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《微生物书报讨论》文献报告 自噬增强乙肝病毒DNA复制的研究 主持人:唐梦瑶 报告人:胡晓波 学    号:10210700011 日    期:2011.5.19
文献基本信息
主要内容 结论部分 WOW! 机理探究 WHY 现象描述 HOW 背景介绍 WHAT
主要内容 结论部分 WOW! 机理探究 WHY 现象描述 HOW 背景介绍 WHAT
背景介绍之一 自噬现象概述 ,[object Object]
自噬是维持细胞稳态的一种保守而重要的代谢途径,帮助细胞应对饥饿、营养因子缺乏等不良环境
最近几年,自噬作为一种有效清除细胞内病原体和免疫呈递的途径受到广泛的关注参考文献:Levine B, Deretic V. Unveiling the roles of autophagy in innate and adaptive immunity[J]. Nat Rev Immunol, 2007,7(10):767-777.
背景介绍之一 自噬过程概述 中间体 病原体 溶酶体 自噬溶酶体 自噬体 降解 参考文献:Yang Z, Klionsky D J. Eaten alive: a history of macroautophagy[J]. Nat Cell Biol, 2010,12(9):814-822.
背景介绍之二 乙肝病毒简介 ,[object Object]
HBV病毒基因组共3.2kb长,为部分双链的DNA。病毒基因组共编码四个基因,称为S, C, P和X基因。其中X基因对于病毒的复制和癌症的发生密切相关。
HBV虽然属于DNA病毒,但其复制过程是通过逆转录酶将RNA逆转录为DNA实现。部分双链 DNA 参考文献:Locarnini S. Molecular virology of hepatitis B virus[J]. Semin Liver Dis, 2004,24 Suppl 1:3-10.
主要内容 结论部分 WOW! 机理探究 WHY 现象描述 HOW 背景介绍 WHAT
现象描述之一 HBV促进自噬反应 检测细胞自噬水平 HBV转染至细胞中 构建相应细胞系 ,[object Object]
稳定表达GFP-LC3蛋白(自噬特异性蛋白)
共聚焦显微镜
Western blot,[object Object]
现象描述之二 自噬增强HBV DNA的复制 检测HBV DNA复制情况 抑制细胞自噬水平 HBV转染细胞 ,[object Object]
PI3KC3的siRNA:Vps34 siRNA*PI3KC3:自噬起始过程的关键激酶 Southern blot分析细胞中HBV DNA含量变化
现象描述之二 自噬增强HBV DNA的复制 NC:对照siRNA RC:HBV松弛环状DNA RI:HBV DNA复制中间体 抑制前 HBV DNA 抑制后 HBV DNA 抑制前 HBV DNA 抑制后 HBV DNA 图5 Vps34 siRNA对HBV DNA 复制的影响 图4 3-MA对HBV DNA复制的影响 结论:自噬作用可以显著增强HBV DNA的复制水平。
主要内容 结论部分 WOW! 机理探究 WHY 现象描述 HOW 背景介绍 WHAT
机理探究之一 自噬是否对HBV RNA水平产生影响? 抑制自噬对RNA转录几乎不产生任何影响 C基因转录物 S基因转录物 无差别 图5 3-MA对HBV mRNA水平的影响 抑制自噬对核心RNA无影响,即对包装过程中的RNA几乎无影响 前核心RNA 核心RNA 无差别 无差别 图6 3-MA对HBV 核心RNA水平的影响
机理探究之二 HBV是否通过HBx蛋白增强自噬? 观察细胞自噬和DNA复制水平变化 转染细胞 构建x蛋白突变株 ,[object Object]
HBVWt:正常表达x蛋白的HBV
HAX:HA标记的x蛋白

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