Este relatório descreve um experimento realizado por estudantes de microbiologia para isolar microrganismos usando o método de esgotamento em placas de Petri. O procedimento incluiu a semeadura de amostras de bactérias gram-positivas e gram-negativas em placas separadas usando uma alça flambada para evitar contaminação. Infelizmente, as placas foram descartadas e nenhum resultado pôde ser obtido. No entanto, a técnica de esgotamento é útil para obter culturas puras e identificar bactéri

1. UNIVERSIDADE ESTADUAL DO SUDOESTE DA BAHIA
Método de Esgotamento e Isolamento de Microrganismo
(Experimento Nº4)
Itapetinga-Ba
20/11/2010

2. EQUIPE:
 Amanda de Souza Almeida
 Gabriela Mateus de Fontes Silva
 Juliana Gomes Pimentel
Capítulo 5
Método de Esgotamento e Isolamento de Microrganismo
(Experimento Nº4)
Relatório apresentado à disciplina de
Microbiologia Ambiental, sob a orientação da professora
dessa unidade e ensino, Kátia Iro, sendo umas das notas
parciais da II unidade.
Itapetinga-Ba
20/11/2010

3. Introdução
A semeadura em placas com meio de cultura é de fundamental
importância para a obtenção de culturas puras, pois é a partir de uma
semeadura bem feita e sua posterior incubação que se pode trabalhar com as
colônias para identificação bacteriana.
Para evitar a contaminação, os meios de culturas devem ser
esterilizados antes utilização e manuseados com técnicas assépticas.
A semeadura deve ser realizada sempre com alça flambada, aplicando
o método de esgotamento, que visa à transferência para a superfície do meio
de cultura de um número gradativamente menor de células bacterianas. Assim,
após o período de incubação inicial (24 horas em estufa 37ºC), as colônias
originadas tenderão a disporem-se isoladamente na superfície do meio,
permitindo uma correta visualização.
Assim essa prática terá como objetivo obtermos a multiplicação de
determinados microorganismos, como suas devidas características.
Procedimento da prática
 A semeadura é feita com culturas de bactérias gram positivas e
culturas de bactérias gram negativas, cada uma analisada em
placa de petri diferente;
 Em seguida é feita a flambagem da alça de platina para evitar a
contaminação da amostra e da pessoa que estiver conduzindo a
prática, assim como o fio de platina, antes e depois de qualquer
operação de semeadura e deve ser posta na chama 2 a 3 vezes;
 Antes de realizar o esfregaço ou a semeadura, esperar esfriar
previamente a alça, pois é de grande relevância o resfriamento da
alça nas paredes da placa antes de colocar a alça em contato
com a cultura, pois como a temperatura é muito alta, pode haver
danos na amostra;
 Posteriormente as placas de Petri deverão ser abertas próximo ao
bico de Bunsen para evitar a contaminação com germes do ar;

4.  Após flambar a alça de platina e introduzir as culturas de
bactérias gram positivas e negativas, uma de cada vez, é feita a
semeadura nas placas de petri, sendo cada tipo de gram em uma
placa separada;
 Após a primeira estria, flambar novamente a alça, girar a placa
cerca de 90º e puxar nova estria. Repetir esse passo pelo menos
mais duas vezes. Denominando técnica de esgotamento;
 Uma vez semeadas as placas, ela devem ser incubadas em
estufas com a tampa voltada para baixo.
Análise de resultados
Pelo fato das placas terem sido descartadas não foi possível obter os
resultados esperados.
Conclusão
Atualmente, esta técnica serve para a identificação das
bactérias, devido ao fato de que a Gram Positiva ou Negativa
influencia diretamente na determinação de determinada
Bactéria. Dentre várias técnicas utilizadas para obter cultura
pura, foi utilizado o método de esgotamento do inoculo fazendo
estrias ao longo da placa.
Referências bibliográficas
 Referencial teórico o capítulo 5 do relatório em mãos.