30‫ﮐﺮد‬ ‫اﻧﺘﺨﺎب‬ ‫ﺗﻮان‬ ‫ﻣﯽ‬ ‫ﻫﻢ‬ ‫را‬ ‫ﺛﺎﻧﯿﻪ‬.

7. HBV QUANTITATIVE REAL TIME PCR KIT
‫ﺧﻂ‬Threshold‫ﻧﻤﺎﺋﯿﺪ‬ ‫رﺳﻢ‬ ‫زﯾﺮ‬ ‫ﻣﻄﺎﺑﻖ‬ ‫را‬.
12-1‫ﺧﻂ‬ ‫زﯾﺮ‬ ‫ﺑﺎﯾﺪ‬ ‫ﻫﺎ‬ ‫ﻣﻨﻔﯽ‬ ‫ﮐﻨﺘﺮل‬ ‫ﺗﻤﺎم‬Threshold‫ﮔﯿﺮﻧﺪ‬ ‫ﻗﺮار‬.‫ﺷﻮد‬ ‫ﻣﯽ‬ ‫ﻣﺸﺎﻫﺪه‬ ‫آﻟﻮدﮔﯽ‬ ‫اﮔﺮ‬)‫ﻣﻨﺤﻨﯽ‬ ‫وﺟﻮد‬
‫ﺗﮑﺜﯿﺮ‬"Amplifications plot"(‫ﻧﻤﻮﻧﻪ‬ ‫در‬NTC‫دوﺑﺎره‬ ‫ران‬ ‫ﮐﻞ‬ ‫ﺑﺎﯾﺪ‬ ‫و‬ ‫ﻧﺒﻮده‬ ‫ﺗﻔﺴﯿﺮ‬ ‫ﻗﺎﺑﻞ‬ ‫آزﻣﻮن‬ ‫از‬ ‫ﺣﺎﺻﻞ‬ ‫ﻧﺘﺎﯾﺞ‬
‫ﺷﻮد‬ ‫ﺗﮑﺮار‬.‫ﺷﻮﻧﺪ‬.
v‫ﺗﮑﺜﯿﺮ‬ ‫ﻣﻨﺤﻨﯽ‬ ‫داراي‬ ‫ﺑﺎﯾﺪ‬ ‫اﺳﺘﺎﻧﺪارد‬ ‫ﻫﺎي‬ ‫ﻧﻤﻮﻧﻪ‬ ‫ﺗﻤﺎم‬)‫ﺗﺼﺎﻋﺪي‬ ‫ﻓﺎز‬(‫اﯾﺪه‬ ‫در‬ ‫آﻧﻬﺎ‬ ‫در‬ ‫اﻃﻤﯿﻨﺎن‬ ‫ﻓﻮاﺻﻞ‬ ‫و‬ ‫ﺑﺎﺷﻨﺪ‬
‫ﺑﺎﺷﺪ‬ ‫ﺣﺎﻟﺖ‬ ‫ﺗﺮﯾﻦ‬ ‫ال‬.
v‫ﻗﺴﻤﺖ‬ ‫ﺑﭙﺬﯾﺮﯾﺪ‬ ‫واﻗﻌﯽ‬ ‫ﺗﮑﺜﯿﺮ‬ ‫ﻋﻨﻮان‬ ‫ﺑﻪ‬ ‫را‬ ‫ﺗﮑﺜﯿﺮ‬ ‫ﻫﺎي‬ ‫ﻣﻨﺤﻨﯽ‬ ‫اﯾﻨﮑﻪ‬ ‫از‬ ‫ﻗﺒﻞ‬"Component"‫اﻓﺰار‬ ‫ﻧﺮم‬
‫ﮐﻨﯿﺪ‬ ‫ﮐﻨﺘﺮل‬ ‫را‬ ‫دﺳﺘﮕﺎه‬
v‫ﻫﺎي‬ ‫ﻧﻤﻮﻧﻪ‬ ‫ﻫﻤﻪ‬ICs‫داﻣﻨﻪ‬ ‫و‬ ‫ﺑﺎﺷﻨﺪ‬ ‫ﺗﮑﺜﯿﺮ‬ ‫ﻣﻨﺤﻨﯽ‬ ‫داراي‬ ‫ﺑﺎﯾﺪ‬CT‫داﺧﻠﯽ‬ ‫ﻫﺎي‬ ‫ﮐﻨﺘﺮل‬)ICs(‫ﻧﻤﻮﻧﻪ‬ ‫ﺑﺮاي‬
‫وﯾﺮوس‬ ‫ﻓﺎﻗﺪ‬ ‫ﻫﺎي‬HBV‫ﻣﺤﺪوده‬ ‫در‬ ‫ﺑﺎﯾﺪ‬CT= 32± 3‫ﺑﺎﺷﺪ‬.
