tecnica ELISA como diagnostico

1. 2. EXPLIQUE
LA TECNICA
DE ELISA
DIRECTA Y SUS
APLICACIONES
EN MEDICINA.
TEJADA TRUJILLO, MARIA DEL CARM

2. TECNICA ELISA
 Procedimiento de ensayo-
inmuno- enzimático.
 Puede ser:
 Directo
 Indirecto
 Sándwich
 Se basa en la detección de un
antígeno(Ag)
 Inmovilizado sobre una fase sólida
 Mediante un anticuerpo unido a
una enzima
 Producto colorido
 Indirectamente es medido por la
espectrofotométricamente.

3.  En laboratorios se usa
para determinar si un
paciente tiene una
infección o una
enfermedad autoinmune.
 Procedimiento es rutinario
y sencillo
 Involucra a un gran
número de variables
 Selección de reactivo
 Temperatura
 Medición de volumen y
tiempo
 Si no se ajustan
correctamente puede
afectar a los pasos
sucesivos y al resultado de
 Resultado positivo -
confirma presencia de
anticuerpos.
 Hay personas que
producen una baja cantidad
de anticuerpos, por lo que
éstos pueden pasar
desapercibidos y no ser
medidos
 Dan lugar a un falso
negativo.

4. DISPOSITIVOS EMPLEADOS
 Micro placas de 96
pocillos de plástico.
 Espectrofotómetros de
lectura de placas que
han recibido el nombre
de lectores ELISA.
 Los lectores de ELISA
disponen de sistemas
de filtros que sólo
permiten la lectura de
una o pocas longitudes
de onda.

5. TECNICA DE ELISA DIRECTA
 Las placas ELISA se
preparan
 Recubren los pocillos con las
soluciones en las que se
sospecha se encuentra el
antígeno.
 Se incuban - anticuerpos
marcados.
Consta de las siguientes
etapas:
 Fijación al soporte insoluble
(“tapizado”) de antígenos
específicos.
 Lavado (no fijados)
 Adición de anticuerpos
marcados (“conjugados”) con
una enzima
 Si hay reacción entre Ac y Ag,
el complejo se solubiliza.
 Lavado (no reaccionados)

6.  Adición de un
substrato –
enzima
marcadora actúe.
 Se puede parar
la reacción si se
desea.
 Lectura visual o
colorimétrica del
producto final
coloreado.

7. APLICACIONES CLINICAS
 Diagnostico de infecciones
por microorganismos
 Confirmar presencia de
anticuerpos
 Cuantificar metabolitos
 Mujeres embarazadas:
 VIH
 Detección de antígenos
tumorales
 De gran importancia
en:
 Transplantes
 Medicina forense
 Antropología
 Los resultados aportan
información de la
enfermedad y
coadyudan en la
planificación del
tratamiento.