Apresentação do artigo "Diversidade de Lactococcus lactis revelada pelo sequenciamento de Amplicon direcionado do gene purR , comparações metabólicas e propriedades antimicrobianas em uma cultura inicial mista indefinida usada para fabricação de queijo macio"Sabrina Saltaji , Olivier Rué, Valérie Sopena, Sophie Sablé, Fatoumata Tambadou, Sandrine Didelot, Romain Chevrot "
O documento discute métodos moleculares para detecção e identificação de microrganismos contaminantes em processos industriais. Ele descreve várias técnicas moleculares como PCR, bibliotecas genômicas, DGGE, T-RFLP, RISA e FISH que podem ser usadas para identificar microrganismos sem a necessidade de cultivo. O documento também discute a escolha do gene alvo, como o 16S rRNA, e seu uso nas diferentes técnicas moleculares.
O documento discute os requisitos nutricionais e condições de crescimento de bactérias. Ele explica que bactérias precisam de fontes de carbono, nitrogênio, energia, água e íons para crescimento. Também descreve diferentes tipos de meios de cultura, temperaturas e condições ideais para o cultivo de bactérias.
Este documento descreve a história, classificação, morfologia, ciclo de vida, metabolismo e usos industriais da levedura Saccharomyces cerevisiae. A levedura S. cerevisiae tem sido usada há milhares de anos na produção de pão e cerveja e é um organismo modelo em microbiologia.
1) O documento apresenta uma dissertação de mestrado sobre a influência da altitude e do nível de cadastramento de queijarias na qualidade do queijo Minas artesanal produzido na Serra da Canastra.
2) Foram avaliadas as características físico-químicas e microbiológicas de queijos, leite e fermentos produzidos em diferentes altitudes e níveis de cadastramento.
3) Também foram isoladas e identificadas bactérias ácido-lácticas presentes nos produtos, utilizando té
1) O documento apresenta uma dissertação de mestrado sobre a influência da altitude e do nível de cadastramento de queijarias na qualidade do queijo Minas artesanal produzido na Serra da Canastra.
2) Foram avaliadas as características físico-químicas e microbiológicas de queijos, leite e fermentos produzidos em diferentes altitudes e níveis de cadastramento.
3) Também foram isoladas e identificadas bactérias ácido-lácticas presentes nos produtos, utilizando té
1. O documento apresenta uma ficha de avaliação sumativa de Biologia e Geologia do 11o ano, contendo 18 itens obrigatórios e 12 opcionais para classificação. 2. Apresenta dados de Chargaff sobre os teores de nucleótidos em DNA de diferentes organismos, importantes para Watson e Crick. 3. Inclui perguntas sobre estrutura do DNA, replicação e transcrição gênica.
O documento descreve o desenvolvimento de alimentos a partir de subprodutos animais para combater a desnutrição. Serão caracterizados extratos protéicos de pés de frango e mocotó bovino e desenvolvidas gelatinas e geleias com alto teor nutricional. O objetivo é avaliar as propriedades funcionais dos extratos e suas aplicações em alimentos para melhorar a nutrição.
Apresentação do artigo - RNASeq-based analysis of the physiologic cold shock-...Vitor Coelho
Este documento descreve uma análise de RNA-Seq da resposta ao choque térmico em Moraxella catarrhalis. A metodologia incluiu o cultivo de duas cepas de M. catarrhalis em 26°C e 37°C, preparação de RNA, sequenciamento e análise de dados. Os resultados mostraram que 831 genes foram diferencialmente expressos a 26°C, envolvendo funções como transcrição, metabolismo de lipídios e biossíntese da membrana.
O documento discute métodos moleculares para detecção e identificação de microrganismos contaminantes em processos industriais. Ele descreve várias técnicas moleculares como PCR, bibliotecas genômicas, DGGE, T-RFLP, RISA e FISH que podem ser usadas para identificar microrganismos sem a necessidade de cultivo. O documento também discute a escolha do gene alvo, como o 16S rRNA, e seu uso nas diferentes técnicas moleculares.
O documento discute os requisitos nutricionais e condições de crescimento de bactérias. Ele explica que bactérias precisam de fontes de carbono, nitrogênio, energia, água e íons para crescimento. Também descreve diferentes tipos de meios de cultura, temperaturas e condições ideais para o cultivo de bactérias.
Este documento descreve a história, classificação, morfologia, ciclo de vida, metabolismo e usos industriais da levedura Saccharomyces cerevisiae. A levedura S. cerevisiae tem sido usada há milhares de anos na produção de pão e cerveja e é um organismo modelo em microbiologia.
1) O documento apresenta uma dissertação de mestrado sobre a influência da altitude e do nível de cadastramento de queijarias na qualidade do queijo Minas artesanal produzido na Serra da Canastra.
