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Universidad El Bosque
                   Posgrado Odontología
                       Biología Oral




                                       Residentes:
                                       Hernández Joanna
                                       Hernández Ma. Daniela
Profesor: Dr. Juan Carlos Munévar      Nissnick Lorena
                                       Reina Diana
                                       Uribe Manuel
Expresión del RANKL en células del Ligamento Periodontal durante
    la reabsorción radicular inducida por fuerzas compresivas.


    Planteamiento del Problema
Expresión del RANKL en células del Ligamento Periodontal durante
                   la reabsorción radicular inducida por fuerzas compresivas.




•Determinar la relación del RANKL y la reabsorción radicular producida por el
movimiento dental ortodóntico.




•Describir el proceso del mecanismo de acción del complejo RANK- RANKL
en la reabsorción radicular patológica por movimientos dentales
ortodónticos .

•Determinar si hay expresión de RANKL en células del ligamento periodontal
de dientes de pacientes que presentaron reabsorción radicular durante el
tratamiento ortodóntico, luego de ser sometidas a fuerzas compresivas in
vitro.
Expresión del RANKL en células del Ligamento Periodontal durante
                  la reabsorción radicular inducida por fuerzas compresivas.




•Establecer si existe relación entre la cantidad de expresión del RANKL y
la aplicación de diferentes intensidades de fuerzas compresivas en las
células del ligamento periodontal.


•Determinar si la reabsorción radicular patológica inducida por
movimientos dentales ortodónticos está relacionada con la expresión de
RANKL en células del ligamento periodontal.
Expresión del RANKL en células del Ligamento Periodontal durante
                la reabsorción radicular inducida por fuerzas compresivas.




                       Llave Regulatoria del Remodelado óseo
                        Llave Regulatoria del Remodelado óseo
                       durante el movimiento dental ortodóntico
                        durante el movimiento dental ortodóntico


                     REABSORCIÓN
                     REABSORCIÓN                                  RANKL
                                                                  RANKL


   Detección
    Detección                Riesgo de
                             Riesgo de
temprana de la
 temprana de la             Reabsorción
                            Reabsorción
  reabsorción
   reabsorción                Severa.
                               Severa.
Expresión del RANKL en células del Ligamento Periodontal durante
                    la reabsorción radicular inducida por fuerzas compresivas.

                               Marco Teórico
                               Marco Teórico


                Hallazgo clínico


Movimiento Dental Ortodóntico




 RANKL/RANKL/OPG

•Fuerzas
Intermitentes                 DAÑO
                              DAÑO
•Fuerzas Continuas
Expresión del RANKL en células del Ligamento Periodontal durante
    la reabsorción radicular inducida por fuerzas compresivas.




                                             Receptor de la Calcitonina
                                              Receptor de la Calcitonina
                                             Captesina KK
                                              Captesina
                                             C-Jun
                                              C-Jun
                                             FBP-1
                                              FBP-1
                                             GABPα
                                              GABPα
                                             TRAP
                                              TRAP
                                             GABPβ
                                              GABPβ
Sustancia
                 RANKL –                    P
                                          CGRP                         PGE
                Odontología                                             2


                                                      Linfocitos T,
   Modificación de la                                                 TNFα
  matriz extracelular,                                monocitos y
distorsión del colágeno                               macrófagos
y membrana celular del
       fibroblasto
                                                                       IL-1
                                                                       IL-6




