Successfully reported this slideshow.
We use your LinkedIn profile and activity data to personalize ads and to show you more relevant ads. You can change your ad preferences anytime.

Fish

2,041 views

Published on

  • Be the first to comment

Fish

  1. 1. HIBRIDACIÓN FLUORESCENTE IN SITU (FISH) TIANA ALARCON BRIGITTE CASTRO MARIA ALEJANDRA CHAPARRO CAMILO MOLANO CAROLINA PAEZ
  2. 2. DEFINICION • La técnica consiste en preparar cortas secuencias de DNA de una sola hebra, llamadas sondas, que son complementarias de las secuencias de DNA que se quieren marcar y examinar. • Es muy utilizada en la detección de anomalías cromosómicas. • alta sensibilidad y especificidad
  3. 3. SONDAS • Son secuencias cortas de ADN de una sola hebra, que son complementarias de las secuencias de ADN que se quieren marcar y examinar.
  4. 4. Sondas especificas de un locus Hibridan a una región particular de un gen. Esta sonda es útil cuando se ha aislado una pequeña parte de un gen y se quiere averiguar en que cromosoma se encuentra. Sondas centroméricas contienen secuencias complementarias de las secuencias repetidas que se encuentran en los centrómeros de los cromosomas. Como pueden utilizarse sondas de diferentes colores, cada cromosoma puede ser marcado de manera distinta, con lo que se puede averiguar si un individuo tiene el número correcto Sondas para cromosomas completos Son colecciones de sondas de un tamaño reducido, cada una de las cuales se hibrida a una secuencia diferente a lo largo de todo un cromosoma. Utilizando estas librerias de sondas, se puede marcar todo un cromosoma generando un cariotipo espectral.
  5. 5. • SONDAS DE SECUENCIA UNICA:para la deteccion de regiones especificas Ej: regiones subtelomericas microdelecciones • SONDAS CENTROMERICAS:son sondas alfa satelite que permiten la deteccion de secuencias altamente repetitivas de las regiones pericentromericas • SONDAS PARA REGIONES ESPECIFICAS:detecta secuencias altamente repetitivas localizadas en determinadas regiones de los cromosomas Ej. Yq12 • SONDAS PARA EL PINTADO DE CROMOSOMAS COMPLETOS (WCP):detectan secuencias de eucromatina en determinados brazos o cromosomas completos TIPOS DE SONDAS DE FISH - SECUENCIAS EN EL GENOMA :
  6. 6. PROCEDIMIENTO A . Moter ,U . B . Gobel,2000
  7. 7. FISH (Hibridación in situ con fluorescencia)
  8. 8. HISTORIA • Las primeras técnica de FISH fue desarrollada, independientemente por Padue, Gall, John y sus colaboradores en 1969, pero fue propuesto por Olsen. • En 1989, DeLong y su equipo de trabajo emplearon oligonucleótidos marcados con fluorocromos para detectar células microbianas crecidas de manera individual.
  9. 9. APLICACIONES • Detecta anomalías: Aneuploidía, la pérdida de una región cromosómica, un cromosoma entero o para monitorizar la progresión de una aberración. • En el diagnóstico de una enfermedad genética. • FISH se puede aplicar a la investigación como: el mapeo de genes, identificación de nuevos oncogenes que contribuyen a diversos tipos de cáncer.
  10. 10. • Sospecha de sindrome de microdelecion • Retraso mental • Parejas con abortos de repeticion • Cromosomas marcadores • Caracterizacion de reestructuraciones Cromosomicas • Diagnostico prenatal de las aneuploidias mas frecuentes • Diagnostico de diferentes aneupolidias en Abortos espontaneos
  11. 11. VENTAJA • Proporciona una resolución considerablemente superior a la de las técnicas de bandas de alta resolución; ya que puede detectar deleciones de tamaño tan pequeño como 1 millón de pares de bases. • Pueden detectar aneuploidias empleando cromosomas en interfase, no es necesario estimular a las células para que se dividan con el fin de obtener cromosomas en metafase.
  12. 12. COMPARACION • Convencional: Técnicas de bandeo de cromosomas (tinción Giemsa) revolucionó el análisis citogenético y han sido fundamentales en la comprensión de los cambios genéticos en ambas enfermedades constitucionales y adquiridos. • La resolución del análisis de bandas es de tal manera que sólo puede detectar reordenamientos que implican 0,3 Mb de ADN. • Técnicas de bandas se limitan a células mitóticas activas.
  13. 13. • La tinción de cromosomas con Giemsa permite el análisis de los diferentes tipos como: cromosomas policéntricos, cromosomas en anillo, intercambios de cromátidas y fragmentos. • Otros tipos de aberraciones cromosómicas tales como translocaciones e inversiones recíprocas no son normalmente reconocible con la tinción de Giemsa, pero pueden ser visualizados por FISH.
  14. 14. Nueva: La tecnología de Microarreglos. • Analizar diferentes tipos de muestras biológicas (tejidos, proteínas y material genético) y otras moléculas de manera simultánea por ensayo. • La versatilidad de esta técnica permite utilizarla en estudios de dosis-respuesta, para establecer perfiles de expresión diferencial de genes en condiciones experimentales distintas (enfermedades y tratamientos) en el análisis de polimorfismos, presencia de metilaciones, mutaciones puntuales e identificación de blancos terapéuticos.
  15. 15. E. Medina, 2009
  16. 16. Bishop,2010
  17. 17. INTERPRETACION
  18. 18. Internacional System for Human Cytogenetics Nomenclature (ISCN), 2009.
  19. 19. IATREIA Vol 24(3) septiembre 2011
  20. 20. Acta méd. costarric. Vol 53 (1), enero-marzo 2011
  21. 21. Acta méd. costarric. Vol 53 (1), enero-marzo 2011
  22. 22. Acta méd. costarric. Vol 53 (1), enero-marzo 2011
  23. 23. LSI BCR/ABL ES Dual Color Translocation Probe hybridized to a nucleus showing one green (native BCR), one large orange (native ABL), one smaller orange (ES) and one fused orange/green (20IGIF) signal pattern.
  24. 24. Sondas teloméricas
  25. 25. Sondas especificas para los cromosomas 13,18,21,X
  26. 26. SONDA DE PINTADO DE CROMOSOMA 1
  27. 27. GRACIAS

×