Cromatografía

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Cromatografía

  1. 1. Fase estacionaria 2 Fase móvil º 1 º º 1
  2. 2. Descubridor• El botánico ruso Mikhail Tswett (Mikhail Semenovich Tsvett, 1872-1919)
  3. 3. CROMATOGRAFÍA EN CAPA FINA.• En este caso se utiliza una placa recubierta con fase estacionaria manteniendo un pequeño espesor constante a lo largo de la placa. El eluyente ascenderá, por capilaridad, por la placa y arrastrará los componentes a lo largo de ésta produciendo “manchas” de los componentes.• Se usan láminas de: vidrio como soporte del adsorbente, plástico (ej: acetato) ó metálicos (ej: aluminio). Los tamaños de la placa para CCf convencional son: 20 x 20; 10 x 20 y 5 x 2.• Hay placas que contienen un indicador de fluorescencia, para facilitar la identificación de las muestras. Si no se usa indicador y los componentes no son coloridos se requerirán técnicas de revelado.
  4. 4. M é to d o s C ro m a to g rá fic o s F u n d a m e n to :* S o n m é to d o s e n lo s q u e lo s c o m p o n e n te s d e u n a m e z c la s e v a n re p a rtie n d o d e fo rm a d ife re n c ia d a e n tre d o s fa s e s : u n a m ó v il y o tra e s ta c io n a ria .* L a fa s e m ó v il p u e d e s e r u n g a s (c ro m a to g ra fía d e g a s e s ) o u n líq u id o (c ro m a to g ra fíalíquida) ). (cromatografía líq u id a* L a fa s e e s ta c io n a ria e s g e n e ra lm e n te u n líq u id o , q u e re c u b re la s u p e rfic ie d e p a rtíc u la s s ó lid a s , o e n o c a s io n e s e l m is m o s ó lid o . L a fa s e e s ta c io n a ria , p u e d e s e r u n le c h o p la n o (C ro m a to g ra fía capa finaao fin a opapel) p a p e l) (cromatografía de d e c a p sobre s o b re o d e s a rro lla rs e s o b re u n a c o lu m n a CROMATOGRAFIAg ra fía c o lu m n a r ) (C ro m a to SOBRE COLUMNA
  5. 5. Clasificaciones de cromatografía• Según el tipo de fase móvil y de fase estacionaria• Según el formato y la geometría de la fase estacionaria• Según el tipo de interacción entre la fase estacionaria y los solutos• Según el tipo de flujo empleado• Según el tipo de modificaciones en la fase móvil• Según el método de detección• Según la finalidad del experimento 5
  6. 6. Según el tipo de fase móvil y de fase estacionaria Fase estacionaria Fase móvil Líquido Sólido Gas Líquido Líquido adsorbido Gas 6
  7. 7. Según el formato y la geometría de la fase estacionaria Fase estacionaria Formato Por ejemplo: Placa fina Sílice Columna HPLC-NP 7
  8. 8. Según el tipo de interacción entre la fase estacionaria y los solutos Interacción Cromatografía Carga – carga Intercambio iónico Fase Normal Dipolos Fase Reversa Hidrofóbica Efecto hidrofóbico Diversa pero Afinidad específica Enlaces covalentes IMAC 8
  9. 9. Según el tipo de flujo empleado Flujo por Cromatografía Gravedad En columna Capilaridad En papel Capa fina Fluido a presión HPLC Gases 9
  10. 10. Según el tipo de modificaciones en la fase móvil Gradiente de: Polaridad Concentración pH Temperatura 10
  11. 11. Según el método de detecciónDetección porEspectroscopías IR, UV-Vis,diversas Fluorescencia, MSPropiedades físicas Índice de refracción Conductividad IonizaciónReactividad Revelado y derivatizaciónA tiempo fijo RfA distancia fija Tiempo de retención Volumen de elución 11
  12. 12. Según la finalidad del experimentoSeparación y PreparativapurificaciónSeparación, Analíticacuantificación ycaracterización 12
  13. 13. Métodos cromatográficos • De gases • En capa fina • En líquidos inmovilizados • De exclusión molecular • Intercambio iónico • Hidroxiapatita • Hidrofóbica • Afinidad • HPLC
  14. 14. T IP O S D E C R O M A T O G R A F ÍA 1 A D S O R C IÓ N E l re p a rto s e e s ta b le c e d e a c u e rd o c o n e l d ife re n te g ra d o d e a d s o rc ió n d e lo s c o m p o n e n te s d e la fa s e líq u id a o g a s s o b re u n s ó lid o (fa s e e s ta c io n a ria ). 2 REPARTO L a s e p a ra c ió n tie n e lu g a r p o r re p a rto d e s o lu b ilid a d e s d e lo s c o m p o n e n te s d e la fa s e g a s o líq u id a a l a tra v e s a r o tra fa s e líq u id a e s ta c io n a ria . 3 C A M B IO IÓ N IC O L o s c o m p o n e n te s d e la fa s e líq u id a e x p e rim e n ta n in te rc a m b io ió n ic o c o n la fa s e e s ta c io n a ria ( re s in a s ó lid a ) 4 E X C L U S IÓ N M O L E C U L A R L o s c o m p o n e n te s d e la fa s e g a s o líq u id a s e s e p a ra n p o r ta m a ñ o m o le c u la r a s u p a s o p o r u n g e l (fa s e e s ta c io n a ria ), d e fo rm a q u e lo s s o lu to s d e m a y o r ta m a ñ o p a s a n m a s rá p id a m e n te .54 CROMATOGRAFÍA
