5. TREPONEMA PALLIDUM
• INMUNOLOGIA – V.D.R.L. Y R.P.R
SÍFILIS: Diagnostico laboratorio
Identificación del T. pallidum
• Microscopio de campo oscuro
• Espiroqueta : 0.1 a 0.2 X 6 – 20 um.
• Movimiento rotacional
• Raspados del chancro duro
• No útil en lesiones de boca
• PCR
• Biopsia
6. SÍFILIS: Diagnostico Laboratorio
SEROLOGIA
• Pruebas no Treponémicas
• VDRL
• RPR
• Pruebas Treponémicas
• FTA – ABS= (Absorción de anticuerpos
fluorescentes para treponema)
• TPHA= Prueba de Hemoaglutinación del
Treponema Pallidum
(agente causante de la sífilis).
• MHA-TP = Micro hemaglutinación
Treponema Pallidum
• ELISA IgM : basado en la captura del Ac
IgM. Útil en la Sífilis neonatal
• ELISA IgG
• Western Blot: gran valor en S, congénita.
Alta sensibilidad y especificidad
• ELISA, IFI
• Pruebas Rápidas
9. CUADRO SINÓPTICO DE LAS PRUEBAS A REALIZARSE EN LOS DIFERENTES ESTADIOS
Lesión
VDRL o RPR
Dudoso
o negativo
No
reactivo
Reactivo
FTA-ABS
Campo oscuro o
inmunofluorescencia
Reactivo
Positivo
Tratamiento
Repetir a la semana,
1 mes y 3 meses
Tratamiento
No reactivo
Falso positivo
10. Serología reactiva
de duración desconocida
o mayor de 1 año
Historia sospechosa
de sífilis
Serología reactiva
de menos de 1 año
Repetir
VDRL o RPR
Repetir VDRL o RPR
Reactivo
No reactivo
Falso positivo
No reactivo
FTA-ABS
Reactivo
Reactivo
FTA-ABS
Reactivo
Tratamiento
sífilis temprana
No reactivo
Falso positivo
Punción lumbar
para VDRL
de Líquido
cefalorraquídeo
Reactivo
Tratamiento para
sífilis latente o tardía
11. Sospecha clínica
Si
Reactivo
Repetir
Reactivo
FTA-ABS
No Reactivo
No reactivo
Reactivo
VDRL o RPR
Falso positivo
No Reactivo
FTA-ABS
Reactivo
Punción lumbar
para VDRL
de líquido
cefalorraquídeo
Evolución
desconocida
Reactivo
No Reactivo
No sífilis
Tratamiento para
sífilis tardía
Falso
positivo
12. SEROLOGICAS (V.D.R.L.)
Antígeno no Treponémico
REACTIVO DE V. D. R. L.
1. SEROLOGICAS (V.D.R.L.).
• COMPONENTES:
– Lecitina
– Cardiolipina
– Colesterol
– Buffer
PRUEBA V.D.R.L. CUALITATIVO
1. PREPARACIÓN DE LOS REACTIVOS.
El antígeno de V.D.R.L. no es necesario
preparar todo el frasco de 500 pruebas, por
que una ves preparado tiene una duración
máxima de 48 horas.
Ejemplo:
1) 1 ml. solución buffer salina, 20 gotas
antígeno (P/ 50 pruebas)
2) 0.5 ml. solución buffer salina 10 gotas
antígeno (P/25 pruebas)
3) 0.25 ml. solución buffer salina 05 gotas
antígeno (P/12 pruebas)
Muestra:
–Suero o plasma
–ANTIGENO
– 20 l para cada prueba
13. PROCEDIMIENTO:
1.Extraer sangre venosa 2 ml. aproximadamente
con anticoagulante o sin anticoagulante.
2.Centrifugar cuidadosamente a 2,500 r.p.m. por
5 minutos.
3.Inactivar el suero a 56 por 30 minutos en baño
María.(VDRL)
4. Tomar el suero inactivado 50 l. en una
superficie plano con anillo y una gota de
antígeno preparado con una aguja calibre Nº
l8.
5. Homogeneizar y colocar la lámina en un
rotador eléctrico por 4 minutos a l80 Rpm.
6. Lectura al microscopio con lente de 40 x.
180 r p m
14. METODOLOGIA - REPORTE DE RESULTADOS
•
•
•
•
REPORTE DE RESULTADOS
Reactivo: Grumos medianos a grandes
Reactivo Débil: Grumos pequeños con partículas de antígeno libre.
No Reactivo: Sin grumos (antígeno libre)
15. PRUEBA
DE V.D.R.L. CUANTITATIVO
1.Numerar 5 tubos y colocar en tubos del 1º al 5º 0.5
ml. de suero fisiológico.
2.En el 1º tubo colocar 0.5 ml de suero problema,
homogeneizar y tomar 0.5 ml para el 2º tubo,
homogeneizar y tomar 0.5 para el tercer tubo y así
sucesivamente hasta el 5º tubo.
3.De esta manera tenemos que las diluciones del suero
están en orden creciente, 1:2, 1:4, 1:8, 1:16, 1:32
diluciones.
4.Tomando el contenido de cada tubo, realizar el mismo
0.5 ml
procedimiento que para una prueba cualitativa.
5.Adicionar 01 gota de antígeno a cada uno de los
círculos del 1º al 5º , homogeneizar y rotar por 8
minutos.
6.La lectura sigue los mismos parámetros que para la
prueba cualitativa.
