1. Programa de monitoramento da susceptibilidade
de Aedes aegypti aos inseticidas utilizados para
seu controle no Estado de São Paulo
Maria de Lourdes da Graça Macoris

2. Núcleo de Pesquisa - Sucen - Marília

3. DDT – Dedetização*
• Descoberta 1939
• Uso larga escala 1941
• Aedes aegypti Resistencia global (1986)**
**Brown AWA. Insecticide resistance in mosquitoes: a pragmatic review. J.
Am. Mosq. Control Assoc., 1986, 2: 123-140
* Significado de Dedetizar. Dicionário do Aurélio Online, 2019.
Disponível em: <https://dicionariodoaurelio.com/dedetizar>.
Acesso em: 01 de Aug. de 2019.

4. Programa estadual de monitoramento de Aedes
aegypti a inseticidas (1996 - 2019)
Barretos
Marília
P.Prudente
Ribeirão Preto
Araçatuba
S.J.R. Preto
Campinas
Bauru
SantosBotucatu
Itapevi
Sorocaba
Sâo Carlos
São Sebastião

5. Tópicos
•Conceito
•Mecanismos de resistência
•Detecção e monitoramento da resistência
•Como medir o impacto da resistência em campo

6. Capacidade de desenvolver uma habilidade de
tolerar a dose de uma substância tóxica que seja
letal para a maioria dos indivíduos da população de
uma mesma espécie sob condições naturais. Esta
capacidade tem base genética e assim pode ser
transmitida aos descendentes. (OMS, 1992)
Conceito

7. Conceito: processo de seleção natural

8. Fatores Envolvidos na Resistência a Inseticidas
•Genéticos: genes que conferem resistência (presença,
freqüência, dominância/recessividade).
•Biológicos/ecológicos: duração do ciclo biológico, grau de
isolamento (dispersão/ migração), variação das condições
ecológicas no tempo e no espaço, e seleção natural do
genótipo R.
•Operacionais: intensidade de exposição no tempo, no
espaço e nas várias fases do ciclo biológico e sexo,
aplicação residual ou não residual. (Georghiou e Taylor,
1976; OMS, 1976)

9. Exemplo velocidade desenvolvimento
resistência em insetos

10. Incidência acumulada de dengue
0,0
5000,0
10000,0
15000,0
20000,0
25000,0
Botucatu São Carlos Sorocaba Itu Marília Presidente
Prudente
Bauru Campinas São
Sebastião
Ribeirão
Preto
Barretos Santos Araçatuba São José do
Rio Preto
Casospor100milhabitantes
Municípios sentinelas
Incidência Acumulada de Dengue em Municípios Sentinelas
(1995-2014)

11. Associação entre uso de inseticida e perfil de
resistência.

12. Caracterização da susceptibilidade das
populações de Aedes aegypti – SP
Relatórios anuais do Programa de Monitoramento da susceptibilidade
de Aedes aegypti aos inseticidas utilizados para seu controle – Estado
de São Paulo.

13. http://www.ivcc.com/creating-
solutions/the-challenges/evolution
Liverpool School of Tropical Medicine
“Quanto mais intensos forem os esforços de controle como esforços de
eliminação, maior será a pressão de seleção para resistência, e mais
rapidamente o "ponto de inflexão" é atingido. É por isso que uma única
abordagem de inseticida está condenada ao fracasso”
To be sustainable resistance management ideally requires three active
ingredients with different modes of action and with initial susceptibility
to all three in the insect vector.

14. Tópicos
•Conceito
•Mecanismos de resistência
•Detecção e monitoramento da resistência
•Como medir o impacto da resistência em campo

15. Sítio de ação dos inseticidas
OC
e

16. Enzimas envolvidas no metabolismo de
inseticidas e resistência cruzada
*Reproduzido de Brogdon & McAllister (1998). “Insecticide Resistance and Vector Control”.

