Tincion de scheffer fulton

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Tincion de scheffer fulton

  1. 1. PRACTICA #6TINCION DE SCHEFFER- FULTON MESA # 5
  2. 2. Introducción Dado que la clasificación de las bacterias depende principalmente de su tamaño, forma y propiedades de coloración, el microscopio ha sido durante mucho tiempo el instrumento principal del microbiólogo. Las preparaciones no teñidas pueden ser observadas al microscopio de contraste de fases, pero en general se utilizan preparaciones fijadas al calor y teñidas.
  3. 3. MATERIALES, EQUIPO Y REACTIVOSCantidad Material y equipo Capacidad cantidad Reactivos formulas descripción24 Portaobjetos Portaobjetos de 100 ml Safranina C20H19CIN4 25x75mm24 Cubre objetos Cubreobjetos de 100 ml Alumbre de KAI(SO4)2·12H 25x75mm potasio 2O18 Asas Bacterioló-gicas 100 ml Acido tánico C76H52O466 Mecheros Bunsen 100 ml Verde de C8H10N4O2 malaquita12 varillas de tinción 100 ml Fucsina básica C20H19N3 Armar varillas con mangueras de hule 100 ml Fenol C6H5OH 100 ml etanol CH3CH2OH
  4. 4. Tinción de Sheaffer-FultonTinción de sheaffer-Fulton usado para colorear biometría hemáticapara esporas está también es conocida como la de Wright.La tinción de Sheaffer Fulton permite observar: a.- Esporas. b.- Cuerpos fructíferos c.- Conidias d.- Células gemantes..-¿De qué color se ven las esporas y las células vegetativas en la tinción deSheafer y Fulton? .- Verde y rojas
  5. 5. Las esporas Una espora (Gr. spora=semilla) es una unidad diminuta y simple; que se propaga sin un embrión y sirve para la producción de un nuevo individuo de la misma especie. Desde la espora empieza el desarrollo del hongo en forma filamentosa.
  6. 6. Tipos de esporas que existen
  7. 7. Clasificación de las esporas Por su función:-En hongos, las clamidospora-Los hipnozigotos de los hongos zigomicetosPor su origen durante el ciclo biológicoson haploides.La mayoría de los hongos producenmitoesporas.Por la motilidades la capacidad de moverse autónoma yespontáneamente.
  8. 8. Partes de la espora
  9. 9. ¿Que es un frotis? Extensión que se realiza sobre un portaobjetos de una muestra o cultivo con objeto de separar lo más posible los microorganismos, ya que si aparecen agrupados en la preparación es muy difícil obtener una imagen clara y nítida. Posteriormente, el frotis debe ser fijado al vidrio del portaobjetos para poder aplicar los métodos habituales de tinción La fijación de una extensión bacteriana hace que las bacterias queden inactivadas adheridas al vidrio alterando lo menos posible la morfología y bacteriana y las posibles agrupaciones de células que pudiera haber.
  10. 10. ¿Que es un colorante? En química, se llama colorante a la sustancia colorida usada en tinciones para resaltar diferentes microorganismos. También se le llama colorante a la sustancia capaz de absorber determinadas longitudes de onda de espectro visible. Los colorantes son sustancias que se fijan en otras sustancias y las dotan de color de manera estable ante factores físicos/químicos como por ejemplo: luz, lavados, agentes oxidantes, etc.
  11. 11. VERDE DE MALAQUITAEl verde de malaquita es un colorantedébilmente básico (tiene una carga positivadébil) y por tanto, se une débilmente a labacteria. Penetra en las células vegetativas.Cuando se calienta en la preparación tambiénpenetra las esporas. Durante el lavado con agua,verde de malaquita se eliminade las células vegetativas,pero no de la espora.
  12. 12.  Lasesporas quedan teñidas de verde y las células vegetativas teñidas de rosa. Características: aspecto Solido verde Olor Característico pH 2.4 Punto de Fusión 159ºC Solubilidad 110g/L en agua a 25ºC