                                             OPG                      PGE
                                                                       2


                                 RANK        RANKL
                   OSTEOCLASTO                       OSTEOBLASTO
DISEÑO EXPERIMENTAL

    TIPO DE ESTUDIO                   EXPERIMENTAL IN VITRO

                          ESQUEMA EXPERIMENTAL
                          ESQUEMA EXPERIMENTAL
        HIPOTÉSIS                                        MUESTRA
Ho: EL RANKL NO SE RELACIONA CON LA
REABSORCIÓN RADICULAR PRODUCIDA POR    CRITERIOS DE INCLUSIÓN
                                        CRITERIOS DE INCLUSIÓN       CRITERIOS DE EXLUSIÓN
                                                                      CRITERIOS DE EXLUSIÓN
FUERZAS TENSIONALES DURANTE EL
MOVIMIENTO ORTODONTICO.               •Hombres yyMujeres 13-30     •P. sistemicamente
                                       •Hombres Mujeres 13-30       •P. sistemicamente
                                      años.
                                       años.                       comprometidos.
                                                                    comprometidos.
HA: EL RANKL SE RELACIONA CON LA      •P. Requieran extracción
                                       •P. Requieran extracción    •P. Con tto ortodóntico
                                                                    •P. Con tto ortodóntico
REABSORCIÓN RADICULAR PRODUCIDA POR
                                      de 1eros premolares por
                                       de 1eros premolares por     previo.
                                                                    previo.
FUERZAS TENSIONALES DURANTE EL
MOVIMIENTO ORTODONTICO                motivo ortodóntico.
                                       motivo ortodóntico.         •P. Con trauma
                                                                    •P. Con trauma
                                      •P. Sistémicamente Sanos.
                                       •P. Sistémicamente Sanos.   dentoalveolar previo.
                                                                    dentoalveolar previo.
                                                                   •P. Con enfermedad
                                                                    •P. Con enfermedad
                                                                   Periodontal.
                                                                    Periodontal.



                                        GRUPO CONTROL:                 GRUPO CASO:
                                      5. 1eros premolares          5. 1eros premolares
PROCEDIMIENTOS
PROCEDIMIENTOS                        extraídos de P. con          extraídos de P. con
                                      R.R. ≤2mm                    R.R. ≥2mm
••En la Clínica de la Universidad El Bosque, se seleccionará los
 En la Clínica de la Universidad El Bosque, se seleccionará los
pacientes en los que este indicado la exodoncia de los primeros
 pacientes en los que este indicado la exodoncia de los primeros
premolares por razones ortodónticas. (3 meses).
 premolares por razones ortodónticas. (3 meses).

•Posteriormente, los pacientes seleccionados firmaran un
consentimiento informado, aprobado por el Comité de ética de la
Universidad El Bosque.

••Un día antes de las exodoncias se realizará control de placa yy
 Un día antes de las exodoncias se realizará control de placa
profilaxis, llevadas a cabo por los investigadores.
 profilaxis, llevadas a cabo por los investigadores.

•Exodoncias de 1eros premolares realizadas por Estudiantes del 7mo
semestre de la Universidad El Bosque, previamente entrenados.
Preparación del Medio de Transporte
        Preparación del Medio de Transporte

                PBS
                 PBS           Antibiótico
                               Antibiótico
               10 mm
               10 mm         penicilina, estreptomicina
20 ml
           Obtención de los Explantes
           Obtención de los Explantes
          •Lavado
                          PBS 3 VECES POR
                          PBS 3 VECES POR
          •Desinfección   10 SEG.
                          10 SEG.
Tej del Ligamento
                                         Tej del Ligamento
                                           Periodontal
                                            Periodontal

          Raspar tercio
          Raspar tercio
        medio con curetas
        medio con curetas
           de Gracey
            de Gracey


          100µg xxml de penicilina G
           100µg ml de penicilina G

          50µg xxml de Gentamicina
           50µg ml de Gentamicina         αminimun
                                           αminimun
                                       essential medium
                                       essential medium
          Temp. 37°C
           Temp. 37°C
-20°C
Aplicación de Fuerzas Compresivas
             Aplicación de Fuerzas Compresivas
                               Flexercell Strain Unit
                               Flexercell Strain Unit
                             •Fuerzas cíclicas de Compresión
                             fueron aplicadas en células del
                             ligamento.

                             •Se aplican, 6 niveles de fuerza
                             compresivas (9,12,15,18,21 y
                             24% por 5 días).