17. Mecanismo de resistência a inseticidas
Fonte: Corbel & Guessa, 2013. Distribution, Mechanisms, Impact and Management of Insecticide Resistance in
Malaria Vectors: A Pragmatic Review. https://api.intechopen.com/chapter/pdf-preview/43899

18. Principais mecanismos de resistência
identificados em mosquitos

19. Tópicos
•Conceito
•Mecanismos de resistência
•Detecção e monitoramento da resistência
•Como medir o impacto da resistência em campo

20. Etapas do monitoramento e seu significado
 Bioensaios O.M.S. Detecção e quantificação da
resistência
 Mecanismos de resistência
 Terceira etapa: provas de efetividade em campo

21. Detecção da resistência a inseticidas
através de bioensaios

22. Organização Mundial da Saúde

23. Guidelines – Aedes
(2016)

24. Detecção de resistência de insetos à inseticidas
através de bioensaios - WHO, 1970
• 1. Exposição dos
insetos à uma dose
chamada diagnóstico
(DD) pois é capaz de
discriminar resposta de
populações
• DD = CL/DL 99 linhagem
suscetível X 2
(larvas e adultos)
• 2. Avaliação da Razão
de Resistência (RR)
que é obtida por:
• RR = CL 50 de
linhagem teste / CL 50
de linhagem suscetível
• RR = CL 95 de
linhagem teste /CL 95
de linhagem suscetível

25. Bioensaio com uso de dose diagnóstica -
larvas
controle
25 larvas em cada copo : 100 controle
200 expostas ao inseticida
expostas
Interpretação - % de Mortalidade
98 a 100 = Suscetível
< 98 = Resistência sugerida
90 a 97 = Presença de genes
resistentes é sugerida
< 90 = Confirmação de presença
de genes

26. Bioensaio com uso de dose
diagnóstica – mosquitos adultos
controle
25 fêmeas em cada cone : 50 controle
100 expostas ao inseticida
expostas
Interpretação - % de Mortalidade
98 a 100 = Suscetível
< 98 = Resistência sugerida
90 a 97 = Presença de genes
resistentes é sugerida
< 90 = Confirmação de
presença de genes

27. Bioensaio para estimativa de
concentrações letais
Testemunha Expostos em concentrações crescentes
25 larvas por copo
Total = 100 larvas por concentração
Leitura de mortalidade 24 horas após exposição

28. Critério de interpretação
(WHO, 2016)
• RR < 5 - população susceptível
• RR 5 a 10 = resistência moderada
• RR ≥ 10 - resistência elevada

29. Proposta novas doses diagnósticas –
WHO 2016
D.D. = DL99 x 2
Maior que 98 % de mortalidade =
susceptível.
Menor que 98% - D.D. = DL99 x 5
ou
DD = DL 99 x 10

30. 0
20
40
60
80
100
DC 5x 10x
%Mortalidade
Doses diagnósticas
DC
5x
10x
0
20
40
60
80
100
DC 5x 10x
%Mortalidade
Doses diagnósticas
DC
5x
10x
0
20
40
60
80
100
DC 5x 10x
%Mortalidade
Doses diagnósticas
DC
5x
10x
Resistência baixa Resistência moderada
Resistência alta
WHOPES, 2016

31. Bioensaios - Adultos
Núcleo de Pesquisa SUCEN - Marília

32. Sala de Bioensaios
Núcleo de Pesquisa SUCEN - Marília

33. Detecção de mecanismos de resistência
através de provas bioquímicas

34. Avaliação de atividade de enzimas envolvidas no
metabolismo de inseticidas
G-S-T
Provas Bioquímicas
Metodologia C.D.C.

35. MoReNAa – critério avaliação atividades
enzimáticas
Cálculo do percentil 99 de Rockefeller para cada enzima
(perc 99 Rock)
atividade < 15: normal
Classificação
15 < atividade < 50: alterada
atividade > 50: muito alterada
Cálculo do % da população testada que apresenta
atividade superior ao percentil 99 de Rock
Avaliação de atividade enzimática em cepa susceptível
(Rockefeller)

36. ACOMPANHAMENTO DA FREQUÊNCIA DO ALELO KDR
• Fiocruz - MoReNAa – desde 2000
• Lab. De Bioquímica e Biologia Molecular -
LBBM – Sucen – desde 2013 como
Programa

37. Tópicos
•Conceito
•Mecanismos de resistência
•Detecção e monitoramento da resistência
•Como medir o impacto da resistência em campo

38. A presença de níveis (mesmo
que altos) de resistência a
inseticidas pode ou não ser
relevante para controle do
vetor

39. Se não for para avaliar eficácia em
campo, não tem sentido monitorar
resistência.
Supondo que você detecte
resistência, você não saberá se isto
é importante ou não!
Fonte: W. Brogdon - CDC

