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Uploaded by乙玄 黃
莊兆禎
該文檔描述了利用基因檢測技術以選育雞隻，以提高其生長性狀和產蛋量，並減少經濟損失。重點介紹了三個基因：cprl2240泌乳素基因、hsp70熱休克蛋白基因及esr產蛋基因，這些基因影響雞隻的生長及繁殖性能。最終目的是選擇優良基因型的雞隻，以增加整體養雞場的經濟效益。
莊兆禎
- 1. 行政院農業委員會畜產試驗所 雞的生長性狀基因檢測 長榮大學生物科技學系 學生：莊兆禎 前言 雞隻會因一些外界環境(如:氣候)的高低及內在因素(如:內分泌)的多寡而影響其生長性能(如:體重、產蛋 數…等)，進而導致養雞場經濟上之損失，因此利用雞cPRL2240泌乳素基因、HSP70熱休克蛋白基因及ESR產蛋基 因基因檢測這項技術來進行養雞場的“選育”，留下較優良的品種(基因型)來培育下一代，將可以減少一些疾病 的產生、體重的不足及產蛋量上的不理想…等情況發生，已達增加整個養雞場經濟上的效益。 介紹 雞cPRL2240泌乳素基因 雞隻在產蛋期間隨著藾菢行為之發生，血液 中泌乳素(prolactin)含量會逐漸增加，且在停 止產蛋時達到最高峰。藾菢性是造成雞隻產 蛋數低落的重要因素之一，通常雞隻藾菢行 為的發生也伴隨著不生蛋的情形，而降低母 雞的產蛋數，造成養雞場經濟上之損失。 雞HSP70熱休克蛋白基因 熱休克蛋白(Heat shock protein,HSP)是指細 胞在反應刺激原的誘導下所生成的一組蛋 白質，特別是環境高溫的誘導。熱休克蛋 白70 (HSP70) 是熱休克蛋白家族的一重要 成員，在動物細胞生長、發育、繁殖、基 因表現及蛋白質合成扮演重要的角色。 目的 為 了 選 殖 、 選 種 步驟 Ingredient Concentration Volume (μ l) 聚合酶Super thermo Taq 5U /μ l 0.15 / 0.2 / 0.2 引子 cPRL2240-2250 F 10 pmole /μ l 0.75 / 1.0 / 1.0 引子 cPRL2240-2395 R 10 pmole /μ l 0.75 / 1.0 / 1.0 核苷酸dNTP 25μ M 1.0 / 1.0 / 1.0 緩衝液10 X Buffer 2.0 / 2.0 / 2.0 滅菌水Distilled water 14.35 / 13.8 / 13.8 模板DNA template 25-40 ng/μ l 1.0 / 1.0 / 1.0 總量Total 20 / 20 / 20 PCR mixture PCR condition First step 94℃ 5分鐘 Second step 94℃ 40秒 54℃ / 58 ℃ / 62 ℃ 30秒 72℃ 30秒 Total 35 cycle Final step 72℃ 5分鐘 4 ℃ forever 電泳 : 於3 ％ agarose gel，0.5X TBE Buffer，100V，電泳70分鐘 染色 : 1.5μ l 6X loading dye + 4μ l DNA template 於0.5μ g/mL Ethidium Bromide (EtBr，溴化乙錠) 中染色15分鐘 雞ESR產蛋基因 動情素為影響鳥類生長與繁殖的重要的 固醇類賀爾蒙之一，一般認為動情素對 細胞的作用是透過動情素與動情素接受 體結合後，調節相關的基因表現所達成。 結果 2011.07.26Marker : 50~500bp 2011.07.27 流水號 日期 結果 8758 07/26 MM 8760 07/26 MM 8761 07/26 MM 8762 07/26 MM 8763 07/26 MM 8764 07/26 MM 8765 07/26 MM 8766 07/26 MM 8767 07/26 MM 8768 07/26 MM 8769 07/26 MM 8770 07/26 MM 流水號 日期 結果 8771 07/26 MM 8772 07/26 MM 8773 07/26 MM 8774 07/26 MM 8777 07/26 MM 8754 07/27 MM 8775 07/27 MM 8776 07/27 MM 8778 07/27 MM 8369 07/27 MM 8367 07/27 MN 8368 07/27 NN 基因型 PCR Product Fragment MM 124bp / 124bp 1 MN 124bp / 148bp 2 NN 148bp / 148bp 1 判讀 : SSCP電泳步驟 1.