1. CRISPR/Cas9 dan Mode Mouse ls
info@creative-biogene.com
https://www.creative-biogene.com/crispr-
cas9/
Diterjemahkan dari bahasa Inggris ke bahasa Indonesia - www.onlinedoctranslator.com
3. Informasi
Sistem CRISPR/Cas9
Alat pengeditan genom yang menciptakan buzz di dunia sains;
Beradaptasi dari sistem pengeditan genom yang terjadi secara alami pada bakteri;
Edit gen dengan menghapus, menambah atau mengubah bagian DNA;
Memungkinkan untuk pengenalan atau penghapusan lebih dari satu gen pada suatu waktu;
Memungkinkan peneliti untuk mengedit bagian genom dengan cara yang mudah;
Tidak spesifik spesies, dapat digunakan di hampir semua lini sel dan sebagian besar hewan;
b r n
Sudah sedang meledak ed untuk lebar jumlah aplikasi tion.
Lebih cepat lebih murah
Tinggi
Keserbagunaan
Tepat
4. Informasi | Komponen
Panduan RNA Cas9 dCas9
GRNA dirancang untuk
menemukan dan mengikat
urutan tertentu dalam DNA.
Cas9 mengikuti gRNA yang
mengarahkan Cas9 ke posisi
yang sama dalam urutan DNA
dan membelah dua untai
dCas9kantipe lain dari Cas9 yang tidak memiliki
aktivitas nuklease tetapi mempertahankan aktivitas
pengikatan DNA) dapat digunakan untuk aktivasi/
inhibisi transkripsi (CRISPRa/CRISPRi), modifikasi
epigenetik dan ChIP yang dimeditasikan oleh CRISPR/
Cas9.
6. Informasi | Prinsip
Pembelahan Target (DSB)
DSB dapat diperbaiki
dengan cara NHEJ atau HDR
tergantung cuaca
lengan homolog ada.
NHEJ HDR
Pukulan knockout
Penghapusan/Penyisipan
Perbaiki template dengan lengan homologi
NHEJ: akhir non-homolog bergabung
Insersi
Mutasi titik
Mengetuk
HDR: Perbaikan Sutradara Homologi
7. Model Tikus
M ice telah sangat berguna di laboratorium, dan menjadi pilihan
pertama untuk mempelajari biologi liana mamma.
SEBUAH Tikus KO
B Mengetuk tikus
C Tikus mutasi titik
8. Model Tikus | Tikus Knockout
Tikus knockout konvensional
Ketika gRNA yang dirancang untuk situs tertentu dan mRNA Cas9 disuntikkan secara bersamaan
menjadi embrio sel tunggal tikus, pemotongan dan perbaikan yang tidak lengkap(oleh NHEJ)di situs
target dapat mengakibatkan penyisipan atau penghapusan gen. Jika situs pembelahan terletak di
wilayah pengkodean gen, ini dapat menyebabkan mutasi frameshift di hilir situs,
menghasilkan knockout konvensional.
Tikus knockout bersyarat
ssDNA yang mengandung dua sekuens LoxP yang terletak di lengan homologi 5' dan 3' adalah
secara bersamaan disuntikkan ke embrio sel tunggal tikus dengan Cas9 mRNA dan gRNA. ssDNA bertindak
sebagai templat perbaikan DNA yang akan menyebabkan dua sekuens LoxP dimasukkan ke dalam gen
yang ditargetkan(oleh HDR).Akhirnya, tikus pendiri dengan urutan Loxp diperoleh dan
dikawinkan dengan tikus yang secara khusus mengekspresikan Cre, dan keturunannya digenotipe untuk mendapatkan
tikus F1 dengan enzim loxP dan Cre yang merupakan tikus knockout spesifik jaringan.
9. Model Tikus | Tikus Knockin
Lokus gen target Knockin
Urutan sasaran (<200bp), oligonukleotida DNA disarankan untuk menjadi DNA donor. Ini
pendekatan umumnya digunakan untuk menyisipkangen penanda,hentikan wilayahuntuk wilayah
fungsional tertentu, danloxPurutan dalam model penyisipan bersyarat.
Urutan DNA yang lebih besar (>200bp), vektor donor lebih efisien. Pendekatan ini akan memungkinkan
Anda untuk memasukkanbercahayaataugen reporter berpendardi lokasi sasaran tertentu.
Rosa26 Knockin
Lokus Rosa26 pada kromosom 6 tikus dianggap sebagai salah satu lokasi yang ideal
untuk gen target knockin (selalu untukgen fungsional). Dengan penerapan teknologi
knockin yang dimediasi CRISPR/Cas9, fragmen DNA besar dapat dimasukkan secara akurat
dan efisien ke dalam Rosa26. gRNA menargetkan urutan lokus Rosa26,
dan vektor donor diperlukan.
10. Model Tikus | Mutasi Titik
◼ Tikus mutasi titik ◼ ssDNA
banyak digunakan untuk mempelajari peran nukleotida
atau asam amino tertentu dalam elemen genetik
atau protein, serta untuk meniru penyakit genetik manusia
ssDNA dirancang untuk membawa mutasi yang diinginkan
◼ Mikro-injeksi ◼ Perbaikan Sutradara Homologi
GRNA, Cas9 mRNA dan ssDNA disuntikkan ke embrio
sel tunggal tikus secara bersamaan.
ssDNA bertindak sebagai templat perbaikan DNA yang akan
menyebabkan satu atau lebih nukleotida bermutasi di situs
target selama perbaikan terarah homolog (HDR)
11. Aplikasi Tikus CRISPR/Cas9
Mempelajari
fungsi dari
gen/protein tertentu
CRISPR /Cas9
tikus
Pelajari peran
transkripsi
elemen peraturan
Verifikasi Sel-jenis-spesifik
target obat
Skrining dan pengembangan obat
Studi keamanan dan toksisitas praklinis