  15. 15. ¿En qué son distintas las sustancias que deseo separar?1.- Carga eléctrica2.- Hidrofobicidad superficial3.- Afinidad por iones metálicos4.- Afinidad por ligandos específicos5.- Radio hidrodinámico (tamaño) 15
  16. 16. A n á lis is C ro m a to g rá fic o * L a c ro m a to g ra fía , p e rm ite n o s ó lo s e p a ra r lo s c o m p o n e n te s d e u n a m u e s tra , s in ó ta m b ie n s u id e n tific a c ió n y c u a n tific a c ió n . A n á lis is c u a lita tiv o E s ta b a s a d o e n la m e d id a d e p a rá m e tro s c ro m a to g rá fic o s ( tie m p o s y v o lú m e n e s d e re te n c ió n ) A n á lis is c u a n tita tiv o E s tá b a s a d o e n la m e d id a d e a ltu ra s u á re a s d e p ic o s c ro m a to g rá fic o s q u e s e re la c io n a n c o n la c o n c e n tra c ió n . L a c o lu m n a c ro m a to g rá fic a y la fo rm a c o n la q u e s e d is e ñ a , c o n s titu y e e l c o ra z ó n d e la s e p a ra c ió n . E l d e te c to r s itu a d o a l fin a l d e la c o lu m n a e s e l q u e g a ra n tiz a la re s p u e s ta d e lo s c o m p o n e n te s q u e s e s e p a ra n ( lo s h a y d e m u y d iv e rs o s tip o s )55 CROMATOGRAFÍA
  17. 17. T E R M IN O L O G ÍA Y P A R Á M E T R O S C R O M A T O G R Á F IC O S E lu y e n te : A s í s e d e n o m in a a la fa s e m ó v il p o rta d o ra d e la m u e s tra E lu a to : e s e l té rm in o c o n e l q u e s e d e fin e la s a lid a d e l e lu y e n te ELU YEN TE ELU ATO c o lu m n a (e n tra ) (s a le ) (p ro c e s o d e E L U C IÓ N F lu jo : m id e la v e lo c id a d d e la fa s e m ó v il, s e e x p re s a c o m o g a s to e n v o lu m e n ( m l d is o lv e n te /m in u to d e re c o rrid o d e la c o lu m n a ) o g a s to lin e a l (c m d e re c o rrid o /m in u to ) C R O M A T O G R A M A : G rá fic a q u e e x p re s a la re s p u e s ta d e l d e te c to r e n fu n c ió n d e l tie m p o d e e lu c ió n56 CROMATOGRAFÍA
  18. 18. Análisis cualitativo cromatográficoLos parámetros cromatográficos que se utilizan en el análisis cualitativoson dos: tiempo de retención(tR) y volumen de retención (vR)Procedimiento: ambos parámetros han de ser comparados con los de unasustancia patrónInconvenientes: No se tiene siempre certeza de que ambos parámetrossean reproducibles, ni aún manteniendo condiciones de trabajo constantes.Es preferible utilizar valores relativos, en vez de absolutos. Bajo condiciones de flujo de fase móvil Fc constante: CROMATOGRAFÍA
  19. 19. 62 CROMATOGRAFÍA
  20. 20. 63 CROMATOGRAFÍA
  21. 21. 64 CROMATOGRAFÍA
  22. 22. 65 CROMATOGRAFÍA
  23. 23. INSTRUMENTACIÓN66 CROMATOGRAFÍA
  24. 24. INSTRUMENTACIÓN67 CROMATOGRAFÍA
  25. 25. en los dos tipos de cromatografía68 CROMATOGRAFÍA
  26. 26. 69 CROMATOGRAFÍA
  27. 27. (CG)Ejemplos: Conductividad térmica ( general-no destructivo) Ionización en llama (destructivo) Captura electrónica (específico-no destructivo)70 CROMATOGRAFÍA
  28. 28. EJEMPLO CG73 CROMATOGRAFÍA
  29. 29. HPLC (Detector de índice de refracción)74 CROMATOGRAFÍA
  30. 30. CROMATOGRAFÍA LÍQUIDA vs CROMATOGRAFIA DE GASES Son al día de hoy dos poderosísimas herramientas de análisis Ambas admiten acoplamiento con otras técnicas de detección (hibridación de técnicas, por ejemplo con espectrometría de masas o plasmas..etc) La cromatografía de gases, requiere muestras gaseosas o fácilmente volatilizables. El resto de muestras que no poseen esas características pueden ser analizadas por HPLC. Ambas técnicas por su versatilidad, y por las diversas posibilidades que ofrece la selección de la columna cromatográfica, permiten abordar análisis de multicomponentes en muestras de diversa procedencia, con elevada precisión y sensibilidad (dependiendo del detector).76 CROMATOGRAFÍA

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