取 8 µl PCR product DNA + 4 µl Denaturing Buffer (SSCP) 以95℃ 12分鐘denaturing，立即置入冰中，移入4℃冰箱中備用。 2.打開Genephor 電泳裝置的電源，並選定冷卻板的溫度(15℃)，打開電泳槽上蓋、電極板，與膠體固定板。 3.滴入少許dd H2O於冷卻板上，剪開GeneGel Excel 12.5/24 kit 電泳膠片，做一翹角(便於取拿)，平貼於冷卻板上(Sample Well置於負極) 。 4.小心掀去電泳膠片之上層膠膜，放下壓克力膠體固定板，剪開GeneGel Excel 12.5/24 kit 電泳膠條，黃色膠體置於正極，透明膠體置於 負極。＊記得沾些水在手上再取膠條，不然膠條易斷裂。 5.將已Denaturing的樣本各取5.5 µl 分別放入Sample Well中，放下電擊板，確實蓋上電泳槽上蓋。 6.打開連接GeneGel電泳裝置的電源，選定600 Voltage，25mA(單片電泳膠使用25mA，兩片用50mA)，及15W，按START進行電泳約2.5hr。 7.完成後，關掉電源，取出膠片，置入GeneStain Automated Gel Stainer中進行染色。 SSCP銀染步驟 1.打開自動染色儀，選定主程式1 (DNA Silver Stain 1)。 2.配製125 ml 1X Fixing solution ( 25 ml 5X Fixing solution + 25 ml 99% ethanol + 75 ml 蒸餾水 )。→ Port 1 3.配製125 ml 1X Staining solution ( 25 ml 5X sodium carbonate + 100 ml蒸餾水 )。→ Port 3 4.配製125 ml Development solution ( 25 ml 5X Sodium carbonate + 170 µl 37% Formaldehyde + 170 µl 2% sodium thiosulphate + 100 ml 蒸餾水 )。 → Port 4 5.配製125 ml Stopping and Preserving solution ( 25 ml Stopping and Preserving solution + 100 ml 蒸餾水 )。→ Port 5 6.加入 >125 ml的蒸餾水。→ Port 0 ，廢液Port 7、廢液Port 8 7.將擬染色之電泳膠片至於染色槽中，蓋上玻璃蓋。按START一次，再按一次START執行Protocol # 1：DNA Silver Stain。 8.若要同時兩片膠片，須以磁鐵隔條將兩片隔開。 9.染色完成 ( 約 2.5 hr )，再按一次START，待染液吸出後，掀開玻璃蓋，取出膠片，將膠膜覆蓋在膠體上，自然風乾。 2011.08.01 2011.08.05 NN:148 bp MN:124/148 bp Control組 無需Marker Control組 結論 雞場主人將每隻雞隻做了編號以後，確定其各個雞隻的基因，再將其同基因 型的雞隻們做區分，這麼一來他將可以進行選殖選種的系統下去運作，據各 個研究顯示，cPRL2240泌乳素基因，MM型比較不會產生藾菢行為的雞種去跟 MN型或是NN型的雞隻配種，這麼一來就不會繼續產下像NN型這種泌乳素分泌 過量情形的小雞，同樣道理，在HSP70熱休克蛋白基因裡也顯示BB型的雞種較 AA型的雞隻容易因為環境溫度過高而產生休克直接暴斃的情形發生，然而， ESR產蛋基因FF型也是因為產蛋的天數較少生的蛋也會比較多比較快，基因檢 測的目的就是留下各方面較好的基因來增加整體雞場的經濟效益。 參考資料 雞隻泌乳素基因與藾菢性之關聯性探討 httpwww.angrin.tlri.gov.twcsascsas_2010_39_4_204.pdf 雞種的熱休克蛋白70基因頻率 http://www.angrin.tlri.gov.tw/csas/csas_2005_34_4_135.htm 雞隻動情素接受體基因與母雞早熟性之關聯性探討 httpwww.angrin.tlri.gov.twcsascsas_2010_39_4_205.pdf