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Vitaminas
Elementos nutritivos essenciais para a vida (VITA),
que na sua maioria possuem na sua estrutura
compostos nitrogenados (AMINAS)


O corpo humano deve receber as vitaminas através:
- alimentação
- por administração exógena (injeção ou via oral)
- por aproveitamento das vitaminas formadas pela flora intestinal


             Compostos orgânicos obtidos em uma dieta normal e
             capazes de manter a vida e promover o crescimento


      As necessidades de vitaminas variam em função de:
                  sexo, idade, peso, altura, necessidades calóricas,
                            estados de gravidez e lactação,
                                 atividade física, etc.
  _________________________________________________________________________________
  EQB353 – Microbiologia Industrial                           Escola de Química / UFRJ
Principais vitaminas existentes:
Características                                  Vitamina A (caroteno, retinol)
•     essenciais para o crescimento e o          Vitaminas do complexo B:
      funcionamento metabólico normal              B1 (tiamina)
      de um organismo;                             B2 (riboflavina)
                                                   B3 (niacina, niacinamida)
•     ativas em doses mínimas;
                                                   B4 (adenina)
•     não apresentem valor energético              B5 (ácido pantotênico)
      inerente;                                    B6 (piridoxina)
•     não possam ser biossintetizadas              B7 (biotina)
      pelos organismos                             B9 (ácido fólico)
                                                   B10, B11 (fatores do crescimento)
                                                   B12 (cobalamina, cianocobalamina)
                                                   B13 (ácido orótico)
                                                   B15 (ácido pangâmico)
                                                 Vitamina C (ácido ascórbico)
                                                 Vitamina D (calciferol, ergosterol)
                                                 Vitamina E (tocoferol)
                                                 Vitamina K




    _________________________________________________________________________________
    EQB353 – Microbiologia Industrial                           Escola de Química / UFRJ
Grupos das Vitaminas:

  Lipossolúveis - solúveis em lipídeos: absorvidas juntamente com as gorduras
  da alimentação

  Hidrossolúveis - solúveis em água: excretadas pela urina em pequenas
  quantidades, não sendo armazenadas no organismo em quantidades
  apreciáveis




A maioria das vitaminas hidrossolúveis
    são constituintes necessários de
   coenzimas que apresentam papel
   importante em diversos caminhos
              metabólicos




_________________________________________________________________________________
EQB353 – Microbiologia Industrial                           Escola de Química / UFRJ
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EQB353 – Microbiologia Industrial                           Escola de Química / UFRJ
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EQB353 – Microbiologia Industrial                           Escola de Química / UFRJ
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EQB353 – Microbiologia Industrial                           Escola de Química / UFRJ
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EQB353 – Microbiologia Industrial                           Escola de Química / UFRJ
Produção

 A maioria das vitaminas são produzidas por síntese química
 Vitamina B12 - exclusivamente produzida por fermentação
 Vitamina C - por semi-síntese




                                                                    Vitamina B12

                           Vitamina C

_________________________________________________________________________________
EQB353 – Microbiologia Industrial                           Escola de Química / UFRJ
Vitamina C
                                                           Vitamin C is widely available in
(L - Ácido ascórbico)                                      the form of tablets and powders.
                                                           The Redoxon brand, launched in
 sólido branco cristalino                                  1934 by Hoffmann-La Roche, was
                                                           the first mass-produced synthetic
 ponto de fusão: 190 - 192 °C
                                                           vitamin C.
 inodoro
 sabor ácido
 solúvel em água, álcoois e acetona
 insolúvel nos demais solventes orgânicos
 sensível à luz
 resistente ao calor
 características anti-oxidantes


                                                   Ácido ascórbico   Ácido dehidroascórbico
                                                   (forma reduzida   (forma oxidada vitamina C)
                                                   vitamina C)