7.Reportar el título en términos de la más alta dilución
SUERO
en que se produzca un resultado reactivo (Reactivo
FISIOLOG
.
débil) .
1
2
3
4
5
0
.
5
SUERO H
SUERO F
HOMOGENIZAR Y RETIRAR
PARA EL TUBO 1, 0.5
ml. Y PARA T. 2 ,3 Y ASI
SUCESIVAMENTE
16. SEROLOGICAS ( R.P.R. )
( Antígeno no Treponémico)
COMPONENTES
• Cardiolipina
– Lecitina
– Colesterol
– EDTA
– Acetil colina
– Carbón
R. P. R.
(REAGINA PLASMATICA RAPIDA).
17. PRUEBA R.P.R. CUALITATIVO
Preparación de la Prueba:
• La suspensión del antígeno se presenta listo para su uso, solo requiere que antes de su
procesamiento debe estar a temperatura ambiente y homogeneiza bien antes de su
uso.
Procedimiento:
• Pipetear una gota de suero o plasma en el centro del dispositivo que trae el equipo.
• Dejar caer una gota de reactivo (antígeno) y homogeneizar con la espátula descartable.
• Llevar al rotador eléctrica, durante 8 minutos a 100 r.p.m.
Resultados:
• Reacción Negativa.- Está dada por la acumulación de carbono en el centro del círculo.
• Positivo Débil.- Se detecta por la acumulación de finos agregados negros circundados
por un área difusa de finos agregados negros.
• Reacción Positiva.- Se observa la producción de agregados negros observados
normalmente por todo el círculo de la prueba.
18. PRUEBA DE R.P.R. SEMICUANTITATIVO
1.Colocar 50 l. de suero fisiológico al 0.9 % del 1º al 5º
círculo de la tarjeta
2.Colocar 50 l. del suero problema en el primer círculo,
mezcle bien y luego transfiera 50 l. al segundo círculo
mezcle bien y transfiera 50 l. al tercero círculo, mezcle
bien y transfiera 50 l. al 4º y 5º círculo, mezcle y
descarte 50 l. del último círculo.
3.Usando un aplicador, extienda la mezcla en cada círculo
comenzando en el 5º y terminando en el 1º círculo.
4.Adicionar 01 gota de antígeno a cada uno de los círculos
del 1º al 5º , homogeneizar y rotar por 8 minutos.
5.La lectura sigue los mismos parámetros que para la
prueba cualitativa.
6.Reportar el título en términos de la más alta dilución en
que se produzca un resultado reactivo (Reactivo débil).
20. CUADRO DE TITULACION PARA LA PRUEBA DE R.P.R SEMICUANTITATIVA
DELUCIONES DEL SUERO
RESULTADO
1:2
1:4
1:8
1:16
1:32
RD
N
N
N
N
REACTIVO 2 DILS.
R
R
N
N
N
REACTIVO 4 DILS.
R
R
R
N
N
REACTIVO 8 DILS.
R
R
R
R
N
REACTIVO 16 DILS.
R
R
R
R
R
REACTIVO 32 DILS.
50 ul
25 ul
12.5 ul 6.25 ul
3.12 ul
Leyenda: N = No Reactivo RD: Reactivo Débil R: Reactivo
21. INTERPRETACION DE RESULTADOS PRUEBAS NO
TREPONEMAICAS - I y II
• Un resultado no reactivo sin evidencia clínica:
– Puede indicar que no hay infección por treponemas o que el tratamiento fue
efectivo.
• Un resultado reactivo puede indicar
– Infección presente o pasada con Treponemas patógenos.
– Puede ser una reacción falso positiva, lo cual se detecta mediante una prueba
Treponémica..
• Un resultado no reactivo con evidencia clínica:
– Puede observarse en sífilis primaria o en sífilis secundaria por exceso de
anticuerpos
• El incremento en cuatro veces el título inicial indica Infección o re-infección y la
disminución de cuatro veces el título indica un tratamiento efectivo.
1/2
1/4
1/8
1/16
1/32
22. Causas de resultados serológicos falso positivos
• Neumonía neumocócica
• Endocarditis bacteriana sub
aguda
• Chancroide
• Adicción a drogas
• Enfermedad del tejido conectivo
• Enfermedad cardiaca
reumatoide
• Enfermedad por Rickettsia
• Malaria
• Tripanosomiasis
• Múltiples transfusiones de
sangre
• Embarazo
• Tripanosomiasis
• Adulto mayor
• Vacunación
• Enfermedad hepática crónica
• Adicción a drogas
• Enfermedad del tejido
conectivo
• Enfermedad cardiaca
reumatoide
23. PRUEBAS CONFIRMATORIAS PARA SIFILIS
TPHA = Prueba de
Hemoaglutinación del Treponema
Pallidum (agente causante
de la sífilis).
El TPHA = es un equipo de
diagnóstico para la detección de
anticuerpos ESPECIFICOS al
treponema Pallidum en suero
humano, utilizando las técnicas de
Hemoaglutinación.
Hemaglutinación pasiva en la cual
el suero humano diluido es
enfrentado a glóbulos rojos de
carnero o pollo sensibilizados con
Treponema pallidum.
Cuando en la muestra de suero
existe anticuerpos contra Treponema
se forma una malla de aglutinación.
GRADOS
DE AGLUTINACION
• Ausencia de
anticuerpos
formación de botón
• Presencia de
anticuerpos
formación