v‫ﮐﻪ‬ ‫ﺻﻮرﺗﯽ‬ ‫در‬CT‫دﺗﮑﺘﻮر‬ ‫ﺑﺮاي‬ ‫ﻣﻨﻔﯽ‬ ‫ﮐﻨﺘﺮل‬ ‫ﻧﻤﻮﻧﻪ‬JOE‫داﺧﻠﯽ‬ ‫ﮐﻨﺘﺮل‬ ‫ﺑﻪ‬ ‫ﻣﺮﺑﻮط‬)IC(‫از‬ ‫ﺧﺎرج‬ ‫در‬
‫ﻣﺤﺪوده‬CT= 32± 3‫ﺑﺎﺷﺪ‬.‫دارد‬ ‫وﺟﻮد‬ ‫اﺳﺘﺨﺮاج‬ ‫در‬ ‫ﻣﺸﮑﻠﯽ‬ ‫ﮐﻪ‬ ‫داﺷﺖ‬ ‫ﺗﻮﺟﻪ‬ ‫ﻧﮑﺘﻪ‬ ‫اﯾﻦ‬ ‫ﺑﻪ‬ ‫ﺑﺎﯾﺪ‬.
v‫ﮐﺎﻧﺎل‬ ‫در‬ ‫ﺑﺎﯾﺪ‬ ‫زﯾﺮ‬ ‫ﺟﺪول‬ ‫اﺳﺎس‬ ‫ﺑﺮ‬ ‫ﮐﻨﺘﺮل‬ ‫ﻫﺎي‬ ‫ﻧﻤﻮﻧﻪ‬)‫ﻓﯿﻠﺘﺮ‬(‫داري‬ ‫زﯾﺮ‬ ‫ﺟﺪول‬ ‫ﻫﻤﺎﻧﻨﺪ‬ ‫ﻣﺮﺑﻮﻃﻪ‬‫ﺳﮕ‬‫ﯿ‬‫ﻨﺎل‬
‫ﺑﺎﺷﻨﺪ‬.
12-2‫ﺑﺎﺷﺪ‬ ‫ﺗﮑﺜﯿﺮ‬ ‫ﻣﻨﺤﻨﯽ‬ ‫داراي‬ ‫زﯾﺮ‬ ‫ﺟﺪول‬ ‫اﺳﺎس‬ ‫ﺑﺮ‬ ‫ﺑﺎﯾﺪ‬ ‫ﻣﻌﺘﺒﺮ‬ ‫آزﻣﻮن‬ ‫ﯾﮏ‬ ‫ﻫﺎي‬ ‫ﮐﻨﺘﺮل‬:
‫ﮐﺎﻧﺎل‬JOE‫ﮐﺎﻧﺎل‬FAM‫ﻫﺎ‬ ‫ﮐﻨﺘﺮل‬
PositivePositive‫ﻣﺜﺒﺖ‬ ‫ﻫﺎي‬ ‫ﮐﻨﺘﺮل‬)‫ﻫﺎي‬ ‫اﺳﺘﺎﻧﺪارد‬
‫ﮐﯿﺖ‬(
NegativeNegative‫ﻣﻨﻔﯽ‬ ‫ﮐﻨﺘﺮل‬
v‫ﮐﻤﯽ‬ ‫ﻫﺎي‬ ‫آزﻣﻮن‬ ‫از‬ ‫ﺣﺎﺻﻞ‬ ‫ﻧﺘﺎﯾﺞ‬)‫اﺳﺘﺎﻧﺪارد‬ ‫ﻣﻨﺤﻨﯽ‬(‫ﺑﺎﺷﺪ‬ ‫زﯾﺮ‬ ‫ﻫﺎي‬ ‫وﯾﮋﮔﯽ‬ ‫داراي‬ ‫ﺑﺎﯾﺪ‬:
‫ﻣﻌﺘﺒﺮ‬ ‫ﻣﻘﺎدﯾﺮ‬‫ﮐﻨﺘﺮﻟﯽ‬ ‫ﻫﺎي‬ ‫ﺷﺎﺧﺺ‬
