Se estudió la obtención de brotes mediante la organogénesis directa a partir de Saintpaulia ionantha, utilizando explantes de hoja, cultivados en medio Murashige y Skoog, suplementado con AIA y KIN. El ensayo fue realizado en dos ocasiones debido a la presencia de un hongo endógeno en planta usada en el primer ensayo, lo cual condujo a una contaminación total de los explantes sembrados, por tal motivo el segundo ensayo registra el uso de Bagsin-Captan, fungicidas sistémico y de contacto respectivamente, para prevenir la invasión fúngica.

1. ESTABLECIMIENTO DE ORGANOGÉNESIS DIRECTA A PARTIR DE HOJA
DE VIOLETA (Saintpauliaionantha).
Paola Ayala-Alexandra Chasiquiza
Cultivo de Tejidos. Ingeniería en Biotecnología. Universidad de las Fuerzas Armadas
ESPE.
Sangolquí-Ecuador
Noviembre 2013
RESUMEN
Se estudió la obtención de brotes mediante la organogénesis directa a partir de
Saintpauliaionantha, utilizando explantes de hoja, cultivados en medio Murashige y
Skoog, suplementado con AIA y KIN.
El ensayo fue realizado en dos ocasiones debido a la presencia de un hongo endógeno
en planta usada en el primer ensayo, lo cual condujo a una contaminación total de los
explantes sembrados, por tal motivo el segundo ensayo registra el uso de BagsinCaptan, fungicidas sistémico y de contacto respectivamente, para prevenir la invasión
fúngica.
Palabras Clave: organogénesis directa, violeta, hongos, micropropagación.
ABSTRACT
Obtaining outbreaks studied by direct organogenesis from Saintpauliaionantha, using
leaf explants, cultured on Murashige and Skoog medium supplemented with IAA and
KIN.
The test was performed twice due to the presence of an endogenous fungus plant used in
the first trial, which led to a total contamination of the seeded explants, for this reason
the second test logs using Bagsin-Captan, fungicides systemic and contact respectively,
to prevent fungal invasion.
Keywords:direct organogenesisviolet,fungi,micropropagation.
marchiten sus hojas; así como también
INTRODUCCIÓN
la aparición de manchas de color café
La
violeta
africana
oscuro en las mismas, por tales motivos
(Saintpauliaionantha), se propagan por
se han establecido protocolos de cultivo
germinación de semillas o en forma
in vitro para su producción a gran
vegetativa por esquejes en el que se usa
escala, a partir de peciolos y tejido
tallos del cual nacerá una nueva planta.
foliar (Badillo, 2009).
La peculiaridad que tiene esta planta, es
que puede tener más de una floración al
año en cualquier temporada (Caballero,
S/A).
Su cultivo in vivoes bastante delicado,
puesto que su exposición directa a la luz
solar o el uso de agua a bajas
temperaturas, pueden provocar que se
Una de estas técnicas es la
organogénesis
directa
consiste
formación de órganos directamente
sobre la superficie de explantes
cultivados intactos (Paucar, 2011).
La organogénesis directa es el proceso
de desarrollo de órganos de novo, como

2. vástagos, raíces, flores, hojas, etc.,
directamente del explante, es decir, sin
la formación previa de callo.La
organogénesis directa se usa en la
micropropagación de plantas elite, es
decir, las plantas obtenidas serán clones
exactos de la planta madre, sin
variabilidad genética alguna (Alvez et
al, 2012).
La existencia de poblaciones de hongos
endógenos en los explantes constituye
uno de los factores responsables de las
mayores pérdidas por contaminaciónen
el cultivo in vitro de plantas. Los
contaminantes
fungosos
crecen
favorablemente en los medios de cultivo
para plantas dañando el explante
(Carranza et al, 2003).
solución de detergente al 1% más tres
gotas de tween 20 durante 20min, se
enjuagó tres veces con agua destilada,
luego se sumergió las muestras en una
solución de cloro al 0.5% más 3 gotas
de tween 20 durante 10min en
agitación, se enjuagó nuevamente tres
veces con agua destilada y finalmente
las muestras fueron colocasen agitación
en una mezcla de Captan y Bagsin al
0.5%, ambos fungicidas sistémico y de
contacto respectivamente, durante 10
min yse enjuagó 4 veces con agua
destilada (Jadán 2012).
Se trasladó las muestras sumergidas en
cloro a la cámara de flujo laminar,
dentro de la misma se realizó tres
lavados con agua estéril antes de
proceder a la siembra (Jadán, 2012).
El objetivo de la presente práctica es la
obtención
de
brotes,
mediante
organogénesis directa, a partir del
cultivo
de
hojas
de
violeta
(Saintpauliaionantha) en medio MS
enriquecido con AIA y KIN, con guía
en el “Manual de Laboratorio de
Cultivo de Tejidos Vegetales”.
Siembra del material: Sé eliminó el
material de la periferia dañado por la
desinfección, luego se procedió a
realizar pequeños cortes, los mismos
que debían contener una parte de la
nervadura de la hoja, se colocó los
explantes en el medio MS enriquecido
con KIN y AIA y se selló el mismo
para incubación en luz (Jadán 2012).
MATERIALES Y MÉTODOS
El proceso anteriormente detallado se
llevó a cabo en condiciones de total
asepsia,
procurando
evitar
contaminaciones.
Preparación de la sala de siembra: El
piso se desinfectó con kalipto, las
cámaras de siembra se limpiaron con
papel toalla estéril y Savlón. Los
materiales usados en la siembra tales
como: mecheros, pinzas bisturí, papel
toalla, plástico, ligas, botellas de agua,
etc.
fueron
introducidas
previa
esterilización, luego se prendió las
lámparas UV de las cabinas de flujo
durante 15min y en los siguientes 15
min se encendió el flujo de aire luego de
apagar las lámparas (Jadán, 2012).
Material vegetal:Se usó hojas de
violeta. La desinfección inició con un
lavado en agua, con el fin de retirar
todas impurezas presentes en las
muestras, después se colocó las
muestras vegetales en agitación con una
RESULTADOS
La evaluación se realizó a los 15 días a
partir de la siembra, los parámetros
revisados fueron contaminación fúngica
y bacteriana, oxidación y cambios en el
explante, tales como variaciones en la
forma, color y grosor obteniendo los
resultados que se pueden observar en la
tabla 1 y 2.
La tabla 1 indica los resultados
obtenidos en la práctica por la
estudiante 1, los cuales muestran
cambios de color y forma en el explante

