Uklapanje i rezanje uzoraka za histološku analizu

1. Improved Medical Education in Basic
Sciences
for Better Medical Practicing
ImproveMEd

2. Uklapanje i rezanje uzoraka
za histološku analizu

3. Fiksacija
Uklapanje
Rezanje
Bojenje
Osnovni postupci u pripremi tkiva za histološku analizu

4. - tkivo pripremljeno za proučavanje mikroskopom
Histološki preparat

5. Označavanje i vođenje uzorka

6. Dehidriranje
fiksacija
ispiranje u vodi
dehidriranje
alkoholni fiksativ
Bouinov fiksativ
za SM
70 % alkohol
96 % alkohol
100 % alkohol
osjetljiva tkiva,
veliki uzorci
50% alkohol
70 % alkohol
96 % alkohol
100 % alkohol
postfiksacija
dehidriranje
od 5 % do
100 %
alkohola ili
acetona
za EM

7. Prosvjetljavanje
Alkohol
Ksilol Parafin Svjetlosni mikroskop
Propilen oksid Plastične smole Elektronski mikroskop

8. Uklapanje
Parafin

9. Uklapanje
Prožimanje tkiva

10. Uklapanje
Formiranje blokova
- kalupi

11. Automatizirana obrada uzoraka
- od fiksacije do prožimanja parafinom
- formiranje blokova pod kontrolom djelatnika
- rezanje - ručno
- bojenje

12. Drugi mediji za uklapanje
Primjenjuju se ukoliko:
- reagensi korišteni u parafinskom postupku uklanjaju ili oštećuju
sastojke koji se proučavaju (lipidi)
- toplina prilikom uklapanje u parafin utječe na tkivo ili enzime
- medij za uklapanje nije dovoljno čvrst za tkivo
- su potrebni tanji rezovi
Sintetske
smole
Smrznuti
rezovi

13. Uklapanje uzoraka za analizu transmisijskim
elektronskim mikroskopom
Plastične smole
- otapalo za medij za uklapanje se postupno
zamjenjuje medijem za uklapanje

14. Fiksacija
Uklapanje
Rezanje
Bojenje
Osnovni postupci u pripremi tkiva za histološku analizu

15. Mikrotomi
Rotacijski
Klizni

18. Ravnanje i montiranje rezova

20. Adhezivna
stakla
Obična
stakla
Montiranje
rezova

21. Serijski rezovi

22. Priprema rezova za bojenje
Deparafiniranje – uranjanje rezova u ksilol (otapalo za parafin)
– uklanja se parafin iz reza
Rehidriranje – uranjanje rezova u alkohole sve niže koncentracije, a zatim u
vodu

23. Rezanje rezova za elektronsku
mikroskopiju (ultramikrotom)
Polutanki rezovi
- 0,1 – 2,5 µm
- analiza svjetlosnim mikroskopom
Ultratanki rezovi
- 8 – 100 nm

24. rezanje

25. vanjski promjer mrežice = 3mm
rezanje

26. Fiksacija
Uklapanje
Rezanje
Bojenje
Osnovni postupci u pripremi tkiva za histološku analizu