快速自我核酸分離與指定基因檢測_Y22N01
- 1. 2021
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快速自我核酸分離 與 指定基因檢測
- 2. 2021
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* 核酸分離溶液 : 成分 (苯酚 + 琉氰酸胍) 裂解 破壞 細胞 微生物(細菌/病毒)
* 具有核膜蛋白的病毒 : 適用 75% 酒精 進行清潔消毒
* 消毒劑使用指引: >500 ppm 氯溶液 (5% 漂白水 稀釋 100倍)
https://www.cdc.gov.tw/File/Get/-cmcbEqzsb8IK9prEpIqVA
Phenol 苯酚
工業及醫學用途
苯酚可作殺菌劑、麻醉劑、防腐劑。現在苯酚可用於製備消毒劑，如TCP；或用其稀釋溶液直接進行消毒。
https://en.wikipedia.org/wiki/Phenol ; https://en.wikipedia.org/wiki/TCP_(antiseptic)
Guanidine thiocyanate : 硫氰酸胍 / 異硫氰酸胍
是一種用作一般蛋白質變性劑的化合物，它是離液劑，
從細胞中提取 DNA和RNA時最常用作 核酸保護劑
https://en.wikipedia.org/wiki/Guanidinium_thiocyanate
操作前 科普小常識
- 3. 2021
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* 核酸分離溶液 旋蓋管
* 提供 細軸棉花棒
*75% 酒精噴液
* 一般文書用剪刀
核酸 採集包
自我 預先 準備
快速自我核酸分離 與 指定基因檢測
- 4. 2021
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拿 細軸 棉花棒 自己 旋轉
鼻腔深部內壁 各10 圈
PS: 越內部會有越癢
越想打噴嚏
或更深入會流眼淚
核酸純化液管
放置在 固定架上
避免傾倒
將取樣好的棉棒 剪斷
落入核酸純化液管中
螺旋管蓋 轉緊後
拿 75%酒精
噴 外管壁 / 雙手
與 接觸過的物體後
常溫運送
自我取樣 核酸分離流程 與 核酸 運送流程
自我 取樣 核酸 運送 常溫運送 (可穩定~48hr)
PS: 或自行操作核酸快速純化分離步驟
注意 : 只需用 同一端 棉棒頭
去同時取樣自己的 兩鼻腔 即可
另一端頭為 自己手拿的位置
要剪掉的 不要掉入 核酸純化液管
- 5. 2021
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RNA 4uL
1-Step RTqPCR
Fast mode qPCR
50C 10 min
95C 1 min
45 cycles
95C 1 sec
58C 30 sec
RdRP Gene
Human RNA control RNase P (RPP30) Gene
核酸 濃縮流程
5 mins 2 mins 56 mins
< 70 min
完成
核酸 運送 到件後 流程
- 6. 2021
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500 uL
RNA Easy
+ 200 uL
ddH2O
Aspirate
300 uL
上清液體至新EP管
Binding 核酸
+ 400 uL
Isopropanol
Wash 85% 酒精
Elute RNA
5 min完成
離心 10,000 rpm 30 sec 室溫
離心 10,000 rpm 30 sec 室溫
離心 10,000 rpm 30 sec 室溫
Aspirate
700 uL
至 column 管
+ 500 uL
85% EtOH
+ 17uL
Low TE pH 6.8
快速 高品質 核酸分離純化濃縮 RNA Easy Reagent with RNA column
離心 10,000 rpm 1 min 室溫
核酸 運送 至 實驗室端 採用的濃縮方式
- 7. 2021
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快速 高品質 核酸 純化操作 結果
2 yrs child
RdRP Gene
Human RNA control RNase P (RPP30) Gene
PC RNA :
Human RNA 100 ng
Spike in artificial RdRP RNA (200 copies)
Multiplex 2 target ( 2 colors)
RNase P : Ct 24.1 VIC
RdRP : Ct 31.3 FAM
RNase P Ct Mean 25.5 SD 1.2
qPCR 分析
- 8. 2021
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Analysis Report Negative
Human RNA PASS
1-Step qPCR PASS
RdRP Negative
- 9. 2021
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Analysis Report RdRP Positive
RdRP Positive
Human RNA PASS
1-Step qPCR PASS
- 10. 2021
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Q1: 是否會有汙染的風險
A1-1 : 核酸分離試劑 成分為 強效 裂解 破壞 蛋白 的變性物質,
活細胞 或 活微生物 無法生存 常做為 消毒劑(antiseptic)的原料成分
採集外管壁 經由75% 酒精溶液噴灑後 按照建議的清潔消毒步驟執行