2) Foram avaliadas as características físico-químicas e microbiológicas de queijos, leite e fermentos produzidos em diferentes altitudes e níveis de cadastramento.
3) Também foram isoladas e identificadas bactérias ácido-lácticas presentes nos produtos, utilizando té
1) O documento apresenta uma dissertação de mestrado sobre a influência da altitude e do nível de cadastramento de queijarias na qualidade do queijo Minas artesanal produzido na Serra da Canastra.
2) Foram avaliadas as características físico-químicas e microbiológicas de queijos, leite e fermentos produzidos em diferentes altitudes e níveis de cadastramento.
3) Também foram isoladas e identificadas bactérias ácido-lácticas presentes nos produtos, utilizando té
1. O documento apresenta uma ficha de avaliação sumativa de Biologia e Geologia do 11o ano, contendo 18 itens obrigatórios e 12 opcionais para classificação. 2. Apresenta dados de Chargaff sobre os teores de nucleótidos em DNA de diferentes organismos, importantes para Watson e Crick. 3. Inclui perguntas sobre estrutura do DNA, replicação e transcrição gênica.
O documento descreve o desenvolvimento de alimentos a partir de subprodutos animais para combater a desnutrição. Serão caracterizados extratos protéicos de pés de frango e mocotó bovino e desenvolvidas gelatinas e geleias com alto teor nutricional. O objetivo é avaliar as propriedades funcionais dos extratos e suas aplicações em alimentos para melhorar a nutrição.
Apresentação do artigo - RNASeq-based analysis of the physiologic cold shock-...Vitor Coelho
Este documento descreve uma análise de RNA-Seq da resposta ao choque térmico em Moraxella catarrhalis. A metodologia incluiu o cultivo de duas cepas de M. catarrhalis em 26°C e 37°C, preparação de RNA, sequenciamento e análise de dados. Os resultados mostraram que 831 genes foram diferencialmente expressos a 26°C, envolvendo funções como transcrição, metabolismo de lipídios e biossíntese da membrana.
Pcr para o diagnóstico da mastite bovinaMarília Gomes
O documento descreve um estudo sobre o diagnóstico da mastite bovina utilizando a técnica de PCR multiplex. O trabalho desenvolveu um método de extração de DNA bacteriano a partir de amostras de leite e validou primers para detecção de Staphylococcus aureus, Streptococcus agalactiae, S. dysgalactiae, S. uberis e S. aureus resistente à meticilina através de PCR multiplex. O método mostrou-se sensível, específico e eficiente para diagnóstico etiológico da mastite.
Este documento descreve um estudo sobre a etiologia de um surto de síndrome febril neurológica em bovinos na Ilha do Marajó, Pará. Foram coletadas amostras de sangue de 24 bovinos e realizada PCR para detectar Babesia bovis e Babesia bigemina. Os resultados mostraram que 14 amostras eram positivas para Babesia, sendo 12 para B. bovis e 2 para B. bigemina, indicando altas taxas de infecção nesta região.
Seleção de-meios-de-produção-de-lipase-por-aspergillus-sspBarbhara Mota
Este documento descreve um estudo sobre a produção de lipase por amostras de Aspergillus ssp isoladas da Caatinga de Pernambuco utilizando diferentes meios de cultivo. Os resultados demonstraram que o meio 2 (contendo óleo de oliva, peptona, nitrato de sódio e outros componentes) proporcionou a maior atividade lipolítica para as amostras testadas, com a amostra SIS 10 atingindo 22,64 U/mL e a amostra SIS 16 alcançando 26,52 U/mL. O
1) O documento discute a produção de carne in vitro, incluindo as etapas de isolamento, cultivo e diferenciação de células-tronco musculares.
2) Ele propõe experimentos para estudar o efeito de diferentes composições de meio de cultura na proliferação e diferenciação das células, visando ao desenvolvimento de um método economicamente viável.
3) Também discute a concepção de biorreatores especializados para promover a diferenciação das células em tecido muscular sob condições controladas.
I. O documento discute a produção de óleos e gorduras por via microbiana utilizando microrganismos oleaginosos.
II. Aborda os conceitos-chave de microrganismos oleaginosos e "óleos de célula única", as vantagens da via microbiana, diversidade de microrganismos e processos de cultivo e extração de lípidos.
III. Inclui informações sobre o metabolismo lipídico destes microrganismos e fatores que influenciam a acumulação de lípidos.
