O documento fornece uma introdução sobre citometria de fluxo, descrevendo seus principais componentes e aplicações. Em 3 frases: 1) A citometria de fluxo usa um laser, óptica e eletrônica para analisar células individualmente em fluxo, medindo suas propriedades físicas e fluorescência após marcação com anticorpos. 2) Os principais componentes são o sistema fluido que alinha as células, o sistema óptico que gera e coleta sinais de luz, e o sistema eletrô

1. CITOMETRIA DE FLUXO Aplicações práticas Patrícia Cisneiros dos Santos Bióloga- UCSAL Mestranda do curso de Imunologia-UFBa

3. ANTICORPOS MONOCLONAIS

4. ANTICORPOS MONOCLONAIS

7. CÂMARA DE FLUXO SISTEMA FLUIDO CONVERGÊNCIA HIDRODINÂMICA FOCO DO LASER

8. Low Sample Pressure 12µl/min Sample Laminar Flow LOW DIFFERENTIAL PRESSURE Sheath Sheath Sample FILTRO DE AR GERA PRESSÃO AO FLÚIDO ENVOLVENTE “SHEATH ” HIGH DIFFERENTIAL PRESSURE High Sample Pressure 60µl/min Laminar Flow Sheath Sheath

10. FACSCalibur FL1 Red Diode Laser ~635 nm SSC FL3 FL4 670LP 661/16 585/42 488/10 90/10 Beam Splitter DM 560SP Fluorescence Collection Lens DM 640LP Half Mirror 488/10 . 488 nm Blue Laser FSC Diode Focusing Lens FL2 530/30 Beam Combiner SISTEMA ÓTICO Flow Cell Flow Cell

11. Filtros Ópticos – coletar sinais de luz Espelhos LP (longpass) = todo comprimento de onda maior que seu número é deixado passar e menor que seu número é refletido. Espelhos SP (shortpass) = todo comprimento de onda abaixo de seu número é deixado passar e acima de seu número é refletido. Espelhos BP (bandpass) = só deixa passar o comprimento de onda específico. SP 500 LP 500 BP500/30 Longpass Shortpass Bandpass 460 500 540 460 500 540 460 500 540 Filtro Detector – célula fotoelétrica

12. ÂNGULO DE DISPERSÃO FRONTAL (FSC) ÂNGULO DE DISPERSÃO LATERAL (SSC) LASER

15. FLUORESCÊNCIA O que é a fluorescência ? Comprimento de onda gerado pela excitação dos fluorocromos, após atingir a absorção máxima da luz do laser Luz Fluorescente emitida de menor energia e maior comprimento de onda Fluoresceína  = 530 nm Luz Incidente de maior energía Fluorocromo  = 480 nm CO 2 H O OH

17. SISTEMA ELETRÔNICO

18. DISPERSÃO POLIMORFONUCLEARES LINFÓCITOS MONÓCITOS DEBRIS/HEMÁCIAS/PLAQUETAS BLASTOS VOLUME (FS) GRANULOSIDADE (SS)

22. CD10 CD2 CD20 CD3 CD7 CD19 CD22 CD23 CD26 CD5 Leucemias Linfociticas ou Enfermidade residual mínima CD3 CD7 HLA DR CD 42a CD 61 CD19 CD33 CD13 CD14 CD34 Leucemias mielóides CD3 CD7 CD2 CD19 CD5 CD56 Linfomas e Mielomas LEUCEMIAS

23. APLICAÇÕES CLÍNICAS - Análise da subpopulação linfocítica - Diagnóstico e acompanhamento de leucemias e linfomas - Diagnóstico e acompanhamento de mieloma múltiplo - Detecção de células neoplásicas não-hematopoiéticas - Monitoramento quimioterapêutico / doença residual mínima - Análise de reticulócitos - Diagnóstico de hemoglobinúria paroxística noturna - Detecção de anticorpos antiplaquetários - Análise do conteúdo de DNA - Quantificação de células progenitoras ( Stem cells ) - Avaliação imunológica de paciente transplantado, de infusão linfocitária

24. OBRIGADA A TODOS! OBRIGADA A TODOS!