Al grupo Control no se le aplicará las fuerzas compresivas
Al grupo Control no se le aplicará las fuerzas compresivas
Determinación de la expresión o presencia del RANKL.
  Determinación de la expresión o presencia del RANKL.
          Kit comercial denominado Kit Quantikine
          Kit comercial denominado Kit Quantikine

                      Anticuerpo Anti-human
                      Anticuerpo Anti-human
                       RANKL/TNFRSF11A
                        RANKL/TNFRSF11A

A este se le adiciona un color,
el cual puede ser medido a
                                              3,5 a 4,5
través de su intensidad,
determinando la cantidad del                  horas
sustrato
(3) Meses Después
RANKL/TNFRSF11A
% DE PRESENCIA DEL RANKL EN LAS CÉLULAS DEL
     % DE PRESENCIA DEL RANKL EN LAS CÉLULAS DEL
LIGAMENTO PERIODONTAL EN EL GRUPO CASO, Y EL GRUPO
 LIGAMENTO PERIODONTAL EN EL GRUPO CASO, Y EL GRUPO
  CONTROL POSTERIOR A LA APLICACIÓN DE LAS FUERZAS
   CONTROL POSTERIOR A LA APLICACIÓN DE LAS FUERZAS
                    COMPRESIVAS
                     COMPRESIVAS

     N             %RANKL grupo   %RANKL grupo
                   Control        Caso
     1
     2
     3
     4
     5
     Total %
ARTICULOS O INSTRUMENTOS           PRECIOS
 2 Curetas de Gracey                     34$
 αminimun essential medium               75$
Solución fosfatasa Buffered             107$
Cabina de flujo laminar                 1850$
5 Tissue Train® Culture Plates (6       115$
unidades)
1000 tubos de ensayo desechables          35$
Laboratorio UIBO por 3 meses            1000 $
TOTAL EN DOLARES                         3216$
TOTAL EN PESOS                      6.432.000 pesos
 
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Microsc. Res. Tech. 61:483–495, 2003
 
Shimizu,  N;  Ozawa  Y;  Yamaguchi  M.    Induction  of  COX-2  expression  by  mechanical  tensión  force  in  human 
periodontal ligament cells. J Periodontol., 69, 670-677.
 
Hidefumi  Fukushima,  Akihiro  Nakao,  Fujio  Okamoto,  Masashi  Shin,  Hiroshi  Kajiya,Seiji  Sakano,  Anna  Bigas,  Eijiro 
Jimi,  and  Koji  Okabe.  The  Association  of  Notch2  and  NF-_B  Accelerates  RANKL-Induced  Osteoclastogenesis 
MOLECULAR AND CELLULAR BIOLOGY, Oct. 2008, p. 6402–6412
 
 Rouha M.S. Granfar, Christopher J.Day, Michael S. Kim, Miguel A. Morrison. Optimised Real time quantitative PCR 
assays for RANKL regulated genes. Molecular and cellular probes.Vol 19, pag 119-126 2005
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Expresión del RANKL en células del Ligamento Periodontal durante la reabsorción radicular inducida por fuerzas compresivas.