Caracterização microbiológica de alimentos e águas vendidos nas ruas de Maputo, Moçambique. O documento descreve uma análise de amostras de alimentos e água coletadas de vendedores de rua em Maputo para caracterizar isolados bacterianos, incluindo testes para virulência e resistência a antibióticos. Os resultados iniciais mostraram que a maioria das amostras de água era insatisfatória ou potencialmente perigosa de acordo com padrões de qualidade.
Este relatório de estágio descreve as atividades realizadas no Laboratório de Análises Microbiológicas e Físico-Químicas de Alimentos e Água (LAMAG) da UTFPR entre maio e novembro de 2011. O estágio teve como objetivos gerais desenvolver habilidades do estudante e ampliar seu conhecimento na área, e objetivos específicos como receber amostras, preparar meios de cultura, realizar análises microbiológicas e físico-químicas, e limpar equipamentos.
O documento discute o sistema digestivo humano, fornecendo informações sobre as enzimas digestivas, os processos de digestão e absorção de nutrientes e as consequências de deficiências em certos hormônios e enzimas. Há perguntas e exercícios sobre as funções do fígado, pâncreas, intestinos e outros órgãos envolvidos na digestão.
Seminario "Efficient de novo assembly of single-cell bacterial genomes from s...Edson Silva
O documento descreve um método para montar genomas bacterianos a partir de dados de sequenciamento de célula única. O método combina a correção de erros do EULER-SR com a montagem do Velvet-SC para lidar com a cobertura altamente não uniforme. Isso permitiu a montagem de genomas de referência de E. coli e S. aureus, bem como um genoma desconhecido de uma Deltaproteobacteria.
1) A mutação no gene altera a sequência de nucleotídeos no DNA e consequentemente no RNA mensageiro e na proteína.
2) É possível que uma mutação não altere a tradução se modificar um códon em outro relacionado ao mesmo aminoácido devido ao código genético degenerado.
3) O dogma central da biologia molecular refere-se ao fluxo de informação genética de DNA para RNA para proteína, sendo a transcrição a ligação da RNA polimerase ao sítio promotor do DNA e a tradução a le
Isolamento de bactéria probiótica do surubim híbrido Pseudoplatystoma reticul...tgandr
1. O documento descreve o isolamento de uma bactéria probiótica do intestino de híbridos de cachara com pintado para melhorar os parâmetros hematológicos e a saúde dos peixes.
2. Foram isoladas e selecionadas cepas bacterianas com potencial probiótico e capacidade de inibir patógenos. A cepa W. cibaria mostrou melhor desempenho e foi usada em testes com peixes.
3. Os resultados mostraram que a dieta suplementada com W. cibaria melhorou os
O documento discute diversos tópicos relacionados a nutrição e metabolismo, como funções de vitaminas e sais minerais, reações enzimáticas e doenças nutricionais. Aborda questões sobre formação óssea, metabolismo de aminoácidos e fatores que influenciam velocidade de reações químicas.
Bioflocos autotróficos (ABFT) usando Chlorella vulgaris e Scenedesmus obliquu...tgandr
1) O documento descreve um estudo sobre o uso de bioflocos autotróficos (ABFT) usando as microalgas Chlorella vulgaris e Scenedesmus obliquus no cultivo da tilápia do Nilo. 2) Os resultados indicaram que o ABFT teve efeitos positivos no desempenho da tilápia, melhorando os indicadores de bem-estar e resposta imune. 3) O ABFT também mostrou potencial para tratamento de águas residuais e fornecimento de aminoácidos essenciais para o crescimento da tiláp
Este documento descreve uma pesquisa sobre o uso de esterco de frango de corte submetido ao processo de compostagem na alimentação de alevinos de tilápia do Nilo. O estudo avaliou parâmetros químicos e microbiológicos da compostagem, qualidade da água, ganho de peso, taxa de crescimento, sobrevivência e conversão alimentar dos alevinos. Os resultados indicaram que a compostagem do esterco beneficiou o desempenho produtivo dos peixes.
O documento descreve vários meios de cultura para identificação de microrganismos em amostras de alimentos e ambientais. Inclui informações sobre a composição, uso e interpretação de resultados do Agar HiCrome ECC, que é usado para diferenciar Escherichia coli de outros coliformes, e do Agar Base HiCrome Seletivo ECC, recomendado para detecção simultânea de E. coli e coliformes totais.
Miguel frozen yogurt viabilidade prob an2003Rosane Liége
1) O documento analisa a viabilidade de bactérias ácido láticas em sorvetes de iogurte durante seis meses de armazenamento a -23°C.
2) Os resultados demonstraram que os sorvetes fermentados com culturas probióticas ou convencionais mantiveram contagens viáveis acima de 106 UFC/ml durante o período de armazenamento.
3) Todos os produtos preservaram suas características benéficas à saúde, com contagens viáveis suficientes para efeitos probióticos.
