1. TOXICITY STUDY AND ANTIOXIDANT ACTIVITY OF
OLIVE MILL WASTE WATER EXTRACT OBTAINED BY
MEMBRANE ULTRAFILTRATION
RELATORE CANDIDATA
Prof. Vincenzo Pezzi Priskila Widjaja
CO-RELATORE 159380
Dott. Stefano Curcio
Dott. Sudip Chakraborty
Dipartimento di Farmacia e Scienza della Salute e della Nutrizione
Corso di Laurea Magistrale in Scienza della Nutrizione
Tesi di Laurea Sperimentale in
BIOLOGIA APPLICATA

2. INTRODUZIONE
Area Mediterranea offre il 97% della produzione di oliva
Fornire 95 % olio d’oliva mondiale
All’interno del processo di fressatura, quasi 80% vinacce sono
scartati come grande quantitá di Acqua Vegetazione
Composti FENOLICI e materia organica sono cosiderati come
PROBLEMATICI per la fitotossica e carracteristico
antibatterico in cui sono resistenti alla degradazione biologica

3. Circa 53% di FENOL che viene dal processo di molitura delle
oliva va con ACQUA VEGETAZIONE
Mentre oltra 45% va con vinacce e pietra come rifiuti solidi
Molti processi biologici e fisico sono state eseguite per trattare
AV, alcuni processi garantiscono efficienza in controllo
dell’inquinamento, ma grande quantitá di fanghi e crea altro
PROBLEMA AMBIENTALE

4. Separazione Membrana avuto posto importante nella tecnologia
chimica e giá stata utilizata in una vasta gamma applicazione
La membrana può definito come barriera permselective tra 2
fasi omogenee grazia alla forza pressione
I benefici sono: risparmio energetico, ambientale benigno, la
semplicitá e facile di controllare
Microfiltration, Ultrafiltration, Nanofiltration sono giá stabilite
in varie applicazioni nel trattamento delle acque, industria
alimentare, farmaceutica e biotecnologia

5. OBIETTIVO DI RICERCA
Valutare il comportamento di differenti membrana per
purificare AV
Osservare attivitá antiossidante e fenolico totale di
permeato
Osservare la citotossicitá tra le colture cellulari e danni
al AND in cellule esposte

6. MATERIALE E METODO
Feed AV
(+ a.citrico)
Filtro di Cotone
Centrifugazione al 3500 rpm per 15 min
Pre-Trattamento
40C -100C
Lab Fenomena trasporti
DIMES, UNICAL

7. Poly ethersulphonate 30 e 100 kDa
Cellulosa acetate 30 e 100 kDa
𝐽𝑣 =
𝐿𝑝
∆𝑝
𝐼𝑓 = 1 −
𝐿𝑝𝑥
𝐿𝑝𝑜
. 100
𝐹𝑅 =
𝐿𝑝𝑜
𝐿𝑝𝑖
. 100

8. Total Phenol : Folin-cicalteau
Attivitá antiossidante : DPPH e ABTS
[Lab Tecnologia Farmaceutica, UNICAL]
Citotossicitá del MCF-7 : MTT assay, 72 h
[Lab Biologia Applicata, UNICAL]
Citotossicitá del NCTC 929 : Resazulin colorazione, 72 h
Attivitá anti parasite : epimastigote T.cruzi, promastigote
L.infantum e L braziliensis
[Central Desarrollo Investigazione, Asuncion, Paraguay]
Genotossicitá cellular : Comet assay
[Lab Genetic Toxixidad, UCA, Paraguay]

9. RISULTATO E DISCUSSIONE
Tipo Membrane If FR (%)
PES 100 kDa 74.73b 71.54a
PES 30 kDa 42.9a 74.55a
Cel 100 kDa 50a 92.53b
Cel 30 kDa 56a 88.98b
Flusso del PES membrane facilmente fallo
Più grande il poro, più facile di essere blocata
Cel membrane offre più recoperazione di flusso

