Prezentacja przedstawia najnowsze informacje o molekularnym mechanizmie fuzji mioblastów. Fuzja mioblastów jest konieczna dla powstania wydłużonych, wielojądrowych, funkcjonalnych włókien mięśniowych.
Beginners Guide to TikTok for Search - Rachel Pearson - We are Tilt __ Bright...
Czynniki molekularne w fuzji mioblastów
1. Czynniki molekularne
w
fuzji mioblastów
Na podstawie: „Czynniki molekularne w fuzji mioblastów“
Leokadia Kiełbówna, Marta Migocka-Patrzałek.
Postępy Biologii Komórki, 2014, 41, 4/2014:559-581
dr Marta Migocka-Patrzałek
Zakład Biologii Rozwoju Zwierząt, Instytut Biologii Eksperymentalnej
Wydział Nauk Biologicznych Uwr, e-mail
2. Miogeneza
Klasyczny model miogenezy:
1.Embrionalne komórki mięśniowe po okresie proliferacji, wycofują się
z cyklu komórkowego w fazie G1
2. Post-mitotyczne mioblasty przechodzą następujące etapy:
•rozpoznają się,
•wydłużają,
•wyrównują wzdłuż długiej osi,
•podlegają adhezji, w końcu
•zlewają się ze sobą w wielojądrowe miotuby.
3. Miogeneza
Determinację i różnicowanie mioblastów
kontrolują czynniki transkrypcyjne rodziny bHLH:
•MyoD,
•Myf5,
•Miogenina,
•MRF4,
•MEF2.
Miogenezę u strunowców inicjują:
•MyoD lub
•Myf5
4. FUZJA MIOBLASTÓW
Fuzja mioblastów powstaje w wyniku
zlania się błon komórkowych przylegających do siebie mioblastów
•W bezpośrednim pobliżu błony komórkowej występują pęcherzyki ograniczone
pojedynczą błoną, przypominające liposomy
•Pęcherzyki łączące się z błoną inicjują w niej domeny wolne od cząsteczek,
przypuszczalnie fosfolipidowych
•Błona przylegających do siebie mioblastów zlewa się w jedną dwuwarstwową
błonę, która ostatecznie zanika i prowadzi do połączenia się sarkoplazmy
komórek
5. Model fuzji mioblastów
Jednowarstwowe pęcherzyki inicjują w błonach komórkowych domeny wolne od
„cząsteczek”. Fuzja może być wynikiem działania pęcherzyka obecnego w jednej z
dwóch komórek (proces ten zobrazowano z lewej strony ryciny) lub pęcherzyków
obecnych w obu komórkach (proces zobrazowany z prawej strony ryciny)
„Czynniki
molekularne w fuzji
mioblastów“ Leokadia
Kiełbówna, Marta
Migocka-Patrzałek.
Postępy Biologii
Komórki, 2014, 41,
4/2014:559-581
6. Białka transbłonowe w adhezji
i przekazywaniu sygnałów
• Za adhezję mioblastów odpowiada wiązanie się zewnątrz-komórkowych
domen kadheryn
• Domena cytoplazmatyczna kadheryn wiąże się z cytoszkieletem
aktynowym poprzez β- i α-kateniny
Zewnątrzkomórkowa indukcja aktywności kadheryn może prowadzić do:
• zmian morfologicznych mioblastów i
• ekspresji genów mięśniowo-specyficznych
7. Ścieżki sygnalizacyjne aktywowane przez
kadheryny i receptory IgSF
Strzałki nieprzerywane symbolizują bezpośrednie wiązanie się czynników. Strzałki przerywane wskazują, że
interakcja nie jest bezpośrednia albo, że dotyczy złożonego procesu (np. ekspresji genów lub fuzji mioblastów).
Strzałki przerywane ze znakiem zapytania reprezentują niezbadane jeszcze drogi, które mogą występować w
mioblastach. Strzałki przerywane podwójne, skierowane w przeciwnych kierunkach, wskazują, że pomiędzy
białkami transbłonowymi zachodzi interakcja, o nieznanym jeszcze wpływowi na drogi sygnalizacyjne
„Czynniki
molekularne w fuzji
mioblastów“ Leokadia
Kiełbówna, Marta
Migocka-Patrzałek.