詳見 第二頁 科普小常識 說明
Q & A
A1-2 : 收件 樣本 為 核糖核酸(RNA/DNA) 保存於消毒劑 (antiseptic) 中
不具有任何 生物傳染力
https://en.wikipedia.org/wiki/RNA ; https://en.wikipedia.org/wiki/DNA
- 11. 2021
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Q2: 核酸是否會在運送 過程 分解
A2: 核糖核酸在 核酸分離純化液體中 可在常溫中穩定 至少48 hrs
Q & A
核酸分離管 人類RNA
內控基因穩定性測試
RNase P
Ct
0 hrs 24.2
24 hrs 25.4
48 hrs 26.4
- 12. 2021
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Q3: 目標基因檢測 數據結果 判斷分析 方式為何
A3: 目標檢測基因 為 非 受測者 原本既有基因
若確認有 目標檢測基因 存在 自我 須進一步的 聯絡 相關單位
此基因檢測分析 就只 確認具有該目標基因 存在 受測的核酸中
分析結果 屬於研究用途 (Research Use Only )
不具任何 醫療診斷用途 (Not for Diagnostic Use)
Q & A
- 13. 2021
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Q4: 如何評估 自我適合的檢測執行方式
A4 : 沒有 qPCR 儀器 自我 採集後 常溫宅配 寄回
有qPCR 儀器 與 需要的設備 且有 qPCR 基因檢測的操作分析經驗
可以使用 我們提供的核酸快速分離純化管柱 與
目標基因檢測qPCR 試劑 自我 執行操作分析
Q & A
詳見 第四頁 自我取樣 核酸分離流程 與 核酸 運送流程說明
- 14. 2021
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Q5: 變異株是否可偵測到
Q & A
https://www.ncbi.nlm.nih.gov/nucleotide/OB994625.1?report=genbank&log$=nuclalign&blast_rank=6&RID=C0WRNRR8016&from=15318&to=15430
A4-1 : 完全可以偵測到目前主要的流行株
A4-2 : 偵測 RdRP Gene 區段 (ORF1ab C5018 ~ V5056) 變異株 皆無變異
B.1.617.2 2021-05-19 印度
https://cov-lineages.org/global_report_B.1.617.2.html
B.1.1.7 2021-02-16 英國
https://cov-lineages.org/global_report_B.1.1.7.html
B.1.351 2021-02-16 南非
https://cov-lineages.org/global_report_B.1.351.html
P.1 2021-02-16 巴西
https://cov-lineages.org/global_report_P.1.html
B.1.1.529 2022-01-26 南非
https://cov-lineages.org/global_report_P.1.html
Delta
Alpha
Beta
Gamma
Omicron
Beta
Delta
Gamma
Alpha
Omicron
- 15. 2021
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Appendix
- 16. 2021
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味道刺鼻 較不適應
無刺鼻味道
加 ddH2O即可 加 氯仿 或 BCP不方便
常溫運送 (可穩定~24hr)
RNA Easy with RNA column Trizol Reagent
RNA column
快速 高品質 核酸 分離純化 操作方式 VS 常規 Trizol 分離法
20 min
5 min 快速 獲得 高濃度 濃縮的 RNA
- 17. 2021
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Thank You & Any Questions ?
LINE 搜尋 鼎捷生技
- 18. 2021
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SARS-CoV-2 RdRP gene : ref sequence
Human RNA control RNase P (RPP30) gene : ref sequence
姓名 編號 自我採集位置 自我採集時間 核酸分析報告日期
陳O緯 0630-02 鼻腔 13:00 6月30號 6月30號, 2021
基因標的 Ct 結果 判定標準
RdRP U.D 陰性 陽性 Ct < 37
RNase P 26.0 核酸採集通過 通過: Ct < 30
U.D (未可偵測到) LOD (檢測極限值) : RdRP Ct 37 ; RNase P Ct 37
Gene Ct qPCR QC
RdRP 31.3 通過
RNase P 26.4 通過
陽性核酸 RNA標準品
基因標的 檢測分析 報告
說明1:
RdRP基因標的 為非人受測者 基因
分析結果 就只確認 該基因標的 不存在 於人受測者的核酸中
說明2:
分析結果 屬於研究用途 (Research Use Only )
不具任何 醫療診斷用途 (Not for Diagnostic Use)
核酸採集通過
陰性
Report assurance : Jeff