  13. 13. Preparación Verde de malaquita................. 5 g Agua destilada..................... 100 mil Preparación:- Disolver el colorante en el agua y dejar en reposo durante una hora y media. - Filtrar. - Guardar en frasco oscuro.
  14. 14. PELIGROSIDAD Nocivo en contacto con la piel y por ingestión. Evitar contacto con los ojos. Usar guantes adecuados. En caso de ingestión, acúdase inmediatamente al medico y muéstrele la etiqueta o el envase. Ingestión: provoca irritaciones de las mucosas en la boca, faringe, esófago y tracto gastrointestinal. Piel: irritante Ojos: irritante Inhalación: causa irritación de las vías respiratorias.
  15. 15. SAFRANINA El colorante de contraste (la safranina) solopuede teñir a las células vegetativas(decoloradas por el agua).La safranina , es un colorante biológico, decontraste que seutiliza en la Tinción de Gram para proporcionarun color violetamás intenso a las bacterias Gram+ y tiñede rosa a las bacteria s G- ; en histología y en citología. La safranina seusa como líquido de contraste en algunos protocolos de tinción, coloreando el núcleo celular de rojo.
  16. 16. CARACTERISTICAS: Aspecto Liquido rojo Olor Alcohol Etílico Solubilidad Miscible con agua Formula C20H19ClN4 Peso molecular 350,85 g/mol
  17. 17. PreparaciónSafranina..................................... 0.5 gAgua destilada............................ 100 milPreparación:- Disolver el colorante y filtrar.
  18. 18. PROCEDIMIENTO 1. Hacer un frotis de Bacillus sp. De la manera usual: Colocar una pequeña gota de agua en el centro de un portaobjetos limpio. Flamear el asa de siembra, tomar, en condiciones asépticas, una pequeña cantidad del cultivo bacteriano en medio sólido y transferirlo a la gota de agua. Remover la mezcla con el asa de siembra hasta formar una suspensión homogénea. Esperar hasta que el líquido se evapore o acelerar su evaporación acercando el porta a la llama del mechero.
  19. 19. 2. Cubrir la extensión con papel defiltro (dificulta la precipitación delcolorante sobre las bacterias).
  20. 20. Depositar la preparación sobre 3. una platina de Koch. Añadir verde de malaquita. Esperar un minuto.
  21. 21. 4.Seguir la tinción con calor : en emisión de vapores durante 5-10 minutos. Dejar enfriar.
  22. 22. 5.Lavar con agua abundante. Secar.
  23. 23. 6.Teñir con safranina (dos minutos). Lavar con agua. Secar. Observar con objetivo de inmersión.
  24. 24. RESULTADOS Luego del montaje al microscopio óptico, se observaron bacilos Gram positivos esporulados; asimismo se apreciaron esporas solitarias de forma circular y bacilos que no presentaban formación de esporas. Las esporas teñidas de verde y otras bacterias teñidas de rojo.
  25. 25.
  26. 26.
  27. 27. CONCLUSION La tinción de Scheffer y Fulton emplea verde malaquita, como colorante primario, el cual es eliminado posteriormente por el resto de la célula bacteriana, pero no de la espora, mediante un enjuague con agua. Como contra tinción la emplea la safranina, la cual tiñe la célula vegetativa. Finalmente podemos mencionar que a pesar que la bacteria es una estructura muy pequeña, por medio de la tinción con verde de malaquita, el cual requirió del calor para la penetración; se pudo observar la estructura interna de la célula bacteriana, particularmente las endeosporas. En este experimento se utilizó una tinción simple debido a que la misma permite que se coloree toda la célula excepto la espora que se observa de un tamaño bien aceptable El colorante Verde malaquita: capaz de teñir las esporas en caliente. La Safranina: colorante de contraste que tiñe las formas vegetativas. Las endoesporas, tras la primera tinción, no perderán el colorante en el lavado con agua, y sí lo harán las formas vegetativas, que quedarán teñidas con el segundo colorante

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