[1] O documento discute a composição nutricional dos alimentos, incluindo suas estruturas e funções. [2] É explicado que os alimentos contêm matéria seca, água, carboidratos, lipídios, proteínas, vitaminas, minerais macro e micronutrientes. [3] Cada um destes componentes é discutido em detalhe, com exemplos de suas funções no corpo.
O documento discute bases de dados biológicas como GenBank, COG e KEGG, que fornecem informações sobre sequências genéticas, proteínas e vias metabólicas. Ele explica como esses recursos podem ser usados para mapear genes a números orthologous e vias metabólicas.
I. As mutações no DNA podem alterar a sequência de aminoácidos nas proteínas ao modificar a sequência de nucleotídeos no RNA mensageiro. II. Mutações que não alteram o códon podem não modificar a tradução devido ao código genético degenerado. III. O dogma central da biologia molecular descreve o fluxo de informação genética de DNA para RNA para proteína.
Pcr para o diagnóstico da mastite bovinaMarília Gomes
O documento descreve um estudo sobre o diagnóstico da mastite bovina utilizando a técnica de PCR multiplex. O trabalho desenvolveu um método de extração de DNA bacteriano a partir de amostras de leite e validou primers para detecção de Staphylococcus aureus, Streptococcus agalactiae, S. dysgalactiae, S. uberis e S. aureus resistente à meticilina através de PCR multiplex. O método mostrou-se sensível, específico e eficiente para diagnóstico etiológico da mastite.
Este documento descreve um estudo sobre a etiologia de um surto de síndrome febril neurológica em bovinos na Ilha do Marajó, Pará. Foram coletadas amostras de sangue de 24 bovinos e realizada PCR para detectar Babesia bovis e Babesia bigemina. Os resultados mostraram que 14 amostras eram positivas para Babesia, sendo 12 para B. bovis e 2 para B. bigemina, indicando altas taxas de infecção nesta região.
Seleção de-meios-de-produção-de-lipase-por-aspergillus-sspBarbhara Mota
Este documento descreve um estudo sobre a produção de lipase por amostras de Aspergillus ssp isoladas da Caatinga de Pernambuco utilizando diferentes meios de cultivo. Os resultados demonstraram que o meio 2 (contendo óleo de oliva, peptona, nitrato de sódio e outros componentes) proporcionou a maior atividade lipolítica para as amostras testadas, com a amostra SIS 10 atingindo 22,64 U/mL e a amostra SIS 16 alcançando 26,52 U/mL. O
1) O documento discute a produção de carne in vitro, incluindo as etapas de isolamento, cultivo e diferenciação de células-tronco musculares.
2) Ele propõe experimentos para estudar o efeito de diferentes composições de meio de cultura na proliferação e diferenciação das células, visando ao desenvolvimento de um método economicamente viável.
3) Também discute a concepção de biorreatores especializados para promover a diferenciação das células em tecido muscular sob condições controladas.
I. O documento discute a produção de óleos e gorduras por via microbiana utilizando microrganismos oleaginosos.
II. Aborda os conceitos-chave de microrganismos oleaginosos e "óleos de célula única", as vantagens da via microbiana, diversidade de microrganismos e processos de cultivo e extração de lípidos.
III. Inclui informações sobre o metabolismo lipídico destes microrganismos e fatores que influenciam a acumulação de lípidos.
Caracterização microbiológica de alimentos e águas vendidos nas ruas de Maputo, Moçambique. O documento descreve uma análise de amostras de alimentos e água coletadas de vendedores de rua em Maputo para caracterizar isolados bacterianos, incluindo testes para virulência e resistência a antibióticos. Os resultados iniciais mostraram que a maioria das amostras de água era insatisfatória ou potencialmente perigosa de acordo com padrões de qualidade.
Este relatório de estágio descreve as atividades realizadas no Laboratório de Análises Microbiológicas e Físico-Químicas de Alimentos e Água (LAMAG) da UTFPR entre maio e novembro de 2011. O estágio teve como objetivos gerais desenvolver habilidades do estudante e ampliar seu conhecimento na área, e objetivos específicos como receber amostras, preparar meios de cultura, realizar análises microbiológicas e físico-químicas, e limpar equipamentos.
O documento discute o sistema digestivo humano, fornecendo informações sobre as enzimas digestivas, os processos de digestão e absorção de nutrientes e as consequências de deficiências em certos hormônios e enzimas. Há perguntas e exercícios sobre as funções do fígado, pâncreas, intestinos e outros órgãos envolvidos na digestão.