 Produção Mundial estimada = 110.000 ton/ano
 Mercado ≅ US$ 60 milhões
 Maiores produtores: BASF/TAKEDA, DSM, MERCK,
                    China Pharmaceutical Group Ltd.
 _________________________________________________________________________________
 EQB353 – Microbiologia Industrial                           Escola de Química / UFRJ
Produção de Vitamina C
Meio de Produção: 20% sorbitol
                    3 – 5% milhocina
                    0,1% octadecanol
                             (antiespumante)
                    ácidos pantotênico,
                           p-amino-benzóico,
                           nicotênico (traços)

Inóculo: 3 a 4% volume total
                                                           Di-acetone-
                                                           ketogulonic
Agente: Gluconobacter (Acetobacter) suboxidans             acid          Ketogulonic
                                                                                acid
Condições: Fermentação submersa
           30 – 40% VVM
           agitação mecânica
           T = 30 – 35oC
           pH = 5,5 – 6,0
           rendimento = 98%
  _________________________________________________________________________________
  EQB353 – Microbiologia Industrial                           Escola de Química / UFRJ
Vitamina B12
(Cianocobalamina)
   sólido cristalino cor vermelho escuro
   inodoro
   insípido
   higroscópico
   muito solúvel em água e etanol
   insolúvel em solventes orgânicos
   decompõe-se em meio alcalino e em soluções com valores de pH < 4,5


                  síntese química é praticamente impossível

             grande número de reações requeridas (70 reações)



  Produção Mundial estimada = 3 t / ano
  Mercado ≅ US$ 71 milhões

_________________________________________________________________________________
EQB353 – Microbiologia Industrial                           Escola de Química / UFRJ
Produção de Vitamina B12
Agentes:

• Streptomyces – S. griseus, S. olivaceus (NRRL B-1125)
• Bacillus – B. megatherium (NRRL B938; NRRL B1372; NRRL B938R)

• Propionobacterium – P. freundereichii ATCC 6207, P. shermanii ATCC 13673
  produzem vitamina B12 intracelularmente
  excretam os ácidos propiônico e acético (inibem o crescimento celular)

• Pseudomonas – P. denitrificans
  produção de vitamina durante toda a fermentação
  adição de sal de cobalto e DBI (5,6-dimetilbenzimidazol): essenciais para a
  biossíntese
  aerobiose intensa
  produção totalmente dependente de betaína (H3C)3N(+)-CH2-CO2(-): ativação da
  biossíntese ou aumento na permeabilidade da membrana



_________________________________________________________________________________
EQB353 – Microbiologia Industrial                           Escola de Química / UFRJ
Produção
de Vitamina B12:
Biossíntese de
Cobalaminas




_________________________________________________________________________________
EQB353 – Microbiologia Industrial                           Escola de Química / UFRJ
Produção de Vitamina B12
Meios:                                                          Precursores:
                  Crescimento            Produção
Glicose               0,5%                 1,0%                 • colina ou dimetilbenzeno –
Milhocina             0,5%                 4,0%                   doadores de radical metil
Óleo de soja          0,1%                 0,1%                 • cianetos – sob a forma de
CoCl2.6H20            2 ppm                9 ppm                  ferrocianeto
CaCO3                 ---                  0,5%
pH                    7,0                  7,0




                               100mL meio         4 L meio              Propagador -170 L meio
                             shaker 30oC / 48 h   aeração 30oC / 48 h   aeração / agitação


                                                         inóculo (≅ 5%)
                                                  o
                                            25 - 28 C
                                            agitação
                                              (72 rpm)
                                            aeração      anti-espumante
                                           (0.5 VVM)
                                             70-90 h


 _________________________________________________________________________________
 EQB353 – Microbiologia Industrial                           Escola de Química / UFRJ
Produção de Vitamina B12




 Melhor rendimento obtido em 80oF ( ≅ 26,6oC)
_________________________________________________________________________________
EQB353 – Microbiologia Industrial                           Escola de Química / UFRJ
Produção de Vitamina B12




                                                                 A maior parte da vitamina
                                                                 B12 fica retida no micélio




  Manter o pH = 7.0-7.5 (adição de H2SO4)

_________________________________________________________________________________
EQB353 – Microbiologia Industrial                           Escola de Química / UFRJ
Caldo fermentado

