1. Silvia S. Montenegro Cataño
Fundación Universitaria de Popayán.
Ecología
E.M.B. Agar (con Eosina y Azul de Metileno)
BASE
EMB Agar se basa en una fórmula originalmente descrita por Holt-Harris y Teague en
1916; que posteriormente fue modificada por Levine; La principal diferencia entre las
dos es la inclusión de sacarosa en el medio de Holt-Harris y Teague. Ciertos
microorganismos entéricos fermentan con mayor facilidad la sacarosa que la lactosa.
Ahora el medio de cultivo combina las fórmulas de Holt-Harris y Teague con la de
Levine, para obtener un mejor rendimiento en el aislamiento selectivo de
enterobacterias y otras especies de bacilos Gram negativos.
Este agar es nutritivo por la presencia de peptona que favorece el desarrollo
microbiano. La diferenciación entre organismos capaces de utilizar la lactosa y/o
sacarosa, y aquellos que son incapaces de hacerlo, está dada por los indicadores
eosina y azul de metileno; éstos ejercen un efecto inhibitorio sobre una amplia
variedad de bacterias Gram positivas. El agar es el agente solidificante. Muchas cepas
de Escherichia coli y Citrobacter spp. Presentan un característico brillo metálico. Las
cepas que utilizan la lactosa poseen centro oscuro con periferia azulada o rosada,
mientras que las que no lo hacen son incoloras.
USO
Este medio (también denominado E.A.M.) es utilizado para el aislamiento selectivo y
de diferenciación de bacilos Gram negativos de rápido desarrollo y escasas exigencias
nutricionales. Permite el desarrollo de todas las especies de la familia
Enterobacteriaceae.
CONTENIDO
Colorantes de azul de metileno y eosina Y, que inhiben las bacterias gram-positivas
en cierto grado. Los colorantes también actúan como indicadores diferenciales en
respuesta a la fermentación de la lactosa o la sacarosa por parte de los
microorganismos. Los coliformes producen colonias de color negro azulado, mientras
que las colonias de Salmonella y Shigella son incoloras o de color ámbar transparente.
Las colonias de Escherichia coli pueden exhibir un brillo verde metálico característico
debido a la rápida fermentación de la lactosa.
2. Silvia S. Montenegro Cataño
Fundación Universitaria de Popayán.
Ecología
El conjunto de medios de aislamiento de baja selectividad para Salmonella en
muestras fecales y de otros tipos incluye el EMB Agar (con y sin sacarosa).
Este medio puede inhibir el crecimiento de las bacterias gram-positivas como los
estreptococos fecales, estafilococos y levaduras, o bien favorecer su crecimiento con
formación de colonias puntiformes.
COMPOSICIÓN
Formula por litro de agua destilada
Digerido pancreático de gelatina 10,0 g
Lactosa 5,0
Sacarosa 5,0
Fosfato dipotásico 2,0
Agar 13,5
Eosina Y 0,4
Azul de metileno 0,065
pH 7,2 +/- 0,2
INSTRUCCIONES
Suspender 36 g del polvo en 1 litro de agua purificada, reposar 5 minutos. Calentar
con agitación frecuente y llevar a ebullición hasta su disolución total. Esterilizar en
autoclave 121°C durante 15 minutos, distribuir en placas de Petri estériles.
INTERPRETACIÓN DE LOS RESULTADOS
Microorganismos fermentadores de lactosa y / o sacarosa: Colonias de color
negro azulado o amarronado. Pueden tener centro oscuro y brillo metálico.
Microorganismos no fermentadores de lactosa y sacarosa: colonias del color del
medio, incoloras.
ALMACENAMIENTO
Las placas, deben ser almacenadas en un lugar oscuro a una temperatura entre 2 y 8
°C, envueltas en su envase original, hasta justo antes de usarlas. Evitar la congelación
y el calentamiento excesivo.
3. Silvia S. Montenegro Cataño
Fundación Universitaria de Popayán.
Ecología
INCUBACIÓN
En aerobiosis, a 35-37 °C durante 18-24 horas.
Ejemplos: Características de las colonias con Agar EMB
Microorganismos BD EMB Agar, Modified
E. coli Colonias grandes, color negro azulado, brillo verde metálico
Enterobacter/Klebsiella Colonias grandes, mucoides, color negro azulado
Proteus Colonias grandes, incoloras
Salmonella Colonias grandes, desde incoloras hasta color ámbar
Shigella Colonias grandes, desde incoloras hasta color ámbar
Pseudomonas Colonias irregulares, incoloras
Bacterias gram-positivas C recimiento escaso o nulo
REFERENCIAS
E.M.B. Agar (con Eosina y Azul de Metileno); laboratorios Britania; argentina;
2010.
BD EMB Agar (Eosin Methylene Blue Agar), Modified; Instrucciones de uso-medios
en placas listos para su uso; BD; 2013
Holt-Harris, J.E., and O. Teague. 1916. A new culture medium for the isolation
of Bacillus typhosus from stools. J. Infect. Dis. 18:596-600.
Diagnóstico bacteriológico; Universidad Nacional del Nordeste - Facultad de
Medicina - Microbiología e Inmunología