-3.1 /- 3.6Slop
2
90%-105%PCR Efficiency
٢
‫ﺷﯿﺐ‬
>0.98R square (R
2
)
Standard Curve with 7500 Fast DX
13-‫ﻧﺘﺎﯾﺞ‬ ‫ﺗﻔﺴﯿﺮ‬:
v‫و‬ ‫ﻣﺜﺒﺖ‬ ‫ﻫﺎي‬ ‫ﻧﻤﻮﻧﻪ‬QS‫دﻫﻨﺪ‬ ‫ﻣﯽ‬ ‫ﻧﺸﺎن‬ ‫را‬ ‫ﺳﯿﮕﻤﻮﺋﯿﺪي‬ ‫ﺗﮑﺜﯿﺮ‬ ‫ﻣﻨﺤﻨﯽ‬ ‫ﯾﮏ‬ ‫ﻫﺎ‬.‫ﻣﻨﺤﻨﯽ‬ ‫ﮐﻪ‬ ‫ﻧﻤﻮﻧﻪ‬ ‫ﻫﺮ‬
‫ﺷﻮد‬ ‫ﻣﯽ‬ ‫ﮔﺮﻓﺘﻪ‬ ‫ﻧﻈﺮ‬ ‫در‬ ‫ﻣﺜﺒﺖ‬ ‫ﻋﻨﻮان‬ ‫ﺑﻪ‬ ‫ﺑﺪﻫﺪ‬ ‫ﻧﺸﺎن‬ ‫را‬ ‫ﺗﮑﺜﯿﺮ‬.
v‫و‬ ‫ﺑﺎﺷﺪ‬ ‫ﺳﯿﮕﻤﻮﺋﯿﺪي‬ ‫ﻣﻨﺤﻨﯽ‬ ‫داراي‬ ‫ﺑﯿﻤﺎر‬ ‫ﻧﻤﻮﻧﻪ‬ ‫ﺻﻮرﺗﯿﮑﻪ‬ ‫در‬CT‫از‬ ‫ﮐﻤﺘﺮ‬40‫ﮔﺮﻓﺘﻦ‬ ‫ﻧﻈﺮ‬ ‫در‬ ‫ﺑﺪون‬ ‫ﺑﺎﺷﺪ‬ ‫داﺷﺘﻪ‬
‫ﺗ‬ ‫ﻣﺜﺒﺖ‬ ‫داﺧﻠﯽ‬ ‫ﮐﻨﺘﺮل‬ ‫دﺗﮑﺘﻮر‬ ‫ﺑﺮاي‬ ‫آن‬ ‫ﻧﺘﯿﺠﻪ‬‫ﺷﻮد‬ ‫ﻣﯽ‬ ‫ﻠﻘﯽ‬.
!!!‫ﺗﻮﺟﻪ‬:‫وﯾﺮوس‬ ‫ﮐﭙﯽ‬ ‫ﺗﻌﺪاد‬ ‫ﮐﻪ‬ ‫ﻫﻨﮕﺎﻣﯽ‬ ‫ﻣﻌﻤﻮﻻ‬ ‫ﮐﯿﺖ‬ ‫اﯾﻦ‬ ‫در‬HBV‫ﺑﯿﺸﺘﺮ‬ ‫ﺑﯿﻤﺎر‬ ‫ﻧﻤﻮﻧﻪ‬ ‫در‬‫از‬5.00E+005 IU/mL
‫ﺷﻮد‬ ‫ﻧﻤﯽ‬ ‫دﯾﺪه‬ ‫داﺧﻠﯽ‬ ‫ﮐﻨﺘﺮل‬ ‫ﺗﮑﺜﯿﺮ‬ ‫ﻣﻨﺤﻨﯽ‬.