  • 1. Universidad El Bosque Posgrado Odontología Biología Oral Residentes: Hernández Joanna Hernández Ma. Daniela Profesor: Dr. Juan Carlos Munévar Nissnick Lorena Reina Diana Uribe Manuel
  • 2. Expresión del RANKL en células del Ligamento Periodontal durante la reabsorción radicular inducida por fuerzas compresivas. Planteamiento del Problema
  • 3. Expresión del RANKL en células del Ligamento Periodontal durante la reabsorción radicular inducida por fuerzas compresivas. •Determinar la relación del RANKL y la reabsorción radicular producida por el movimiento dental ortodóntico. •Describir el proceso del mecanismo de acción del complejo RANK- RANKL en la reabsorción radicular patológica por movimientos dentales ortodónticos . •Determinar si hay expresión de RANKL en células del ligamento periodontal de dientes de pacientes que presentaron reabsorción radicular durante el tratamiento ortodóntico, luego de ser sometidas a fuerzas compresivas in vitro.
  • 4. Expresión del RANKL en células del Ligamento Periodontal durante la reabsorción radicular inducida por fuerzas compresivas. •Establecer si existe relación entre la cantidad de expresión del RANKL y la aplicación de diferentes intensidades de fuerzas compresivas en las células del ligamento periodontal. •Determinar si la reabsorción radicular patológica inducida por movimientos dentales ortodónticos está relacionada con la expresión de RANKL en células del ligamento periodontal.
  • 5. Expresión del RANKL en células del Ligamento Periodontal durante la reabsorción radicular inducida por fuerzas compresivas. Llave Regulatoria del Remodelado óseo Llave Regulatoria del Remodelado óseo durante el movimiento dental ortodóntico durante el movimiento dental ortodóntico REABSORCIÓN REABSORCIÓN RANKL RANKL Detección Detección Riesgo de Riesgo de temprana de la temprana de la Reabsorción Reabsorción reabsorción reabsorción Severa. Severa.
  • 6. Expresión del RANKL en células del Ligamento Periodontal durante la reabsorción radicular inducida por fuerzas compresivas. Marco Teórico Marco Teórico Hallazgo clínico Movimiento Dental Ortodóntico RANKL/RANKL/OPG •Fuerzas Intermitentes DAÑO DAÑO •Fuerzas Continuas
  • 7. Expresión del RANKL en células del Ligamento Periodontal durante la reabsorción radicular inducida por fuerzas compresivas. Receptor de la Calcitonina Receptor de la Calcitonina Captesina KK Captesina C-Jun C-Jun FBP-1 FBP-1 GABPα GABPα TRAP TRAP GABPβ GABPβ
  • 8. Sustancia RANKL – P CGRP PGE Odontología 2 Linfocitos T, Modificación de la TNFα matriz extracelular, monocitos y distorsión del colágeno macrófagos y membrana celular del fibroblasto IL-1 IL-6 OPG PGE 2 RANK RANKL OSTEOCLASTO OSTEOBLASTO
  • 9. DISEÑO EXPERIMENTAL TIPO DE ESTUDIO EXPERIMENTAL IN VITRO ESQUEMA EXPERIMENTAL ESQUEMA EXPERIMENTAL HIPOTÉSIS MUESTRA Ho: EL RANKL NO SE RELACIONA CON LA REABSORCIÓN RADICULAR PRODUCIDA POR CRITERIOS DE INCLUSIÓN CRITERIOS DE INCLUSIÓN CRITERIOS DE EXLUSIÓN CRITERIOS DE EXLUSIÓN FUERZAS TENSIONALES DURANTE EL MOVIMIENTO ORTODONTICO. •Hombres yyMujeres 13-30 •P. sistemicamente •Hombres Mujeres 13-30 •P. sistemicamente años. años. comprometidos. comprometidos. HA: EL RANKL SE RELACIONA CON LA •P. Requieran extracción •P. Requieran extracción •P. Con tto ortodóntico •P. Con tto ortodóntico REABSORCIÓN RADICULAR PRODUCIDA POR de 1eros premolares por de 1eros premolares por previo. previo. FUERZAS TENSIONALES DURANTE EL MOVIMIENTO ORTODONTICO motivo ortodóntico. motivo ortodóntico. •P. Con trauma •P. Con trauma •P. Sistémicamente Sanos. •P. Sistémicamente Sanos. dentoalveolar previo. dentoalveolar previo. •P. Con enfermedad •P. Con enfermedad Periodontal. Periodontal. GRUPO CONTROL: GRUPO CASO: 5. 1eros premolares 5. 1eros premolares PROCEDIMIENTOS PROCEDIMIENTOS extraídos de P. con extraídos de P. con R.R. ≤2mm R.R. ≥2mm