3. de violeta y
contaminación.
ningún
tipo
de
La tabla 2 indica los resultados de la
estudiante 2, en la cual se puede
observar que el primer frasco presenta
contaminación bacteriana, mientras que
los explantes del segundo frasco
muestran oxidación de los explantes.
Fig.1 Frasco con explantes de la estudiante 1,
primera repetición.
2
1
Tabla 1. Descripción de los resultados de la
estudiante 1.
Nombre: Paola Ayala
#
frasc
o
1
2
Explante
Hoja 1
Hoja 2
Hoja 3
Hoja 4
Hoja 1
Hoja 2
Hoja 3
Hoja 4
Fecha
de
siembra
(06/11/2013)
Contaminación
(hongo o
bacteria)
-
Parte aérea
Nº brotes
-
Fecha de
evaluación
(20/11/201
3)
Oxidación,
muerte,
cambio de
color
-
3
4
Fig.2 Frasco con explantes de la estudiante 1,
segunda repetición.
1
3
2
Ox= oxidación. M: muerte.
Tabla 2. Descripción de los resultados de la
estudiante 2.
Nombre: Alexandra Chasiquiza
#
frasc
o
1
2
Explante
Hoja 1
Hoja 2
Hoja 3
Hoja 1
Hoja 2
Hoja 3
Hoja 4
Contaminación
(hongo o
bacteria)
Bacteria
Bacteria
Bacteria
-
Fecha
de
siembra
(06/11/2013)
Parte aérea
Nº brotes
-
Fecha de
evaluación
(20/11/201
3)
Oxidación,
muerte,
cambio de
color
Ox
Ox
Ox
Ox
Fig.3 Frasco con explantes de la estudiante 2,
primera repetición.
1
4
2
Ox= oxidación. M: muerte.
3
Fig.4 Frasco con explantes de la estudiante 2,
segunda repetición
2
1
DISCUSIÓN
4
3
Según Alvez et al (2012), la
organogénesis consiste en la formación
de órganos de novo a partir de explantes
cultivados in vitro, sin la formación
previa de callo, de acuerdo a lo descrito
por el autor los resultados que deben ser

4. obtenidos son la formación de brotes o
raíces, además Salazar (2009), sostiene
que los reguladores de crecimiento son
sustancias sintéticas que se deben
aplicar en distintas combinaciones y
concentraciones
dependiendo
del
resultado que se desea obtener, KIN
(citoquinina) y AIA (auxina) fueron los
reguladores usados en la presente
práctica, con una concentración mayor
de AIA, por lo cual se espera la
formación de yemas radicales sin
embargo se requiere de mayor tiempo
para poder observar el desarrollo de
organogénesis, como se puede observar
en las tablas 1 y 2, ninguno de los
explantes
sembrados
muestra
crecimiento de raíces, ni brotes, sin
embargo en el frasco 2, de la estudiante
2 se observó una deformación parcial
delos explantes, lo cual es característico
del proceso de organogénesis directa,
argumenta Suárez (2011).
Según Armendáriz (2008), la gran
mayoría de las enfermedades causadas
por hongos que ataca el follaje
presentan síntomas a etapas tempranas
de la infección, se observa por ejemplo
depósitos pulvurulentos blanquecinos
en ambas caras de la lámina de las hojas
debidos a la esporulación delos hongos.
En etapas más avanzadas de la
enfermedad, se evidencian áreas
necróticas en las hojas y finalmente se
produce la abscisión de los órganos,
este argumento justifica los resultados
obtenidos en el primer ensayo, puesto
que todos los explantes sembrados
sufrieron contaminación fúngica la cual
se debió a la presencia de un hongo en
la planta madre, en la cual se pudo
observar los síntomas descritos por el
autor; por tal razón en el segundo
ensayo se usaron Bagsin y Captan como
prevención a la contaminación fúngica
tanto de contacto como sistémica.
CONCLUSIONES
La organogénesis directa permite la
obtención de brotes o raíces sin la
formación previa de callos, sin
embargo se requiere un tiempo
amplio para la observación de
formación de órganos, por tal razón
los únicos cambios que pudieron ser
observados en los explantes
sembrados fueron cambios de color
y forma, los cuales indican un inició
de organogénesis.
La combinación de concentraciones
adecuadas
de
reguladores
de
crecimiento en el medio de cultivo
dependen del resultado deseado, en este
caso el usó de una concentración mayor
de AIA frente KIN, lo cual daríalugar a
la formaciones de raíces en los
explantes sembrados.
La organogénesis directa se usa en
la propagación de plantas elite ya
que al no pasar por callo, no se dan
variaciones genéticas, obteniéndose
plantas clones de la madre.
El control fitosanitario previo en las
plantas
madre
evita
contaminaciones
fúngicas
o
bacterianas en los explantes, por
parte de microorganismos propios
de la planta donadora.
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fúngicos
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