Postępy Biologii
Komórki, 2014, 41,
4/2014:559-581
8. Mioferliny i dysferliny
• Ekspresja mioferlin wzrasta w wydłużonych, różnicujących się
mioblastach a szczególnie w mioblastach zlewających się
• Ekspresja dysferlin wzrasta w miotubach
W czasie fuzji
skoncentrowanie mioferlin widoczne jest w miejscu:
• zlewających się błon komórkowych mioblastów i
• mioblastów zlewających się z miotubą
• W dojrzałych włóknach mięśniowych mioferliny podobnie jak dysferliny
występują w błonie komórkowej
* Mioferliny i dysferliny, należą do rodziny ferlin, posiadają wiele domen C2
(wiążących fosfolipidy w sposób zależny od Ca++
) w długiej cytoplazmatycznej
części, którą poprzedza domena transbłonowa
9. Budowa mioferliny
Mioferlina zbudowana jest z domeny transbłonowej (TM) i wielu domen C2.
Domena C2A wiąże się z fosfolipidami a domena DYSF jest przypuszczalnie
miejscem wiązania kaweoliny-3 [„Czynniki molekularne w fuzji mioblastów“
Leokadia Kiełbówna, Marta Migocka-Patrzałek. Postępy Biologii Komórki,
2014, 41, 4/2014:559-581]
10. Mioferlina
• Mioferlina tworzy kompleks z białkiem EHD2
• Kompleks mioferlina-EHD2 bierze udział w endocytozie białek
błonowych
- Po spełnieniu swojej funkcji białka błonowe powracają do błony
plazmatycznej – proces ten określany jest mianem „recyclingu”
Osłabienie endocytozy i „recyclingu” zaburza fuzję mioblastów
co wskazuje na endocytarne pochodzenie pęcherzyków biorących
udział w procesie zlewania się mioblastów
Mioferliny i dysferliny wchodzą w interakcje również z dużymi białkami
cytoplazmatycznymi AHNAK, które uczestniczą w reorganizacji
cytoszkieletu aktynowego
11. Ferliny pośredniczą w endocytozie
przyczyniającej się do fuzji
mioblast-mioblast i mioblast-miotuba
Oddziałujące z ferliną białko wiążące aktynę AHNAK (półkole) remodeluje cytoszkielet aktynowy, umożliwiając
endocytozę receptora wiążącego ligand. Mioferliny pośredniczą w fuzji endocytotycznych pęcherzyków z
endocytotycznym przedziałem „recyclingu” (ERC). Białka EHD (trójkąty) uczestniczą w uwolnieniu pęcherzyków z
ERC. W wyniku interakcji EHD z mioferliną pęcherzyki są transportowane z powrotem w kierunku błony
komórkowej. Białka EHD oddziałują również z białkami EHBP1 (trapezy), powodując przebudowę cytoszkieletu
aktynowego. Mioferliny towarzyszą wbudowaniu się pęcherzyków w sarkolemmę
„Czynniki
molekularne w fuzji
mioblastów“ Leokadia
Kiełbówna, Marta
Migocka-Patrzałek.
Postępy Biologii
Komórki, 2014, 41,
4/2014:559-581
12. Kalponina 3 w fuzji mioblastów
Kalponina 3 (CNN3) reguluje:
•proces fuzji mioblastów i
•ekspresję genów mięśniowo- specyficznych
Fosforylacja CNN3 zmienia właściwości wiązania aktyny z CNN3, tym
samym reguluje przebudowę cytoszkieletu niezbędną w fuzji
mioblastów
13. Struktura kalponiny 3
Wszystkie trzy rodziny białek CNN posiadają domenę homologiczną
(domena CH) oraz miejsce wiązania aktyny (ABS1). Końcowy fragment
białka CNN3, charakterystyczny dla każdej z izoform, jest długi i kwasowy.
Kropki w jego obszarze oznaczają dwa główne miejsca fosforylacji (Ser293 i
Ser296) CNN3 [„Czynniki molekularne w fuzji mioblastów“ Leokadia
Kiełbówna, Marta Migocka-Patrzałek. Postępy Biologii Komórki, 2014, 41,
4/2014:559-581]
14. Czy kręgowce prezentują ten sam mechanizm
fuzji mioblastów co Drosophila?