  • 10. ••En la Clínica de la Universidad El Bosque, se seleccionará los En la Clínica de la Universidad El Bosque, se seleccionará los pacientes en los que este indicado la exodoncia de los primeros pacientes en los que este indicado la exodoncia de los primeros premolares por razones ortodónticas. (3 meses). premolares por razones ortodónticas. (3 meses). •Posteriormente, los pacientes seleccionados firmaran un consentimiento informado, aprobado por el Comité de ética de la Universidad El Bosque. ••Un día antes de las exodoncias se realizará control de placa yy Un día antes de las exodoncias se realizará control de placa profilaxis, llevadas a cabo por los investigadores. profilaxis, llevadas a cabo por los investigadores. •Exodoncias de 1eros premolares realizadas por Estudiantes del 7mo semestre de la Universidad El Bosque, previamente entrenados.
  • 11. Preparación del Medio de Transporte Preparación del Medio de Transporte PBS PBS Antibiótico Antibiótico 10 mm 10 mm penicilina, estreptomicina 20 ml Obtención de los Explantes Obtención de los Explantes •Lavado PBS 3 VECES POR PBS 3 VECES POR •Desinfección 10 SEG. 10 SEG.
  • 12. Tej del Ligamento Tej del Ligamento Periodontal Periodontal Raspar tercio Raspar tercio medio con curetas medio con curetas de Gracey de Gracey 100µg xxml de penicilina G 100µg ml de penicilina G 50µg xxml de Gentamicina 50µg ml de Gentamicina αminimun αminimun essential medium essential medium Temp. 37°C Temp. 37°C -20°C
  • 13. Aplicación de Fuerzas Compresivas Aplicación de Fuerzas Compresivas Flexercell Strain Unit Flexercell Strain Unit •Fuerzas cíclicas de Compresión fueron aplicadas en células del ligamento. •Se aplican, 6 niveles de fuerza compresivas (9,12,15,18,21 y 24% por 5 días). Al grupo Control no se le aplicará las fuerzas compresivas Al grupo Control no se le aplicará las fuerzas compresivas
  • 14. Determinación de la expresión o presencia del RANKL. Determinación de la expresión o presencia del RANKL. Kit comercial denominado Kit Quantikine Kit comercial denominado Kit Quantikine Anticuerpo Anti-human Anticuerpo Anti-human RANKL/TNFRSF11A RANKL/TNFRSF11A A este se le adiciona un color, el cual puede ser medido a 3,5 a 4,5 través de su intensidad, determinando la cantidad del horas sustrato
  • 17.
  • 18. % DE PRESENCIA DEL RANKL EN LAS CÉLULAS DEL % DE PRESENCIA DEL RANKL EN LAS CÉLULAS DEL LIGAMENTO PERIODONTAL EN EL GRUPO CASO, Y EL GRUPO LIGAMENTO PERIODONTAL EN EL GRUPO CASO, Y EL GRUPO CONTROL POSTERIOR A LA APLICACIÓN DE LAS FUERZAS CONTROL POSTERIOR A LA APLICACIÓN DE LAS FUERZAS COMPRESIVAS COMPRESIVAS N %RANKL grupo %RANKL grupo Control Caso 1 2 3 4 5 Total %
  • 19.
  • 20. ARTICULOS O INSTRUMENTOS PRECIOS 2 Curetas de Gracey 34$ αminimun essential medium 75$ Solución fosfatasa Buffered 107$ Cabina de flujo laminar 1850$ 5 Tissue Train® Culture Plates (6 115$ unidades) 1000 tubos de ensayo desechables 35$ Laboratorio UIBO por 3 meses 1000 $ TOTAL EN DOLARES 3216$ TOTAL EN PESOS 6.432.000 pesos