Seminario "Efficient de novo assembly of single-cell bacterial genomes from s...Edson Silva
O documento descreve um método para montar genomas bacterianos a partir de dados de sequenciamento de célula única. O método combina a correção de erros do EULER-SR com a montagem do Velvet-SC para lidar com a cobertura altamente não uniforme. Isso permitiu a montagem de genomas de referência de E. coli e S. aureus, bem como um genoma desconhecido de uma Deltaproteobacteria.
1) A mutação no gene altera a sequência de nucleotídeos no DNA e consequentemente no RNA mensageiro e na proteína.
2) É possível que uma mutação não altere a tradução se modificar um códon em outro relacionado ao mesmo aminoácido devido ao código genético degenerado.
3) O dogma central da biologia molecular refere-se ao fluxo de informação genética de DNA para RNA para proteína, sendo a transcrição a ligação da RNA polimerase ao sítio promotor do DNA e a tradução a le
Isolamento de bactéria probiótica do surubim híbrido Pseudoplatystoma reticul...tgandr
1. O documento descreve o isolamento de uma bactéria probiótica do intestino de híbridos de cachara com pintado para melhorar os parâmetros hematológicos e a saúde dos peixes.
2. Foram isoladas e selecionadas cepas bacterianas com potencial probiótico e capacidade de inibir patógenos. A cepa W. cibaria mostrou melhor desempenho e foi usada em testes com peixes.
3. Os resultados mostraram que a dieta suplementada com W. cibaria melhorou os
O documento discute diversos tópicos relacionados a nutrição e metabolismo, como funções de vitaminas e sais minerais, reações enzimáticas e doenças nutricionais. Aborda questões sobre formação óssea, metabolismo de aminoácidos e fatores que influenciam velocidade de reações químicas.
Bioflocos autotróficos (ABFT) usando Chlorella vulgaris e Scenedesmus obliquu...tgandr
1) O documento descreve um estudo sobre o uso de bioflocos autotróficos (ABFT) usando as microalgas Chlorella vulgaris e Scenedesmus obliquus no cultivo da tilápia do Nilo. 2) Os resultados indicaram que o ABFT teve efeitos positivos no desempenho da tilápia, melhorando os indicadores de bem-estar e resposta imune. 3) O ABFT também mostrou potencial para tratamento de águas residuais e fornecimento de aminoácidos essenciais para o crescimento da tiláp
Este documento descreve uma pesquisa sobre o uso de esterco de frango de corte submetido ao processo de compostagem na alimentação de alevinos de tilápia do Nilo. O estudo avaliou parâmetros químicos e microbiológicos da compostagem, qualidade da água, ganho de peso, taxa de crescimento, sobrevivência e conversão alimentar dos alevinos. Os resultados indicaram que a compostagem do esterco beneficiou o desempenho produtivo dos peixes.
O documento descreve vários meios de cultura para identificação de microrganismos em amostras de alimentos e ambientais. Inclui informações sobre a composição, uso e interpretação de resultados do Agar HiCrome ECC, que é usado para diferenciar Escherichia coli de outros coliformes, e do Agar Base HiCrome Seletivo ECC, recomendado para detecção simultânea de E. coli e coliformes totais.
Miguel frozen yogurt viabilidade prob an2003Rosane Liége
1) O documento analisa a viabilidade de bactérias ácido láticas em sorvetes de iogurte durante seis meses de armazenamento a -23°C.
2) Os resultados demonstraram que os sorvetes fermentados com culturas probióticas ou convencionais mantiveram contagens viáveis acima de 106 UFC/ml durante o período de armazenamento.
3) Todos os produtos preservaram suas características benéficas à saúde, com contagens viáveis suficientes para efeitos probióticos.
[1] O documento discute a composição nutricional dos alimentos, incluindo suas estruturas e funções. [2] É explicado que os alimentos contêm matéria seca, água, carboidratos, lipídios, proteínas, vitaminas, minerais macro e micronutrientes. [3] Cada um destes componentes é discutido em detalhe, com exemplos de suas funções no corpo.
O documento discute bases de dados biológicas como GenBank, COG e KEGG, que fornecem informações sobre sequências genéticas, proteínas e vias metabólicas. Ele explica como esses recursos podem ser usados para mapear genes a números orthologous e vias metabólicas.
I. As mutações no DNA podem alterar a sequência de aminoácidos nas proteínas ao modificar a sequência de nucleotídeos no RNA mensageiro. II. Mutações que não alteram o códon podem não modificar a tradução devido ao código genético degenerado. III. O dogma central da biologia molecular descreve o fluxo de informação genética de DNA para RNA para proteína.