v‫وﯾﺮوس‬ ‫ﺑﺮاي‬ ‫ﺗﮑﺜﯿﺮ‬ ‫ﻣﻨﺤﻨﯽ‬ ‫ﻓﺎﻗﺪ‬ ‫ﺑﯿﻤﺎر‬ ‫ﻧﻤﻮﻧﻪ‬ ‫ﺻﻮرﺗﯿﮑﻪ‬ ‫در‬HBV‫ﺑﺮاي‬ ‫ﺗﮑﺜﯿﺮ‬ ‫ﻣﻨﺤﻨﯽ‬ ‫داراي‬ ‫ﻟﯽ‬ ‫و‬ ‫ﺑﻮده‬
‫و‬ ‫ﺑﺎﺷﺪ‬ ‫داﺧﻠﯽ‬ ‫ﮐﻨﺘﺮل‬CT‫ﺑﯿﻦ‬29‫ﺗﺎ‬35‫ﺷﻮد‬ ‫ﻣﯽ‬ ‫ﮔﺮﻓﺘﻪ‬ ‫ﻧﻈﺮ‬ ‫در‬ ‫ﻣﻨﻔﯽ‬ ‫ﻧﻤﻮﻧﻪ‬ ‫اﯾﻦ‬.
v‫وﯾﺮوس‬ ‫ﺑﺮاي‬ ‫ﺗﮑﺜﯿﺮ‬ ‫ﻣﻨﺤﻨﯽ‬ ‫ﻓﺎﻗﺪ‬ ‫ﺑﯿﻤﺎر‬ ‫ﻧﻤﻮﻧﻪ‬ ‫ﺻﻮرﺗﯿﮑﻪ‬ ‫در‬HBV‫ﺑﺎﺷﺪ‬ ‫داﺧﻠﯽ‬ ‫ﮐﻨﺘﺮل‬ ‫و‬.‫ﺗﮑﺮار‬ ‫ﺑﺎﯾﺪ‬ ‫آزﻣﻮن‬
‫ﺷﻮد‬.

8. HBV QUANTITATIVE REAL TIME PCR KIT
Amplification Curve of ICs
14‫ﯾﺎﺑﯽ‬ ‫ﻋﯿﺐ‬)Troubleshooting(
v‫ﻧﺸﻮد‬ ‫اﯾﺠﺎد‬ ‫ﻣﺜﺒﺖ‬ ‫ﮐﻨﺘﺮل‬ ‫ﻫﺎي‬ ‫ﻧﻤﻮﻧﻪ‬ ‫ﺑﺎ‬ ‫ﺳﯿﮕﻨﺎﻟﯽ‬ ‫ﻫﯿﭻ‬ ‫ﺻﻮرﺗﯿﮑﻪ‬ ‫در‬.
•‫ﺗﺮﻣﻮﺳﺎﯾﮑﻠﺮ‬ ‫دﺳﺘﮕﺎه‬ ‫ﺑﻪ‬ ‫ﻧﺎدرﺳﺖ‬ ‫دادن‬ ‫ﺑﺮﻧﺎﻣﻪ‬
‫ﺣﻞ‬ ‫راه‬:‫ﺑﺎ‬ ‫را‬ ‫ﺷﺪه‬ ‫داده‬ ‫دﻣﺎي‬ ‫ﭘﺮﻓﺎﯾﻞ‬SOP‫ﮐﻨﯿﺪ‬ ‫ﻣﻘﺎﯾﺴﻪ‬.
•‫ﻫﺎ‬ ‫اﺳﺘﺎﻧﺪارد‬ ‫ﺑﺮاي‬ ‫ﺗﮑﺜﯿﺮ‬ ‫ﻫﺎي‬ ‫ﻣﻨﺤﻨﯽ‬ ‫ﻓﺎﺻﻠﻪ‬ ‫ﺑﻮدن‬ ‫ﻧﺎﻣﻨﺎﺳﺐ‬
‫ﻋﻠﺖ‬:‫ﻧﺎﮐﺎﻓﯽ‬ ‫ﻣﯿﮑﺲ‬ ‫ﯾﺎ‬ ‫و‬ ‫ﻧﮑﺮدن‬ ‫ﻣﯿﮑﺲ‬‫اﺳﺘﺎﻧﺪارد‬ ‫ﻫﺎي‬ ‫ﻧﻤﻮﻧﻪ‬
‫ﻫﺎ‬ ‫ﺳﻤﭙﻠﺮ‬ ‫ﻧﺒﻮدن‬ ‫ﮐﺎﻟﯿﺒﺮه‬
‫ﺣﻞ‬ ‫راه‬:‫ﮐﻨﯿﺪ‬ ‫ﮐﺎﻟﯿﺒﺮ‬ ‫را‬ ‫ﺳﻤﭙﻠﺮﻫﺎ‬.
