Este documento describe técnicas para obtener cultivos puros de microorganismos, incluyendo siembra por estrías, difusión, placa vertida y diluciones seriadas. También explica cómo mantener y observar cultivos puros para determinar las características morfológicas de las especies bacterianas a través del microscopio.

1. Cultivo Puro
Técnicas de aislamiento
Mantenimiento y preservación de cultivos puros
Morfología macroscópica
Morfología microscópica

2. Definición
 El cultivo puro representa las condiciones artificiales para el
desarrollo de las bacterias y otros microorganismos y las
condiciones impuestas a los microorganismos mediante el manejo
del laboratorio.
 Para determinar las características de especies concretas de
microorganismos, es imperativo que el organismo se aislé y se
desarrollo en el laboratorio como un cultivo libre de otras
especies.

3. Método para aislar cultivos puros.
 Técnica de siembra por estrías en placa
 Técnica por difusión en placa
 Técnica de la placa vertida
 Técnica del enriquecimiento del cultivo
 Técnica de las diluciones en serie
 Aislamiento de una sola bacteria
Técnicas de
aislamiento

4. Técnicas de siembra por estrías en placa
 Con un asa bacteriológica, se pasa una porción de la muestra a
la superficie de un medio de cultivo hecho a base de agar y se
siembra en el medio por estrías en cuadrantes.

5. Técnicas de siembra por difusión en placa
 Para sembrar por difusión en placa, por lo común se usa una
varilla de cristal estéril para esparcir la muestra.
 Esta operación hace posible adelgazar la muestra de tal manera
que en la superficie del agar quedan las bacterias separadas
unas de otras.

6. Técnicas de siembra en placa
 Una porción de una colonia que se pase a un medio de cultivo en tubo
viene a ser un cultivo puro.
 Después de una incubación apropiada, el desarrollo de cada cultivo se
observa al microscopio o mediante cultivo para verificar que es puro.

7.  El principio de la técnica de la placa vertida es la dilución
(adelgazamiento) de la muestra en tubos.
 El medio se mantiene al estado líquido a una temperatura
de 45 – 52º C para permitir que el inóculo se distribuya
adecuadamente en el medio.
 Esta técnica se hace en forma cualitativa o cuantitativa.
Técnica de la placa vertida

8. Técnica de la placa vertida

9. Técnica del enriquecimiento del cultivo.
 El principio de esta técnica, es procurar un ambiente de cultivo
diseñado (medio de composición conocida y condiciones
específicas de incubación) que pueda favorecer el desarrollo de
cierto tipo concreto de bacterias que necesitemos pero que no
sea adecuado para las demás

10. Técnica del enriquecimiento del cultivo.
 Los medios de enriquecimiento se usan generalmente cuando el
tipo de bacteria que queremos aislar se encuentra en muy
pequeñas cantidades y se desarrolla con mayor lentitud que
muchas de las otras especies presentes en el inóculo.

11. Técnica del enriquecimiento del cultivo.

12. Técnica de las diluciones en serie.
 Se realiza mediante diluciones seriadas.
 Se basa en cuando la muestra esté muy diluida
contendrá solamente la bacteria que buscamos.
 O dependiendo de la dilución realizada se aislara el
microorganismo adecuado.

13. Técnica de las diluciones en serie.
Dilución Tipo de microorganismo
10-1
a 10-3
Hongos
10-4
a 10-6
Levaduras
10-7
a 10-10
Bacterias
 Para el aislamiento de microorganismos se puede
aplicar la técnica de aislamiento por estría o por
extensión en superficie (se trasfiere de 0.1 a 0.5
ml.)

14. Técnicas de Siembra
a) Siembra por inoculación o agitación: Con una asa
bacteriológica, esterilizada, se toma cantidad de inóculo, se
introduce en el centro del medio líquido, agitándose, no tocar la
pared del tubo
b) Siembra por estría (en tubos de agar inclinado): Muestra de
material en asa de siembra, deslizar en zigzag, empezar por
superficie más profunda

17. c) Siembra por picadura: Asa recta, tomar
muestra, sembrar en agar semisólido, forma
vertical
d) Siembra por dispersión-agotamiento: Asada
de la muestra, sembrar en medió sólido, en
placa Petri
e) Siembra por vertido en placa: Diluciones en
varios tubos, pipeta 1cc de muestra o dilución,
agregar en placa Petri estéril, se agrega medio
licuado, mantener a 55°C, movimientos
rotatorios, solidificar

20. Morfología y crecimiento de las colonias
Las colonias son masas visibles de células que se forman por división de una o varias células.
El desarrollo de colonias sobre superficies de agar permite al microbiólogo identificar las bacterias
porque las especies forman a menudo colonias con una forma y aspecto característico.
El tamaño, forma, textura y color de una colonia es propio de cada organismo.
La morfología de la colonia de una bacteria puede variar según el medio en que crezca la bacteria.

22. Colonias de bacterias
Serratia marcescens
Cultivada en Agar
MaConkey
Pseudomonas aeruginosa
Cultivada en
Agar Tripticasa-soja
Shigella flexneri
Cultivada en
Agar MacConkey
Colonias de Bacillus subtilis que han crecido en
medios con pocos nutrientes