Este documento describe el proceso de extracción de ADN de células vegetales. Se prepara una solución amortiguadora con detergente, sal y agua para lisar las células y liberar el ADN. La muestra vegetal se macera y se filtra en la solución. Luego se añade alcohol para precipitar el ADN, el cual se recupera con una varilla. El proceso permite aislar el material genético y estudiar sus propiedades físicas y químicas.

1. Extracción de ADN
BIOQ. JOSÉ RODRÍGUEZ T.

2. Objetivos
• Extraer el material genético
(ADN) de células de guineo,
cebolla y/o fresas.
• Establecer la relación entre
el proceso de extracción y
propiedades quίmico-fίsicas
del ADN

3. Solución amortiguadora o “buffer”
• 6 mL de detergente
líquido de fregar
• 5 g de sal de mesa
• 44 mL de agua destilada
• Una pizca de
ablandador de carne

4. Preparación de la
solución
 Mida 6 mL del detergente en
una probeta de 10 mL. Vierta en
un beaker de 100 mL.
Mida 44 mL de agua destilada.
Vierta en el “beaker” de 100 mL
que ya contiene el detergente.
Evite la formación de burbujas.
Finalmente, aňada 5g de sal de
mesa y el ablandador de carne.
Mezcle bien.

5. Procedimiento
•Remueva la cáscara de un
pedazo de guineo de una pulgada.
•Eche el guineo en una bolsa
plástica con cierre de seguridad.
Cierre la bolsa.
•Macere el guineo (puede ser
con la mano) hasta obtener una
consistencia bien blanda.
•Puede realizar el mismo
procedimiento con la fresa y la
cebolla (licuarla o cortarla).

6. Continuación: Procedimiento
 Añada los 50 mL de la solución
amortiguadora. Cierre bien. Evite la
formación de burbujas. ¿Por qué?
 Con cuidado, coloque la bolsa en
posición horizontal sobre papel
toalla. Asegúrese que el macerado de
guineo esté cubierto con la solución
amortiguadora. Espere 5 minutos.
¿Por qué el macerado debe estar
cubierto por la solución
amortiguadora?
¿Por qué debe esperarse 5 minutos?

7. Continuación:
Procedimiento Mientras esperan que
transcurran los cinco
minutos, presenten
posibles contestaciones a
las siguientes preguntas:
¿Cuál es la función del detergente?
Los detergentes son muy buenos para eliminar
grasas. En este caso, esas grasas son los lípidos
que componen a las membranas celular y de los
diferentes organelos: el cloroplasto, la
mitocondria, el aparato de Golgi y el retículo
endoplásmico, así como el núcleo. Este paso nos
permite lisar a las células, es decir, romperlas
para liberar su contenido: proteínas, ácidos
nucleicos y diferentes metabolitos.

8. ¿Cuál es la función del ablandador
de carne?
Al lisar a las células se libera una gran cantidad de
proteínas, algunas de estas proteínas tienen
como función degradar al ADN de patógenos
como son las bacterias y los virus. Si no
detenemos a estas proteínas (conocidas como
nucleasas) nuestro ADN será degradado. Para
evitarlo agregamos el ablandador de carnes, el
cual contiene proteasas, es decir, proteínas
especializadas en la degradación de otras
proteínas. En los ablandadores de carnes
usualmente encontramos papaína, la cual se
extrae de la papaya. Otras fuentes de proteasas
que puedes usar en vez del ablandador de carnes
son: jugo de piña, solución limpiadora de lentes
de contacto, y jugo de papaya.

9. ¿Cuál es la función de la sal?
Cada hebra de ADN está cargada de manera
negativa y como sabemos, las cargas iguales se
repelen. Para minimizar esta repulsión
electrostática agregaremos una pizca de sal. La
sal está compuesta de átomos con carga positiva
(el sodio) y negativa (el cloro). Los iones positivos
serán atraídos por las cargas negativas del ADN y
“apantallaran” a estas cargas, como resultado, la
repulsión entre las hebras de ADN disminuye.

10.  Coloque el paño sobre el vaso
plástico y filtre el macerado de
guineo. Luego, descarte el paño
con el macerado. ¿Por qué hay que
filtrar?
 Utilice la regla para marcar dos
tubos de ensayo a una distancia
de 1” y de 2” desde abajo hacia
arriba.
 Aňada a cada tubo de ensayo un
volumen del filtrado hasta que
llegue a la marca de 1”.
Continuación: Procedimiento

11.  Añada al tubo de ensayo un
volumen de alcohol etílico
70%-90% frío hasta llegar a la
marca de 2”.
 Sin mezclar, coloque el tubo
de ensayo en una gradilla o en
un vaso plástico. Espere por
5 minutos.
Continuación:
Procedimiento

12. Inserte en el tubo de ensayo una
varilla de cristal o removedor de
café para remover el ADN de la
capa superior del alcohol. Coloque
el ADN en otro tubo de ensayo.
Continuación: Procedimiento

13. Preguntas de análisis y
discusión
¿Cuál, piensas
tú, es la función del
detergente en la
solución
amortiguadora?

15. Cuando el detergente entra en contacto con la célula, captura los lípidos y las proteínas.

16. ¿Cuál es la función de la sal en la solución
amortiguadora?

18. ¿Cuál es la función del alcohol etílico?
El objetivo aquí es crear dos fases: en la parte inferior
tendremos una fase del color de nuestra fruta, y en la
parte superior una fase transparente (alcohol). El
ADN es soluble en agua, pero se precipita en
soluciones no polares. El alcohol y la sal nos
ayudaran a sacar al ADN del jugo de las frutas. Es
importante que no mezcles las fases.