•‫واﮐﻨﺶ‬ ‫ﻧﺎدرﺳﺖ‬ ‫اﻧﺠﺎم‬PCR
‫ﺣﻞ‬ ‫راه‬:‫واﮐﻨﺶ‬ ‫اﻣﮑﺎن‬ ‫ﺻﻮرت‬ ‫در‬ ‫و‬ ‫داده‬ ‫اﻧﺠﺎم‬ ‫ﺧﻮب‬ ‫را‬ ‫ﮐﺮدن‬ ‫ﭘﯿﭙﺖ‬ ‫ﻋﻤﻞ‬ ‫و‬ ‫ﮐﺮده‬ ‫ﮐﻨﺘﺮل‬ ‫را‬ ‫ﮐﺎري‬ ‫ﻣﺮاﺣﻞ‬PCR‫دو‬ ‫را‬
‫ﺑﺎره‬‫ﮐﻨﯿﺪ‬ ‫ﺗﮑﺮار‬.‫ﺗﺸﺨﯿﺺ‬ ‫ﮐﯿﺖ‬ ‫اﯾﻨﮑﻪ‬ ‫ﯾﺎ‬ ‫و‬ ‫اﺳﺖ‬ ‫ﻧﺸﺪه‬ ‫رﻋﺎﯾﺖ‬ ‫ﮐﯿﺖ‬ ‫اﺟﺰاء‬ ‫ﺑﯿﺸﺘﺮ‬ ‫ﯾﺎ‬ ‫ﯾﮑﯽ‬ ‫ﺑﺮاي‬ ‫ﺳﺎزي‬ ‫ذﺧﯿﺮه‬ ‫ﺷﺮاﯾﻂ‬
HBV‫اﺳﺖ‬ ‫ﮔﺬﺷﺘﻪ‬ ‫ﺗﺎرﯾﺦ‬.
‫ﺣﻞ‬ ‫راه‬:‫ﻧﻤﺎﺋﯿﺪ‬ ‫ﮐﻨﺘﺮل‬ ‫را‬ ‫ﮐﯿﺖ‬ ‫اﻧﻘﻀﺎي‬ ‫ﺗﺎرﯾﺦ‬ ‫و‬ ‫ﺳﺎزي‬ ‫ذﺧﯿﺮه‬ ‫ﺷﺮاﯾﻂ‬.‫اﺳﺘﻔﺎده‬ ‫ﺟﺪﯾﺪ‬ ‫ﻫﺎي‬ ‫رﯾﺠﻨﺖ‬ ‫از‬ ‫ﻟﺰوم‬ ‫ﺻﻮرت‬ ‫در‬ ‫و‬
‫ﮐﻨﯿﺪ‬.
•‫ﺳﯿﮕﻨ‬ ‫ﮔﻮﻧﻪ‬ ‫ﻫﯿﭻ‬ ‫ﺑﺪون‬ ‫ﯾﺎ‬ ‫و‬ ‫ﺿﻌﯿﻒ‬ ‫ﺳﯿﮕﻨﺎل‬ ‫درﯾﺎﻓﺖ‬‫ﻓﻠﻮرﺳﻨﺘﯽ‬ ‫ﮐﺎﻧﺎل‬ ‫در‬ ‫ﻫﺎ‬ ‫اﺳﺘﺎﻧﺪارد‬ ‫ﻧﻤﻮﻧﻪ‬ ‫ﺑﺮاي‬ ‫ﺎﻟﯽ‬
‫ﺷﺮاﯾﻂ‬PCR‫ﻧﯿﺴﺖ‬ ‫ﻣﻨﻄﺒﻖ‬ ‫ﭘﺮوﺗﮑﻞ‬ ‫ﺑﺎ‬.
‫ﺣﻞ‬ ‫راه‬:‫ﺷﺮاﯾﻂ‬PCR‫واﮐﻨﺶ‬ ‫ﻟﺰوم‬ ‫ﺻﻮرت‬ ‫در‬ ‫و‬ ‫ﻧﻤﺎﺋﯿﺪ‬ ‫ﮐﻨﺘﺮل‬ ‫را‬PCR‫دﻫﯿﺪ‬ ‫اﻧﺠﺎم‬ ‫درﺳﺖ‬ ‫ﺗﻨﻈﯿﻤﺎت‬ ‫ﺑﺎ‬ ‫را‬.
