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DFATと種々の多能性細胞における
遺伝子発現プロファイルの比較解析
【背景】
                            脱分化


       多能性の獲得
                                  脂肪細胞
                    脱分化脂肪細胞株
                      (DFAT)




                            分化転換




                中胚葉               外胚葉


         脂肪細胞   骨芽細胞    軟骨細胞      神経細胞



            平滑筋細胞   骨格筋細胞         上皮細胞
【背景】
                            脱分化


       多能性の獲得
                                  脂肪細胞
                    脱分化脂肪細胞株
                      (DFAT)




   ?
  多能性に関わる遺伝子



                中胚葉
                            分化転換




                                  外胚葉


         脂肪細胞   骨芽細胞    軟骨細胞      神経細胞



            平滑筋細胞   骨格筋細胞         上皮細胞
<目的>
DFATと種々の多能性細胞の遺伝子発現プロファイルを比較解析し
       DFATの多能性に関わる遺伝子を抽出する
【材料】   Affymetrix Mouse Genome 430 2.0 Array
マイクロアレイ実験の概要

                           cDNA   in vitro     cRNA
                  逆転写               転写
   total RNA


                                  ビオチン

     マイクロアレイ
      (GeneChip)



                                         断片化



                                                 画像データ
ハイブリダイゼーション
                  染色                 スキャン


               ストレプトアビジン
                フィコエリスリン
マイクロアレイ実験の概要
【結果】     多能性細胞における遺伝子発現プロファイルの主成分分析
                        PC3                   外胚葉
                       (18%)                  中胚葉
                                              内胚葉




                                      NSC
               MSC
        PC2           DFAT
       (25%)                            ESC


                     C3H10T1/2



                                 Hb



                      PC1
                     (34%)
【結果】     多能性細胞における遺伝子発現プロファイルの主成分分析
                        PC3                    外胚葉
                       (18%)                   中胚葉
                                               内胚葉




                                       NSC
                MSC
        PC2           DFAT
       (25%)                             ESC


                      C3H10T1/2



                                  Hb


               DFATは中胚葉由来の多能性細胞と
                    PC1
                   (34%) 類似性が高い
【材料】   Affymetrix Mouse Genome 430 2.0 Array
【結果】 中胚葉由来の細胞における遺伝子発現プロファイルの主成分分析
                      PC3                                多分化能
                     (18%)                               単分化能
                             MC3T3-E1                    分化能なし




             MSC
                                            BALB/c-3T3
     PC2
    (20%)
            DFAT
                                   3T3-L1

                      C3H10T1/2


                                   C2C12



                    PC1
                   (27%)
【方法】




  PANTHERを用いて45101プローブの中から転写因子のみ(2921コ)を抽出




       Spotfireを用いて多能性細胞と分化能をもたない細胞において
                  転写因子の比較解析を行なった
多能性細胞と分化能をもたない細胞において遺伝子発現プロファイルの比較解析


                            MAS5 Absent calls

  発現している遺伝子: Present
発現しているかわからない: Marginal
 発現していない遺伝子: Absent

                          DFAT          BALB/c-3T3
                         Present          Absent



                                   5




                          MSC           C3H10T1/2
                         Present         Present
多能性細胞と分化能をもたない細胞において遺伝子発現プロファイルの比較解析


               MAS5 Absent calls




             DFAT          BALB/c-3T3
            Present          Absent



                      5




             MSC           C3H10T1/2
            Present         Present




     多能性細胞群でのみ発現している転写因子を抽出した
【今後の予定】




          DFATでノックダウン




          BALB/c-3T3で強制発現

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