W odróżnieniu do Drosophila melanogaster molekularne podstawy fuzji
mioblastów kręgowców są ciągle słabo poznane
Proces fuzji mioblastów kręgowców i Drosophila wykazuje szereg
podobieństw dotyczących:
•rozpoznania się komórek,
•wyrównania mioblastów,
•adhezji,
•zaniku błon komórkowych,
•połączenia się cytoplazmy mioblastów,
•gromadzenia się elektronowo-gęstych pęcherzyków cytoplazmatycznych
w pobliżu zlewających się błon, a następnie elektronowo-gęstych blaszek
15. Fuzja mioblastów Drosophila
W rozwoju mięśni larw Drosophila występują:
•komórka założycielska (ang. founder cell) i
•mioblasty zdolne do fuzji – ulegają fuzji z mioblastem założycielskim,
ale nie zlewają się z sobą
Kluczowe czynniki biorące udział w fuzji mioblastów na poziomie
molekularnym należą do nadrodziny immunoglobulin:
•w komórce założycielskiej są to receptory błonowe Kirre (Duf) i Rst
(IrreC)
•w komórce zdolnej do fuzji jest to receptor do odbioru sygnałów
generowanych przez komórkę założycielską Sns
Duf i Rst mogą działać jako ligandy dla receptorów Sns komórki zdolnej
do fuzji
16. Czy podobny mechanizm funkcjonuje
w przypadku kręgowców?
Aby odpowiedzieć na to pytanie badano homologiczny do genu Kirre
i Rst Drosophila, gen Kirrel w genomie ryby Brachydanio rerio
Strukturalna organizacja białek Kirre i Rst Drosophila i Kirrel Brachydanio
Podobnie jak Kirre i Rst, Kirrel jest białkiem błonowym z 5 Ig-podobnymi domenami w zewnętrznym
regionie, z segmentem błonowym (prostokąty w kratkę) i z cytoplazmatycznym ogonem.
Zaznaczono również peptyd sygnałowy (zakreskowane prostokąty) oraz regiony o niewielkim
zróżnicowaniu sekwencji aminokwasowej (prostokąty)
„Czynniki
molekularne w fuzji
mioblastów“ Leokadia
Kiełbówna, Marta
Migocka-Patrzałek.
Postępy Biologii
Komórki, 2014, 41,
4/2014:559-581
17. Fuzja mioblastów kręgowców
(na przykładzie Brachydanio rerio)
• Wykazano, że obniżenie aktywności Kirrel hamuje fuzję mioblastów:
Kirrel jest ważny dla fuzji mioblastów Brachydanio
• Kolejnym istotnym czynnikiem biorącym udział w procesie fuzji
mioblastów Drosophila jest białko Dock180
Białko Dock180 indukuje przebudowę cytoszkieletu
aktynowego w odpowiedzi na interakcję pomiędzy komórką
założycielską i mioblastami zdolnymi do fuzji, w drodze w której
pośredniczą białka transbłonowe Duf, Rst i Sns
Zbadano, że białko Dock180 jest istotne także w zlewaniu się
mioblastów Brachydanio, ponieważ obniżenie jego ekspresji hamuje
proces fuzji
18. WNIOSKI I PERSPEKTYWY
Fuzja mioblastów jest konieczna dla powstania wydłużonych,
wielojądrowych włókien mięśniowych
które mogą podjąć funkcje, jakich nie mogłyby wykonać jednojądrowe
komórki mięśniowe
Nadal nie jest znany mechanizm leżący u podstaw zmian
morfologicznych jakie zachodzą w procesie przekształcania się
mioblastów z fibroblasto-podobnych na wydłużone
Wydaje się, że zrozumienie powiązania pomiędzy zmianami
morfologicznymi zachodzącymi w mioblastach a aktywacją
odpowiednich czynników transkrypcyjnych pozwoli poznać
molekularne podstawy tego procesu.
19. WNIOSKI I PERSPEKTYWY
• Otwartą kwestią jest też pochodzenie i rola pęcherzyków
cytoplazmatycznych oraz blaszek elektronowo-gęstych w procesie
fuzji mioblastów
• Wykazano istotną rolę kadheryn i ich receptorów w procesie fuzji
mioblastów. Ich oddziaływanie inicjuje przekazanie sygnałów z
powierzchni komórki do jądra.
Należy jednak zbadać jaki wpływ mają te informacje na cytoszkielet
aktynowy i jak dokładnie białka macierzy pozakomórkowej wpływają na
miogenezę?
• Bardzo interesujące wydaje się odkrycie białek biorących udział
w zlewaniu się błon komórkowych tzw. fuzogenów. Dotychczas
badano ich rolę m.in. w fuzji trofoblastów łożyska. Czy fuzogeny biorą
udział w miogenezie?