1. CENTRO FEDERALDE EDUCAÇÃO TECNOLÓGICADE MINAS GERAIS
PROGRAMADE PÓS-GRADUAÇÃO EMTECNOLOGIADE PRODUTOS E PROCESSOS
Diversidade de Lactococcus lactis revelada pelo sequenciamento de Amplicon
direcionado do gene purR , comparações metabólicas e propriedades antimicrobianas
em uma cultura inicial mista indefinida usada para fabricação de queijo macio
Sabrina Saltaji , Olivier Rué, Valérie Sopena, Sophie Sablé, Fatoumata Tambadou, Sandrine Didelot, Romain Chevrot
DOCENTE: FERNANDA BADOTTI
DISCENTE: BRENDA PALHARES DOS REIS VIEIRA
B E LO H O R IZ O N T E
2 0 2 2
5. Introdução
Bactérias de ácido láctico
As BAL que compõe o leite cru são:
• Lactococcus lactis,
• Leuconostoc mesenteroides,
• Streptococcus spp. e
• Lactobacillus spp.
As subespécies L. lactis subsp. lactis e L. lactis
subsp. cremoris.
7. Introdução
Bactérias patógenas e deteriorantes
• Placa de ágar EMB semeada com Escherichia coli.
•Meio ágar Hektoen em sua coloração original (placa da esquerda); HE
semeado com cepa de Salmonella (placa ao centro). Note a presença de
pigmento negro. HE semeado com cepa de coliforme fecal (placa à
direita).
8. Objetivos
•Conhecer a diversidade microbiana CIMI;
•Criar um acervo a partir da CIMI;
• Realizar as associações genótipo-fenótipo;
• Determinar o perfil do metabolismo de carboidratos;
•Avaliar a atividades antimicrobiana.
9. Materiais e métodos
Coleta de Amostras
• Aplicado durante a adição do coalho,
algumas horas após o enriquecimento
do leite com fermentos acidificantes.
Extração de DNA
• O DNA foi extraído com o DNeasy
PowerFood Microbial Kit,
• O DNA purificado foi armazenado a -
80°C
10. Sequenciamento de genes (SG) da microbiota CIMI
Sequenciamento
de genes
SG e Análise de
dados de 16S
rRNA
O pipeline FROGS foi usado para
recuperar as unidades
taxonômicas operacionais (UTOs)
As sequências de referência de
cada UTO foram lançadas contra
o banco de dados SILVA
SG PurR e Análise
de Dados
O pipeline DADA2 foi usado para
recuperar as sequências biológicas
de leituras (erros).
Comparada no banco de dados
NCBI usando o programa
BLAST.
Ampliação por PCR
Sequenciamento pela
plataforma Eurofins
Genomics usando
uma tecnologia
Illumina ® MiSeq.
12. Identificação de Perfis Fenotípicos e Isolados de LAB
Perfil do Metabolismo de Carboidratos Bacterianos
• 2 bactérias isoladas aleatórias de cada condição (n=13).
• 49 testes bioquímicos com meio API 50 CHL.
MALDI-TOF MS Identificação Bacteriana
• Pela Eurofins Microbiologie Ouest (n=26).
Extração de DNA, Procedimento de PCR de Rotina e Sequenciamento de Gene de
rRNA 16S de Comprimento Completo
• Pela Eurofins Microbiologie Ouest.
• Comparada no banco de dados NCBI usando o programa BLAST.
13. Sequenciamento do Genoma e Análise de Dados
Extração de DNA de cultura pura
• 6 BAL isolados de L. lactis para associações genótipo-fenótipo.
• Extração: kit de sangue e tecido DNeasy
• Quantificação: NanoDrop ND-1000
Sequenciamento de genoma completo e anotação de genes
• Tecnologia de sequenciamento PacBio ® RS II e Illumina ® iSeq .
• As informações das vias relacionadas ao metabolismo de carboidratos foram identificadas a
partir daquelas descritas na Enciclopédia de Genes e Genomas de Kyoto (EGGK).
• Mineração dos clusters do genes da produção de peptídeos antimicrobianos foi realizada usando
BAGEL4.
14. Atividade antimicrobiana
Número(s) de
Adesão
• Os dados do amplicon 16S e purR foram
depositados em DDBJ/ENA/GenBank sob
o número BioProject PRJNA615620.
• O projeto de genoma completo foi
depositado no DDBJ/ENA/GenBank sob o
número BioProject PRJNA615395.
Cepas bacterianas e
condições de
crescimento
• Cultivado duas vezes.
• Condições de crescimento específicas para
cada cepa indicadora.
16. Determinação das Propriedades Inibitórias de Isolados de LAB
contra Bactérias Patogênicas Transmitidas por Alimentos e
Bactérias de Deterioração
Teste de mancha de ágar
• 5 microlitros de uma cultura de BAL em
placas de ágar BHI, deixa secar por 20 min;
• Cobre com 10 mL de ágar mole com
10 6 UFC/mL da cepa indicadora;
• Incubação à noite;
• Verificar os halos de inibição.