‫ﻫﯿﭽﮕﻮﻧﻪ‬Template‫اﺳﺖ‬ ‫ﻧﺸﺪه‬ ‫اﺿﺎﻓﻪ‬.
‫ﺣﻞ‬ ‫راه‬:‫ﮐﻨ‬ ‫دﻗﺖ‬‫اﻟﮕﻮ‬ ‫و‬ ‫ﺑﺎﺷﺪ‬ ‫درﺳﺖ‬ ‫ﺷﻤﺎ‬ ‫اﺳﺘﺨﺮاج‬ ‫روش‬ ‫ﮐﻪ‬ ‫ﯿﺪ‬‫ﺑﺎﺷﺪ‬ ‫ﺷﺪه‬ ‫اﺿﺎﻓﻪ‬ ‫واﮐﻨﺶ‬ ‫ﺑﻪ‬.
•‫ﻧﻤﻮﻧﻪ‬ ‫در‬ ‫ﺗﮑﺜﯿﺮ‬ ‫ﻣﻨﺤﻨﯽ‬ ‫درﯾﺎﻓﺖ‬NTC‫و‬NC‫ﻫﺪف‬ ‫ﺗﻮاﻟﯽ‬ ‫ﺑﺮاي‬)HBV(
‫ﺳﺎزي‬ ‫آﻣﺎده‬ ‫ﻣﺮاﺣﻞ‬ ‫ﻃﯽ‬ ‫در‬PCR‫اﺳﺖ‬ ‫اﻓﺘﺎده‬ ‫اﺗﻔﺎق‬ ‫آﻟﻮدﮔﯽ‬.
‫ﺣﻞ‬ ‫راه‬:‫واﮐﻨﺶ‬PCR‫ﻧﻤﺎﺋﯿﺪ‬ ‫آﻏﺎز‬ ‫ﺟﺪﯾﺪ‬ ‫ﻫﺎي‬ ‫رﯾﺠﻨﺖ‬ ‫ﺑﺎ‬ ‫را‬.
‫ﺣﻞ‬ ‫راه‬:‫ﺷﻮد‬ ‫آﻟﻮدﮔﯽ‬ ‫رﻓﻊ‬ ‫ﻣﻨﻈﻢ‬ ‫ﻓﻮاﺻﻞ‬ ‫در‬ ‫ﺷﻤﺎ‬ ‫ﮐﺎري‬ ‫ﻓﻀﺎي‬ ‫ﮐﻪ‬ ‫ﮐﻨﯿﺪ‬ ‫ﮐﻨﺘﺮل‬.
14-‫ﮐﯿﺖ‬ ‫ﮐﺎراﯾﯽ‬Kit Performance):(
14-1‫ﮐﯿﺖ‬ ‫ﺧﻄﯽ‬ ‫داﻣﻨﻪ‬)Dynamic Range Kit:(
‫از‬ ‫ﻟﮕﺎرﯾﺘﻤﯽ‬ ‫ﺑﺼﻮرت‬ ‫ﺑﺮاﺑﺮ‬ ‫ده‬ ‫اﺧﺘﻼف‬ ‫ﺑﺎ‬ ‫رﻗﺖ‬ ‫ﺳﺮﯾﺎل‬ ‫آﻧﺎﻟﯿﺰ‬ ‫ﺑﺎ‬ ‫آزﻣﻮن‬ ‫ﺑﻮدن‬ ‫ﺧﻄﯽ‬5.00E+007 IU/mL‫ﺗﺎ‬25 IU/mL
‫ﯾﮏ‬ ‫در‬‫ران‬‫ﺑﺼﻮرت‬3‫ﺷﺪ‬ ‫اﻧﺠﺎم‬ ‫اﺳﺘﺎﻧﺪارد‬ ‫ﻏﻠﻈﺖ‬ ‫ﻫﺮ‬ ‫از‬ ‫ﺗﮑﺮار‬.‫از‬ ‫ﮐﯿﺖ‬ ‫ﺧﻄﯽ‬ ‫داﻣﻨﻪ‬5.00E+007 IU/mL‫ﺗﺎ‬25
IU/mL‫اﺳﺖ‬ ‫ﺧﻄﯽ‬ ‫اﻟﮕﻮ‬ ‫ﻏﻠﻈﺖ‬ ‫از‬.

