1. Uswatunnisa (105040200111114)
Senin, 11.00 (Ass. Gita)

2. Pemisahan materi DNA dari
komponen-komponen sel lainnya

3.  Visualisasi DNA dengan elektroforesis gel,
 Peninjauan pola fragmen DNA hasil pemotongan
secara enzimatik melalui teknik Hibridisasi Southern,
 Isolasi DNA genomik dalam rangka pembuatan
pustaka genomik,
 Isolasi DNA yang diperlukan sebagai cetakan
(template) dalam prosedur perbanyakan DNA secara in
vitro melalui teknik PCR

4.  Alat  Bahan
Mortar dan pestle  Daun Kakao
Gelas ukur Nitrogen cair dan PVP
 Oven CTAB dan β mercaptoetanol
 Pipet tetes  CIA/CHISAM
 Tube  Isopropanol
 Sentrifuse Buffer pencuci
 Kulkas TE
RNA se
 Ethanol

5. Siapkan alat dan bahan
Timbang bahan (daun cacao) 0,3
gr. Tambahkan N2 cair (suhu -
168ᵒC), tumbuk hingga halus
menggunakan mortar & pestle

6. Masukkan CTAB 1ml terlebih
dahulu ke dalam tip
Tambahan bahan yang sudah
ditumbuk halus
Tambahkan β mercaptoetanol
vortex bahan agar semua bahan
larut dan menjadi homogen

7. Inkubasi dengan suhu
± 65ᵒC selama 30
menit
Balik tabung tiap 15
menit agar bahan
tercampur rata.

8. Tambahkan CIA/CHISAM 700 mikroLiter
lalu kembali di Vortex
Sentrifugasi pertama dengan 6000 rpm
selama 10 menit
Tambahkan CIA/CHISAM 700 mikroliter
pada supernatan DNA

9. Sentrifugasi kedua dengan 6000
rpm selama 10 menit
Supernatan ditambahkan
isopropanol dingin 300 mikroliter
Inkubasi freezer selama 30 menit

10. Sentrifugasi ketiga dengan 1200
rpm selama 5 menit
DNA pellet ditambahi
buffer pencuci 2x. Masing-
masing 300 mikroliter

11. Resuspensi dengan TE 100
mikroliter
Ditambah dengan RNA se 2
mikroliter
Inkubasi kurang lebih 37ºC
selama 30 menit

12. Tambahkan ethanol dingin 300
mikroliter
Sentrifuse dengan 1200 rpm selama 5
menit
DNA pellet diresuspensi
TE 50 mikroliter
Elektroforensis

13.  Elektroforesis
 Prinsip Dasar: memisahkan molekul
berdasarkan berat molekulnya menggunakan
aliran listrik (lewat pori-pori gel
Elektroforesis)
 Kualitas DNA
1. Berat Molekul
2. Kemurnian Molekul

14. Spektrofotometer
Menggunakan serapan gelombang
Komponen akan mengendap sesuai beratnya.

15.  Denaturasi. Dilakukan pada suhu 92-95ºC. Proses ini
merupakan perombakan ikatan hidrogen (double-
single)
 Annealing. Dilakukan pada suhu 50-55ºC. Proses ini
merupakan penempelan primer
 Elongation. Dilakukan pada suhu 72ºC. Proses ini
merupakan pemanjangan rantai DNA sesuai urutan
basa primernya

16.  DNA template
 Enzim Tag
 dNTP
 Primer
 NFW (Nuclease Free Water)
 Buffer PCR
 MgCL2

17. Uswatunnisa (105040200111114)
Senin, 11.00 (Ass. Gita)