40. AVALIAÇÃO DO IMPACTO DA RESISTÊNCIA NA ROTINA DE
CONTROLE: SIMULADOS DE CAMPO E EFETIVIDADE

41. W.H.O: Guias para avaliação de tratamento
residual (2006)

42. Provas de parede para avaliação de efeito residual
de tratamento de superfícies – Metodologia OMS

43. W.H.O: Guias para avaliação de tratamento
U.B.V.

44. Padronização de metodologias de entomologia

45. Programa estadual de monitoramento de Aedes aegypti
a inseticidas (1996 - 2017)
Barretos
Marília
P.Prudente
Ribeirão Preto
Araçatuba
S.J.R. Preto
Campinas
Bauru
SantosBotucatu
Itapevi
Sorocaba
Sâo Carlos
São Sebastião

46. Rotina anual:
• Identificar e quantificar resistência
• Identificar mecanismo de resistência presente
• Avaliar o impacto da resistência em campo
• Acompanhar, no tempo, sua frequência

47. Amostra – extensão geográfica

48. Resistência de Aedes aegypti a temephos. Dose diagnóstica 0,012 mg/L
(OMS)
Resistente Susceptibilidade diminuída Susceptível
1996
2000
2006
2012

49. Evolução da resistência ao temephos
no Brasil

50. • 2000 - Substituição do Temephos por Bti em Santos
• 2001 - Restrição do uso de Temephos para emergências em
todo o Estado de São Paulo
• 2007 – Substituição do Temephos em todo o Estado de SP
• 2011 – Substituição do Temephos no Brasil
RESULTADOS QUE SUBSIDIARAM PROGRAMA DE CONTROLE

51. Resistência de Aedes aegypti a temephos. Dose diagnóstica 0,012 mg/L
(OMS)
Resistente Susceptibilidade diminuída Susceptível
2015/2017

52. Susceptibilidade - adultos

53. CIPERMETRINA
Resistente Susceptibilidade diminuída Susceptível
PERFIL DE SUSCEPTIBILIDADE DE INSETOS
ADULTOS - 2000
PERMETRINA

54. 2001 – Manejo da Resistencia à piretróides com sua
substituição pelo Malathion
RESULTADOS QUE SUBSIDIARAM PROGRAMA DE CONTROLE

55. Resistência de Aedes aegypti
CIPERMETRINA
Resistente Susceptibilidade diminuída Susceptível
2006
2016

56. Resistência de Aedes aegypti
DELTAMETRINA
Resistente Susceptibilidade diminuída Susceptível
2006
2016

57. Resistência de Aedes aegypti
MALATHION
Resistente Susceptibilidade diminuída Susceptível
2001
2014

58. Resistência de Aedes aegypti
MALATHION
Resistente Susceptibilidade diminuída Susceptível
2017
97,9
97,7
94,4
0
20
40
60
80
100
DC 5x 10x
%Mortalidade
Doses diagnósticas
DC
5x
10x
Resistência baixa

59. Programa Brasileiro MRI Aedes aegypti,
2017-2018
Localidades com populações de Ae. aegypti
resistentes a pyriproxyfen

60. Programa Brasileiro MRI Aedes aegypti,
2017-2018
Localidades com populações de Ae. aegypti resistentes a malathion.

61. Mecanismos de resistência

62. Critério de interpretação de provas
bioquímicas
atividade < 15: normal
Classificação
15 < atividade < 50: alterada
atividade > 50: muito alterada

63. Atividade enzimática em populações
sentinelas
Larvas Alfa Beta MFO GST
Araçatuba A A MA MA
Barretos A A A A
Botucatu N N N A
Campinas A A A MA
Itapevi N A N A
Marília A N N A
P. Prudente A A A A
Registro A A A MA
Ribeirão Preto A A A A
Santana do Parnaíba A A A A
Santos A MA MA MA
SJ Campos A A A A
São Sebastiao A A MA A
SJR Preto A A A A
Sorocaba A A MA MA
Adultos Alfa Beta MFO GST
Araçatuba A A A A
Barretos A A A A
Campinas A A A A
Itapevi MA MA A MA
Marília A A A A
Pirituba A N A A
P. Prudente A A N A
Registro A A A A
Ribeirão Preto A MA A A
Santos A MA MA A
SJ Campos A A A MA
São Sebastiao A A A MA
SJR Preto A A A A
Sorocaba A A A A
Atividade Alterada A
Atividade Normal N
Atividade Muito Alterada MA