Recuperação e                                   Acidificação com H2SO4

Purificação                                         Adição de Na2SO3
                                                (para proteger a vitamina)


                                                      Aquecimento
                                                  80-120oC / 10-30 min
                                                  (para lise das células)



                                                 Centrifugação              micélio e sólidos
                                                                                    Residuais

                                                     Adição de KCN
                                                  em presença de NaNO2
                                              (conversão de cobalamina em
                                              cianocobalamina mais estável)


                                                       Adsorção
                                             em amberlite, alumina, sílica-gel


                                          Eluição com álcool-água ou fenol-água


                                                       Evaporação


                                                      Cristalização
_________________________________________________________________________________
EQB353 – Microbiologia Industrial                           Escola de Química / UFRJ
_________________________________________________________________________________
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Eqb353 aula 19

  • 1. Vitaminas Elementos nutritivos essenciais para a vida (VITA), que na sua maioria possuem na sua estrutura compostos nitrogenados (AMINAS) O corpo humano deve receber as vitaminas através: - alimentação - por administração exógena (injeção ou via oral) - por aproveitamento das vitaminas formadas pela flora intestinal Compostos orgânicos obtidos em uma dieta normal e capazes de manter a vida e promover o crescimento As necessidades de vitaminas variam em função de: sexo, idade, peso, altura, necessidades calóricas, estados de gravidez e lactação, atividade física, etc. _________________________________________________________________________________ EQB353 – Microbiologia Industrial Escola de Química / UFRJ
  • 2. Principais vitaminas existentes: Características Vitamina A (caroteno, retinol) • essenciais para o crescimento e o Vitaminas do complexo B: funcionamento metabólico normal B1 (tiamina) de um organismo; B2 (riboflavina) B3 (niacina, niacinamida) • ativas em doses mínimas; B4 (adenina) • não apresentem valor energético B5 (ácido pantotênico) inerente; B6 (piridoxina) • não possam ser biossintetizadas B7 (biotina) pelos organismos B9 (ácido fólico) B10, B11 (fatores do crescimento) B12 (cobalamina, cianocobalamina) B13 (ácido orótico) B15 (ácido pangâmico) Vitamina C (ácido ascórbico) Vitamina D (calciferol, ergosterol) Vitamina E (tocoferol) Vitamina K _________________________________________________________________________________ EQB353 – Microbiologia Industrial Escola de Química / UFRJ
  • 3. Grupos das Vitaminas: Lipossolúveis - solúveis em lipídeos: absorvidas juntamente com as gorduras da alimentação Hidrossolúveis - solúveis em água: excretadas pela urina em pequenas quantidades, não sendo armazenadas no organismo em quantidades apreciáveis A maioria das vitaminas hidrossolúveis são constituintes necessários de coenzimas que apresentam papel importante em diversos caminhos metabólicos _________________________________________________________________________________ EQB353 – Microbiologia Industrial Escola de Química / UFRJ
  • 8. Produção A maioria das vitaminas são produzidas por síntese química Vitamina B12 - exclusivamente produzida por fermentação Vitamina C - por semi-síntese Vitamina B12 Vitamina C _________________________________________________________________________________ EQB353 – Microbiologia Industrial Escola de Química / UFRJ