10. Fenolo totale del Feed e Permeato di Acqua Vegetazione
Temperatura Sample Fenolo (mg/g CatEq)
40C Feed 3.05 ± 0.03 a
Cel 100 kDa 2.29 ± 0.05 b
Cel 30 kDa 2.02 ± 0.05 b
PES 100 kDa 2.31 ± 0.04 a
PES 30 kDa 1.89 ± 0.04 d
-100C Feed 3.77 ± 0.02 a
Cel 100 kDa 2.28 ± 0.05 b
Cel 30 kDa 2.58 ± 0.03 c
PES 100 kDa 2.34 ± 0.06 b
PES 30 kDa 2.87 ± 0.03 d

11. Temperatura Sample IC50 (mg)
40C Feed 19.57 ± 0.14 a
Cel 100 kDa 14.48 ± 0.17 b
Cel 30 kDa 12.47 ± 0.18 c
PES 100 kDa 12.32 ± 0.15 c
PES 30 kDa 12.55 ± 0.14 c
-100C Feed 7.43 ± 0.19 a
Cel 100 kDa 7.17 ± 0.15 b
Cel 30 kDa 6.74 ± 0.23 c
PES 100 kDa 7.15 ± 0.26 b
PES 30 kDa 6.18 ± 0.23 d
IC50 di permeato misurata con DPPH

12. Temperatura Sample IC50 (mg)
40C Feed 15.92 ± 0.18 a
Cel 100 kDa 12.01 ± 0.21 c
Cel 30 kDa 8.77 ± 0.19 d
PES 100 kDa 13.78 ± 0.18 b
PES 30 kDa 9.18 ± 0.21 d
-100C Feed 8.03 ± 0.31 a
Cel 100 kDa 8.16 ± 0.25 b
Cel 30 kDa 6.62 ± 0.23 d
PES 100 kDa 8.09 ± 0.26 ab
PES 30 kDa 6.92 ± 0.19 c
IC50 di permeato misurata con ABTS

13. Parametri Concentration unit
Fenolo 272.21 ± 2.96 (mg CatEq/g)
IC50 DPPH 0.07 ± 0.09 mg
IC50 ABTS 0.09 ± 0.09 mg
Lyophilizzato del permeato PES 30 kDa

15. *
***
*
*
*
*
*
*
*
** *

16. Cell culture LD50 (mg/ml)
NCTC 929 3.14 ± 0.17
MCF 7 2.67 ± 0.15 A
Tripanosoma cruzi 2.69 ± 0.66A
Leishmania braziliensis 2.34 ± 0.48 B
Leishmania infantum 2.55 ± 0.37 B
A = statisticamente differente (p<0.05) verso LD50 NCTC 929
B = statisticamente differente (p<0.001) verso LD50 NCTC 929
Estratto di AV statisticamente dimostrato la selettivitá di
inibire la proliferazione delle cellule tra cellule normale,
cellule tumorali e parassiti unicellulari

17. Control 0.5 mg/ml 1.0 mg/ml 5.0 mg/ml
TM 0.028 ± 0.049 0.039 ± 0.068 0.054 ± 0.105 0.082 ± 0.348
OTM 0.067 ± 0.011a 0.083 ± 0.124ab 0.099 ± 0.163a 0.164 ± 0.024a
% DNA 1.723 ± 2.512 1.753 ± 2.499 1.856 ± 3.040 1.848 ± 3.053
DNA single strand break by COMET ASSAY

18. CONCLUSIONI
• Membrane Cellulosa offre meglio recupero del flusso mentre PES
30 kDa offre meglio recupero del fenolo e antiossidante
• Esstrato di AV ha dimostrato la sua capacitá di antiossidante e la
selectivitá di inibire proliferazione tra cellular normale, tumorale
e varie tipi di parasites
• Cell espuesto con estrato di AV non ha mostrato danni sul AND
opure molto basso livello di genotossicitá
• Combinazione tra trattamento membrana e lyophilizazione avuto
buono risultato nel senso di recuperare fenolo dal materia scartati

19. Terima Kasih
Grazie Mille
Muchas Gracias
Thank You