64. Correlação entre R.R.95 temephos e
atividade enzimática
ALFA BETA MFO GST
Número de pares 38 38 38 38
Pearson r 0,7637 0,5830 -0,09960 0,01860
Intervalo confiança 95%
0.5873 to
0.8708
0.3235 to
0.7609
-0.4064 to
0.2274
-0.3030 to
0.3364
Valor P P<0.0001 0,0001 0,5519 0,9118
Correlação significante
(alpha=0.,5) Sim Sim Não Não
R quadrado 0,58 0,33 0,009 0,003

65. Acompanhamento da frequência da
mutação KDR

66. Programa Brasileiro MRI Aedes
aegypti, 2017-2018
Mutações kdr (sítios 1016 e 1534 do gene NaV)

67. ACOMPANHAMENTO DA FREQUÊNCIA DO ALELO KDR*
*Relatório 2015 – José Eduardo Bracco

68. Avaliação da efetividade em
campo

69. Bioensaio para avaliação de efeito
residual de larvicidas

70. Exemplo de montagem com reposição de
volume

72. Exposição de larvas homogêneas

74. R
ockefeller
<
3
3
-5
>
5
0
20
40
60
80
100
R.R.95
Mortalidademédia(%)Percentual médio de mortalidade de populações de
Aedes aegypti, segundo nível de resistência, expresso
como R.R.95
Macoris, 2011

75. Critério para substituição de
inseticida Ministério da Saúde
R.R. > 3

76. Teste em campo aberto – exemplo de
gaiolas

77. Resposta de controle em campo – Tratamento
Espacial 2000/2001

78. Mortalidade média de populações de Aedes aegypti
expostas, em gaiolas sentinelas, ao tratamento com
deltametrina (2011/2012).

79. Field efficacy tests – sentinel cages -
lambdacyalothrin (PY) 2015

80. Resposta de controle em campo – Tratamento
Espacial 2000/2001

81. Percentual médio de mortalidade de populações de
Aedes aegypti expostas ao tratamento UBV com
malathion. Provas com gaiolas sentinelas realizadas
em 2015

82. Percentual médio de mortalidade de Aedes
aegypti (Barretos) expostas ao tratamento UBV
com malathion. Análise temporal

83. Impacto da resistência a inseticidas na rotina de controle

85. AVALIAÇÕES REALIZADAS EM 2001
Resposta em relação a mortalidade observada para Rockefeller
Tratamento residual em superfícies (2001 - 2004)M
arilia
C
iper
M
arília
D
eltam
etrina
M
arilia
B
endiocarb
M
arilia
Fenitro
Santos
C
iper
Santos
D
eltam
etrina
Santos
B
endiocarb
Santos
Fenitro
0
20
40
60
80
100
População de Ae aegypti
percentual

86. AVALIAÇÕES REALIZADAS EM 2011

87. AVALIAÇÕES REALIZADAS EM 2011

88. AVALIAÇÕES REALIZADAS EM 2011

89. Avaliações realizadas em 2013/2014

90. O propósito de monitorar não é
monitorar. O propósito de monitorar
é prover dados de um lugar
particular a um determinado tempo,
o que irá permitir decisões para que
o manejo seja implementado a
tempo

91. Conclusões
• O uso do controle químico seleciona vetores resistentes aos
inseticidas
• São Paulo é um exemplo mundial de investimento em moderação do
uso, alerta para resistência e garantia à população de que a
recomendação de produtos se baseia em estudos.
• Reforça-se a necessidade investimento em atividades de controle
sustentável.

92. Caracterização da suscetibilidade das populações de
Aedes aegypti a organophosforados

93. Caracterização da suscetibilidade das populações de
Aedes aegypti ao Temephos

94. Efeito residual

95. Caracterização da suscetibilidade das populações de Aedes
aegypti ao Temephos

96. Divulgação dos resultados no site da SVS
• http://portalsaude.saude.gov.br/images/pdf
/2014/novembro/21/Informa----es-sobre-
estudos-larvicidas--2-.pdf

97. Registros de resistência a temephos em Aedes
aegypti
Fonte: WIN project, 2017

98. Registros de resistência a piretróides em
Aedes aegypti
Fonte: WIN project, 2017

99. Obrigada

100. MARÍLIA

101. Manejo de resistência