9. HBV QUANTITATIVE REAL TIME PCR KIT
14-2‫ﮐﯿﺖ‬ ‫ﺗﺴﺨﯿﺼﯽ‬ ‫ﺣﺴﺎﯾﺖ‬:
‫ﺗﺸﺨﯿﺼ‬ ‫ﺣﺪ‬ ‫ﮐﻤﺘﺮﯾﻦ‬‫ﯽ‬‫ﮐﯿﺖ‬BP-HBV Real Time PCR Kit‫ﺑﺮاي‬16‫ﻣﻌﺎدل‬ ‫وﯾﺮوس‬ ‫از‬ ‫ﺗﯿﺘﺮ‬ ‫ﮐﻤﺘﺮﯾﻦ‬ ‫از‬ ‫ﺗﮑﺮار‬ ‫ﺑﺎر‬
25IU/ml)5‫واﮐﻨﺶ‬ ‫در‬ ‫وﯾﺮوس‬ ‫از‬ ‫ﮐﭙﯽ‬(‫اﻃﻤﯿﻨﺎن‬ ‫ﺑﺎ‬ ‫ﮐﻪ‬ ‫ﺑﻮد‬100%‫داده‬ ‫ﺗﺸﺨﯿﺺ‬‫ﻣﯽ‬‫ﺷﻮد‬.
Sensitivity: 25 IU/mL
14-3‫ﺗﮑﺮارﭘﺬﯾﺮي‬)Reproducibility:(
‫از‬ ‫ﺣﺎﺻﻞ‬ ‫ﻧﺘﺎﯾﺞ‬24‫از‬ ‫ﺗﮑﺮار‬ ‫ﺑﺎر‬3‫داد‬ ‫ﻧﺸﺎن‬ ‫را‬ ‫ﭘﺬﯾﺮي‬ ‫ﺗﮑﺮار‬ ‫ﺑﺎﻻﺗﺮﯾﻦ‬ ‫ﻫﺎ‬ ‫اﺳﺘﺎﻧﺪارد‬ ‫ﻏﻠﻈﺖ‬ ‫از‬ ‫ﻟﮕﺎرﯾﺘﻢ‬.
Best Reproducibility
Liner Range: 5.00E+007-25 IU/mL

10. HBV QUANTITATIVE REAL TIME PCR KIT
‫ﮔﺮاﻣﯽ‬ ‫ﻫﻤﮑﺎر‬
‫ھﺎي‬ ‫ﻛﯿﺖ‬BP-Real Time PCR‫ﻣﯿﺰان‬ ‫ﺗﻌﯿﯿﻦ‬ ‫ﺑﺮاي‬ ‫ﻓﻨﺎور‬ ‫ﭘﻞ‬ ‫ﺑﺎﯾﺮ‬ ‫ﺷﺮﻛﺖ‬Viral Load‫ھﺎي‬ ‫دﺳﺘﮕﺎه‬ ‫اﺳﺎس‬ ‫ﺑﺮ‬
‫ﻣﺠﻮر‬ ‫داراي‬IVD)7500 Fast DX(‫ﺷﺮﻛﺖ‬ ‫از‬Applied Biosystems‫اﺳﺖ‬ ‫ﺷﺪه‬ ‫ﺳﻨﺠﻲ‬ ‫اﻋﺘﺒﺎر‬ ‫و‬ ‫اﻧﺪازي‬ ‫راه‬.
‫ﻟﻄﻔﺎ‬‫در‬‫ﺻﻮرت‬‫وﺟﻮد‬‫ﻫﺮﮔﻮﻧﻪ‬‫ﺳﺌﻮال‬‫در‬‫ﺧﺼﻮص‬‫اﻧﺠﺎم‬،‫آزﻣﻮن‬‫ﺑﺎ‬‫ﮐﺎرﺷﻨﺎس‬‫ﻓﻨﯽ‬‫ﺷﺮﮐﺖ‬‫ﺗﻤﺎس‬‫ﺑﮕﯿﺮﯾﺪ‬‫در‬ ‫ﺗﺎ‬
‫ﺷﻮد‬ ‫داده‬ ‫ﭘﺎﺳﺦ‬ ‫ﺷﻤﺎ‬ ‫ﺳﻮاﻻت‬ ‫ﺑﻪ‬ ‫وﻗﺖ‬ ‫اﺳﺮع‬.
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