  • 21.   Krishnan,  V;  Davidovitch,  Z.  Cellular, molecular, and tissue- level reactions to orthodontic force.  American  Journal  of  Orthodontics and dentofacial Orthopedics. Volumen 129, 2006.   Abuabara A. Biomechanical aspects of external root resorption in orthodontic therapy. Med Oral Patol Oral Cir Bucal. Dec  1; 12 (8): E 610-3. Año 2007.   Joanna B. Tyrovola, Meropi N. Spyropoulos, Margarita Makou. Root resorption and the OPG/RANKL/RANK system: a mini review. Journal of Oral Sciencie, Vol 50, No.4, 367-376. 2008   A. George, CA Evans. Detection of root resorption using dentin and bone markers. Orthod Craniofacial Res. 2009 Agosto;   12 (3) 229-235   Hamamoto  Y,  Kawasaki  N,  Jarnbring  F,    Hammarström  L.  Effects and distribution of the enamel matrix derivate Emdogain® in the periodontal tissues of rat molars transplated to rhe abdominal wall. Dental Traumatology 2002: 18: 12- 23   Fuss Z, Tsesis I, Lin S. Root resorption-diagnosis, classification and trearment choices based on stimulation factors. Dental  Traumatology 2003; 19: 175-182.   Barrett  EJ,  Kenny  DJ,  Tenenbaum  HC,  Sigal  MJ,  Johnston  DH.  Replantation of permanent incisors in children using Emdogain®. Dental traumatology 2005; 21: 269-275.   Y. Yagi, N. Suda, Y. Yamakoshi, O. Baba, K. Moriyama.  In vivo Aplication of Amelogenin suppresses root resorption. J  Dent Res 88 (2): 176-181, 2009.  
  • 22. Xuan  Khanh  Le,  Claude  Laflamme,  Mahmoud  Rouabhia.  Phorphyromonas Gingivalis decreases osteoblast proliferation through IL- 6- RANKL/OPG and MMP-9/TIMPs Pathways.  Indian  J  Dent  Research,  20  (2),  2009.  Oral  Ecology Research Group, Faculty of Dentistry, Laval University, Quebec City. Canada.    Yamaguchi, Kazutaka. Inflammation in periodontal tissues in response to mechanical forces. Arch Inmunol Ther Exp,  2005, 53, 388-398. Departmet of Orthodontics, Nihon University School of dentistry at Matsudo, Japan.   Yamaguchi, Aihara. RANKL increase in compressed periodontal ligament Cells from Root Resorption. J DENT RES  2006; 85; 75. Departmet of Orthodontics, Nihon University School of dentistry at Matsudo, Japan.   Yamaguchi,  Shimizu.  Effects  of  different  magnitudes  of  tension-force  on  alkaline  fosfatase  activity  in  periodontal  ligament  cells.J  RES  DENT  1996;  75;  889.  Departmet  of  Orthodontics,  Nihon  University  School  of  dentistry  at  Matsudo, Japan.   TAKAHISA SASAKI. Differentiation and Functions of Osteoclasts and Odontoclasts in Mineralized Tissue Resorption,  Microsc. Res. Tech. 61:483–495, 2003   Shimizu,  N;  Ozawa  Y;  Yamaguchi  M.    Induction  of  COX-2  expression  by  mechanical  tensión  force  in  human  periodontal ligament cells. J Periodontol., 69, 670-677.   Hidefumi  Fukushima,  Akihiro  Nakao,  Fujio  Okamoto,  Masashi  Shin,  Hiroshi  Kajiya,Seiji  Sakano,  Anna  Bigas,  Eijiro  Jimi,  and  Koji  Okabe.  The  Association  of  Notch2  and  NF-_B  Accelerates  RANKL-Induced  Osteoclastogenesis  MOLECULAR AND CELLULAR BIOLOGY, Oct. 2008, p. 6402–6412    Rouha M.S. Granfar, Christopher J.Day, Michael S. Kim, Miguel A. Morrison. Optimised Real time quantitative PCR  assays for RANKL regulated genes. Molecular and cellular probes.Vol 19, pag 119-126 2005

Editor's Notes

  1. .
  2. i
  3. Todas las muestras presentan códigos.