  • 9. Vitamina C Vitamin C is widely available in (L - Ácido ascórbico) the form of tablets and powders. The Redoxon brand, launched in sólido branco cristalino 1934 by Hoffmann-La Roche, was the first mass-produced synthetic ponto de fusão: 190 - 192 °C vitamin C. inodoro sabor ácido solúvel em água, álcoois e acetona insolúvel nos demais solventes orgânicos sensível à luz resistente ao calor características anti-oxidantes Ácido ascórbico Ácido dehidroascórbico (forma reduzida (forma oxidada vitamina C) vitamina C) Produção Mundial estimada = 110.000 ton/ano Mercado ≅ US$ 60 milhões Maiores produtores: BASF/TAKEDA, DSM, MERCK, China Pharmaceutical Group Ltd. _________________________________________________________________________________ EQB353 – Microbiologia Industrial Escola de Química / UFRJ
  • 10. Produção de Vitamina C Meio de Produção: 20% sorbitol 3 – 5% milhocina 0,1% octadecanol (antiespumante) ácidos pantotênico, p-amino-benzóico, nicotênico (traços) Inóculo: 3 a 4% volume total Di-acetone- ketogulonic Agente: Gluconobacter (Acetobacter) suboxidans acid Ketogulonic acid Condições: Fermentação submersa 30 – 40% VVM agitação mecânica T = 30 – 35oC pH = 5,5 – 6,0 rendimento = 98% _________________________________________________________________________________ EQB353 – Microbiologia Industrial Escola de Química / UFRJ
  • 11. Vitamina B12 (Cianocobalamina) sólido cristalino cor vermelho escuro inodoro insípido higroscópico muito solúvel em água e etanol insolúvel em solventes orgânicos decompõe-se em meio alcalino e em soluções com valores de pH < 4,5 síntese química é praticamente impossível grande número de reações requeridas (70 reações) Produção Mundial estimada = 3 t / ano Mercado ≅ US$ 71 milhões _________________________________________________________________________________ EQB353 – Microbiologia Industrial Escola de Química / UFRJ
  • 12. Produção de Vitamina B12 Agentes: • Streptomyces – S. griseus, S. olivaceus (NRRL B-1125) • Bacillus – B. megatherium (NRRL B938; NRRL B1372; NRRL B938R) • Propionobacterium – P. freundereichii ATCC 6207, P. shermanii ATCC 13673 produzem vitamina B12 intracelularmente excretam os ácidos propiônico e acético (inibem o crescimento celular) • Pseudomonas – P. denitrificans produção de vitamina durante toda a fermentação adição de sal de cobalto e DBI (5,6-dimetilbenzimidazol): essenciais para a biossíntese aerobiose intensa produção totalmente dependente de betaína (H3C)3N(+)-CH2-CO2(-): ativação da biossíntese ou aumento na permeabilidade da membrana _________________________________________________________________________________ EQB353 – Microbiologia Industrial Escola de Química / UFRJ
  • 13. Produção de Vitamina B12: Biossíntese de Cobalaminas _________________________________________________________________________________ EQB353 – Microbiologia Industrial Escola de Química / UFRJ
  • 14. Produção de Vitamina B12 Meios: Precursores: Crescimento Produção Glicose 0,5% 1,0% • colina ou dimetilbenzeno – Milhocina 0,5% 4,0% doadores de radical metil Óleo de soja 0,1% 0,1% • cianetos – sob a forma de CoCl2.6H20 2 ppm 9 ppm ferrocianeto CaCO3 --- 0,5% pH 7,0 7,0 100mL meio 4 L meio Propagador -170 L meio shaker 30oC / 48 h aeração 30oC / 48 h aeração / agitação inóculo (≅ 5%) o 25 - 28 C agitação (72 rpm) aeração anti-espumante (0.5 VVM) 70-90 h _________________________________________________________________________________ EQB353 – Microbiologia Industrial Escola de Química / UFRJ
  • 15. Produção de Vitamina B12 Melhor rendimento obtido em 80oF ( ≅ 26,6oC) _________________________________________________________________________________ EQB353 – Microbiologia Industrial Escola de Química / UFRJ
  • 16. Produção de Vitamina B12 A maior parte da vitamina B12 fica retida no micélio Manter o pH = 7.0-7.5 (adição de H2SO4) _________________________________________________________________________________ EQB353 – Microbiologia Industrial Escola de Química / UFRJ
  • 17. Caldo fermentado Recuperação e Acidificação com H2SO4 Purificação Adição de Na2SO3 (para proteger a vitamina) Aquecimento 80-120oC / 10-30 min (para lise das células) Centrifugação micélio e sólidos Residuais Adição de KCN em presença de NaNO2 (conversão de cobalamina em cianocobalamina mais estável) Adsorção em amberlite, alumina, sílica-gel Eluição com álcool-água ou fenol-água Evaporação Cristalização _________________________________________________________________________________ EQB353 – Microbiologia Industrial Escola de Química / UFRJ