• Controle positivo: Lactobacillus sakei
Preparações de Sobrenadante Livre de
Células (CFS) e CFS Neutralizado (NCFS)
• Amostra coletada em intervalos de
crescimento;
• Os CFSs foram obtidos por centrifugação;.
• Os NCFs :pH do CFS ajustado para 7,0
para excluir o efeito antimicrobiano dos
ácidos orgânicos;
• Aquecimento a 100°C por 10 min para
inibir a atividade da enzima.
17. Determinação das Propriedades Inibitórias de Isolados de LAB
contra Bactérias Patogênicas Transmitidas por Alimentos e
Bactérias de Deterioração
Ensaio de Difusão em Poços de Agar.
• O ágar BHI foi semeado com 10 6 UFC/mL de cepas indicadoras e vertido em
placas de Petri.
• Alíquotas de CFS ou NCFS não diluídas preenchem os poços de vidros nas placas
• Incubação a noite.
• Registro: Halos de inibição.
Efeito inibitório durante o co-cultivo
• Lote 1: co-inoculação de S. aureus + BAL isolado selecionado;
• Lote 2: co-inoculação de S. ser. Typhimurium + BAL isolado selecionado.
• As atividades antimicrobianas: ensaio de difusão em poço de ágar.
18. Resultados e discussão
Análise da diversidade microbiana das CIMI
Análise de sequências
de fragmentos de genes
de rRNA 16S
Um gênero dominante, Lactococcus sp.,
abrangendo 99,9% de abundância relativa,
foi identificado para cada região do gene 16S
rRNA
Análise de sequências
de genes purR
Análise de
sequenciamento de
genoma completo
19. Análise de Sequência de Genes PurR
Abundância (%)
ASV_1 99,86
ASV_2 0,13
ASV_3 0,005
ASV_4 0,005
ASV_5 0,002
Contagem de matriz de variantes de sequência de amplicon (ASVs) (%)
determinada com análise do gene purR .
20. Análise de
Sequência de
Genes PurR
Dendrogramas mostrando
semelhanças de sequência de
cepas de L. lactis com base
em uma análise de
agrupamento das variantes de
nucleotídeos de amplicon
purR (A) ou variantes de
aminoácidos (B).
A
B
21. Análise de sequenciamento de genoma completo
.
O valor ANI é usado para estimar a distância genética entre isolados..
A subespécie cremoris possui um valor de ANI abaixo de 95%.
A identidade ANI foi >99,8% para todos os genomas de L. lactis,
Sugerindo que todos pertencem ao grupo de subespécies de lactis .
22. MALDI-TOF MS e Análise de Sequenciamento Genético
de rRNA 16S de Comprimento Completo
• Foram 4 identificações de espécies:
• Lactococcus lactis (L) ( n = 18/26),
• Lactococcus raffinolactis (R) ( n = 1/26),
• Enterococcus faecalis (E) ( n = 5/26) e
• Staphylococcus warneri (S) ( n= 2/26).
• A análise dependente de cultura mostrou semelhanças na diversidade da CIMI e
concordou com estudos independentes de cultura para a identificação de L. lactis
23. Carboidrato A Grupo ( n = 13) a
Grupo B ( n = 2) b
Grupo C ( n = 2) c
Grupo D ( n = 1) d
ATCC 19435 e
ATCC 19257 f
IL1403h _
Origem da cepa Leite cru Leite cru Leite cru Leite cru Leite Creme Laticínios
Ao controle - - - - - - -
D-ribose + + + + + - +
L-arabinose - - - - - - -
D-xilose + - + + + - -
D-galactose + + + + + - +
D-glicose + + + + + + +
D-frutose + + + + + + +
D-manose + + + + wg _
+ +
D-manitol - + - + - - -
D-sorbitol - + - - - - -
Arbutina + + + + + - +
Salicina + + + + + - +
D-celobiose + + + + + - +
D-maltose + + + + + - +
D-lactose + + + + + + W
D-melibiose - - - - - - -
D-sacarose - + + + - - -
D-trealose + + + + + - +
D-rafinose - - - - - - -
Amido - - - - - - -
D-tagatose - + - - - - -
24. Características Metabólicas e Funcionais
das Cepas CIMI
Grupos
fenotípicos
de
L.
lactis
Grupo (A)
L1 a L6, L10 a L13 e L15 a
L17 ( n = 13)
Grupo A (L1, L2, L3), Consumo da D-xilose
Grupo (B)
L7 e L8 (n = 2)
Grupo B (L8),
Consumo da D-tagatose, D-
sorbitol* e D-sacarose*
Grupo(C)
L14 e L18 ( n = 2)
Grupo C (L14) e
Consumo da D-xilose e D-
sacarose*
Grupo (D)
L9 ( n = 1)
Grupo D (L9).
