La práctica número 3 describe dos técnicas de tinción: 1) La tinción de Ziehl-Neelsen, que es importante para diagnosticar tuberculosis y observar bacilos ácido-alcohol resistentes en esputos. 2) La tinción de Vagó, que se usa para observar bacterias espirales y espiroquetas en sarro dental. Ambas técnicas implican fijar la muestra, teñirla con colorantes específicos y lavar para observar los resultados bajo el microscopio.

1. PRACTICA Nº3
A) COLORACION DE ZIEHL NEELSEN (coloración acido resistente o baciloscopia).
• FUNDAMENTO. Es el alto contenido de lípidos en la pared celular de ciertas
bacterias permite que el colorante una vez fijado por el calor no se desprende por
acción de los agentes colorantes (alcohol acido ).
• OBJETIVOS. Diagnosticar TBC y observar BAAR en esputo.
• MATERIALES:
 Lamina porta objetos
 Aplicador de madera
 Esputo de pacientes sospechoso de tuberculosis
 Colorantes: fucsina fenicada y azul de metileno
 Reactivos: alcohol acido
 Aceite de xilol , aceite de imersion
 Microscopio
• PROCEDIMIENTOS.
 Extender y fijar la muestra de esputo empleando un aplicador de madera.
La fijación se realiza después que seque el extendido
 Cubrir con fucsina fenicada y calentar la lamina en forma suave a la
llama del mechero hasta el desprendimiento de vapores , repetir esto hasta
por tres veces consecutivas sin llegar a la ebullición .
 Eliminar el exceso de colorante y lavar intensamente a chorro de agua
 Decolorar con alcohol acido hasta que no desprenda el colorante .
 Lavar con agua corriente y agregar gotas de azul de metileno .Dejar
actuar por 1 a 2 minutos donde actúa como colorante de de contraste.
 Lavar, secar y observar.
• RESULTADOS.
 Las observaciones se reportan como bacilos de alcohol acido resistentes
(BAAR).
 Leucocitos polimorfos nucleares
 Fibras musculares.

2. De acuerdo con la OPS:
BAAR CAMPOS RESULTADOS INTERPRETACION
1-9 En 100 + Recién empieza
1-9 En 100 ++ TBC con necrosis
caseosa
1-9 E 1 +++ Cavernas
pulmonares ,
hemoptisis
0 En >100 - negativo
B) COLORACION DEL VAGO.
• FUNDAMENTO. Las bacterias fusoespirales y espiroquetas comúnmente no se
tiñen con las técnicas usuales el método se basa primeramente en la
impregnación con mercurio cromo a nivel de la pared celular de dichos
microorganismos y solo así se podrán teñir con violeta de genciana.
• OBJETIVOS. Observar las bacterias que se encuentra en el sarro dentario:
espiroqueta, fusoespiraladas y fusobacteria.
• MATERIALES.
 Lamina porta objeto
 Palito mondadientes
 Mercurio cromo al 2%
 Colorante violeta genciana
 Muestra de sarro dentario
 Aceite de imersion
 Microscopio.
• PROCEDIMIENTO.
 Prepara la extensión del sarro dentario, empleando el palito mondadientes
sobre la lámina porta objetos, usando una gota de solución salina
fisiológica y la fijación se realiza solo al ambiente.
 Impregnar con mercurio cromo al 2% por espacio de 3 minutos. Lavar
con agua corriente.
 Cubrir con violeta genciana por espacio de 3 minutos.
 Lavar secar y observar.
• RESULTADOS. Esquematizar las observaciones
 espiroqueta, fusoespiraladas y fusobacteria.

3. CUESTIONARIO
1. ¿Por qué la tinción de ZIEHL NIEHLSEN es importante para el diagnóstico
clínico?
Es muy útil para el diagnóstico de MYCOBACTERIUM TUBERCULOSIS Y
M. LEPRAC.
Debido a la gran resistencia de las Mycobacterias y actinomicetes a pesar de ser
Gram positivas. Crean dificultades cuando se les intenta colorear por el método
Gram, debido a que ello requiere otro tipo de técnicas de coloración y para ello
es necesaria la coloración de ziehl neelsen o acido resistente.
2. ¿Qué fenómeno se presenta cuando se aplica el colorante durante la tinción de
ZIEHL NIEHLSEN?
Las bacterias acido alcohol resistente poseen una pared celular rica en lípidos y
ácidos carboxílicos (ácido mico lico) que tiene la propiedad de unirse
excepcionalmente fuerte al colorante 1 ero (fusila de Ziehl) cuando se usa el
calor como mordiente.
Una vez que se forma este complejo colorante - pared, ni siquiera la acción
conjunta del ácido y del alcohol pueden deshacerlo, ya que las paredes retienen el
colorante en forma “RESISTENTE”. De esta forma se identifica las bacterias
acido - resistentes.

4. 3. Es posible reemplazar el azul de metileno por la safranina en la coloración de
ZIEHL NIEHLSEN?
Simples. Utilizan un solo colorante. Se basan en el hecho de que las células
tienen una composición química diferente a la de su entorno, de modo que ambos
se comportan de forma diferente frente a un colorante. El colorante tiñe las
células (azul de metileno, safranina) o no (nigrosina).
La safranina (también llamada Safranina o rojo básico 2), es un colorante
biológico, de contraste que se utiliza en la Tinción de Gram para proporcionar un
color violeta más intenso a las bacterias Gram+ y tiñe de rosa a las bacterias G- ;
en histología y en citología. La safranina se usa como líquido de contraste en
algunos protocolos de tinción, coloreando el núcleo celular de rojo. También
para detectar cartílago, mucina y gránulos de mastocitos.
ZAFRANINA
Composición:
Alcohol etílico de 50º-----100 ml
Safranina (C.I. 50240)-------1 g
La preparación se realiza en frío.
En los manuales tando de histología animal como vegetal, figuran preparados con
fórmulas distintas, tanto en las concentraciones de colorante como en la de disolvente
(Martoja, 1970; Purvis-Collier-Walls 1966), Johansen 1968; Gabe, 1968; etc.). Nuestra
experiencia es que, a concentraciones mayores de colorante, éste precipita fácilmente,
siendo poco limpias las tinciones; y el exceso de colorant conlleva un exceso de
coloración.
El azul de metileno se prepara en frío a distintas concentraciones dependiendo del uso
que se quiera dar. Las dos más frecuentes son:
Composición: Existen diferentes formulaciones dependiendo del libro al que se consulte,
las más usadas son las siguientes
1)Azul de metileno (C.I. 52015)--1 g
Agua destilada --------------1000 ml
2)Azul de metileno (C.I. 52015)--1 g
Boraz-----------------------------1g
Agua destilada ---------------100 ml

5. 4. Señale la importancia de la coloración de ZIEHL NIEHLSEN
Esta tinción es útil en la detección de bacterias del género Micobacterium en muestras de
esputo. La presencia de bacilos rojos sobre fondo azul constituye un diagnóstico casi
definitivo de tuberculosis.