Consumo da D-xilose e D-
sacarose*
25. Resultados e discussão
• O metabolismo celular dos Lactococcus resumem em duas possíveis vias
catabólicas para a utilização da lactose:
• (i) hidrólise da lactose para dar α-D-glicose e D-galactose realizada por uma β-
galactosidase , e
• (ii) a conversão em lactose 6-fosfato (Lac-6P) por uma lactose
fosfotransferase.
•Todos os genomas analisados possuíam uma enzima chave para a degradação da
L-arabinose, embora os perfis fenotípicos mostrassem uma incapacidade de
crescer em arabinose.
•A porcentagem de carboidratos utilizada pelas bactérias isoladas foi ligeiramente
maior (33% a 45%) em comparação com cepas do tipo L. lactis (29%).
26. Resultados e discussão
•O processo de pseudogenização progressiva (inativação de genes) ligado à sua
especificação de nicho atual.
• A L. lactis isolados vieram de um ambiente de fazenda antes de serem
introduzidos no leite cru e depois no UMSC
• As bactérias isoladas da CIMI foram progressivamente domesticadas, uma vez
que não podiam mais crescer em uma variedade de carboidratos derivados de
plantas devido à pseudogenização ou inserções de transposons em genes.
27. Atividades antimicrobianas
Ensaios
(n = 1616)
N= 34 bactérias
isoladas apresentou
atividade
antimicrobiana
contra até 5 cepas
indicadoras
R.: Os isolados 14 e 15.
Para as 5 cepas indicadoras
( S. ser. Typhimurium CIP
104115, S. aureus DSMZ
13661, S. aureus CIP 76.25, E.
faecalis CIP 103.015 e L.
innocua CIP 80.11).
A atividade
antimicrobiana do
isolado 14 de L.
lactis foi estudada em
ensaios de co-cultivo
contra as duas cepas
indicadoras: S.
aureus DSMZ 13.661
ou S. ser. Typhimurium
CIP 104115
28. Atividades antimicrobianas
CFS testado
S. ser. Typhimuri
um CIP 104115
Lactobacillus
Sakei CIP 104494
S. aureus DSMZ
13661
L. inócua
CIP 80.11
L. lactis IL1403 d
L. lactis isolado
14
8,0 ± 0,7 a 12,0 ± 0,7 8,0 ± 0,0 24,0 ± 0,7 13,0 ± 1,4
S. ser. Typhimuri
um
CIP 104115
/ b / / / /
Isolado 14
+ S. ser. Typhimur
ium CIP 104115
11,0 ± 0,0 14,0 ± 1,4 ND c 22,0 ± 1,4 15,0 ± 2,12
S. aureus DSMZ
13661
/ 10,0 ± 2,12 / / /
Isolado 14 + S.
aureus DSMZ
13661
ND 11,0 ± 1,4 14,0 ± 0,0 18,0 ± 0,7 17,0 ± 0,7
29. Atividades antimicrobianas
A ferramenta baseada na web BAGEL4 foi usada para minerar agrupamentos de genes de
metabólitos secundários dentro de todo o genoma L. lactis L3 (isolado 14).
O gene é conhecido por estar envolvido na produção da bacteriocina lactococina B (LcnB).
O LcnB afeta a permeabilidade da membrana, dissipando seu potencial e seu gradiente de pH
causado pelo vazamento de íons. Em cepas de L. lactis que carregam a proteína de imunidade, o
LcnB é inativo
O isolado 14 inibiu o crescimento de L. lactis IL1403, uma cepa livre de plasmídeo sensível à
bacteriocina. Esses resultados sugeriram que o isolado 14 poderia produzir um peptídeo
antimicrobiano próximo ao LcnB.
30. Conclusão
•Cinco variantes de L. lactis foram identificadas e cinco perfis de metabolismo de carboidratos foram
destacados no gênero Lactococcus.
• Essas cepas de Lactococcus diferem em suas propriedades fenotípicas das cepas comumente usadas
como iniciadores industriais.
• Além disso, algumas L. lactis isolados apresentaram atividade antimicrobiana detectada por métodos
culturais.
•Essas bactérias poderiam atuar como agente de biocontrole quando combinadas com outros
procedimentos da chamada tecnologia de barreiras.
•Além disso, considerando as características da cultura e sua relação com a qualidade do produto,
estudos adicionais podem ser úteis para determinar seus efeitos na aptidão tecnológica e nas
propriedades sensoriais do queijo.