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Analisis de ADN. Aplicacion de la Biologia Molecular en la Justicia Civil y Criminal Dra Adriana Silvia Gotti Bioquimica . Directora del Centro de Estudios Biomoleculares y Genetica Forense CEBYG.Posadas . Misiones LAC _Corrientes
El Paradigma
La prueba de ADN ,[object Object]
Reseña Histórica ,[object Object],[object Object],[object Object]
[object Object],[object Object],[object Object]
[object Object]
Aplicación de los Estudios de ADN en la Justicia Civil y penal. Dra Adriana Silvia Gotti Bioquimica  Especialista en genetica Forense
 
 
Núcleo Citoplasma Membrana Plasmática   La célula
El núcleo   Contiene toda la información genética y regula su expresión
Composición y Estructura del ADN ,[object Object],[object Object],[object Object]
NUCLEÓTIDO ,[object Object]
El “ADN” como  almacén de información La doble Hélice de ADN
Los cromosomas  Pares de bases DNA cromosoma Celula Nucleo Histonas
GENES ,[object Object],[object Object],[object Object]
[object Object],[object Object],[object Object],[object Object],Los genes, unidades de información
 
PROYECTO DEL GENOMA HUMANO ,[object Object],[object Object]
Implicaciones del diagnóstico genético ,[object Object],[object Object],[object Object]
 
Identificación visual
IDENTIFICACION HUMANA Individuos vivos  Cadáveres ,[object Object],[object Object],[object Object],[object Object],[object Object],[object Object],[object Object],[object Object],[object Object],[object Object],[object Object],[object Object],[object Object]
METODOS BIOQUIMICOS Evalúan fenotipo  Evalúan genotipo: ADN ,[object Object],[object Object],[object Object],[object Object],[object Object],[object Object],[object Object]
ADN ,[object Object],[object Object],[object Object]
DRA.  GOTTI ADRIANA SILVIA Nuclear - 2 copias por célula -  Heredado 50 % de cada progenitor  - Único para cada individuo Tipos de ADN en genética forense   Mitocondrial - ~1000 copias/célula -  Herencia materna  -  No es único para cada individuo
DRA.  GOTTI ADRIANA SILVIA Tipos de ADN según su TRANSMICIÓN   1. Nuclear: 50% padre + 50% madre - altísimo poder discriminación  - recombinación 2. Mitocondrial: 100% madre poder discriminación limitado 3. Cromosoma “Y”: 100% padre poder discriminación limitado
DRA.  GOTTI ADRIANA SILVIA POLIMORFISMOS De secuencia: Individuo 1:   ……GTACGGTACGT…… Individuo 2:   ……GTACCGTACGT…… Individuo 1:   ……GTACGGTACGT…… Individuo 2:   ……GTACGTACGT…… De longitud: Individuo 1:   ……(AATG) (AATG) (AATG)…… 3 repeticiones Individuo 2:   ……(AATG) (AATG)…… 2 repeticiones
DRA.  GOTTI ADRIANA SILVIA ADN nuclear 1. Unidades: 3000 millones x 2 23 pares de cromosomas 2. Herencia mixta:  padre y madre 3. Dos copias por célula  (núcleo)
DRA.  GOTTI ADRIANA SILVIA
DRA.  GOTTI ADRIANA SILVIA Longitud de las unidades de repetición STRs Di nucleótidos:  CA Tri nucleótidos:  AAT Tetra nucleótidos:  AGAT Penta nucleótidos:  AATGT
DRA.  GOTTI ADRIANA SILVIA Marcadores forenses Altamente polimórficas Elevado grado de heterocigosidad genética
DRA.  GOTTI ADRIANA SILVIA Vía de Herencia del ADN del cromosoma “Y” (representa el 2% del genoma humano)
DRA.  GOTTI ADRIANA SILVIA PRINCIPALES APLICACIONES DE LOS STRs DEL CROMOSOMA “Y” - Investigación Biológica de la paternidad - Criminalística - Estudios de Identificación Genética - Estudios sobre el origen y evolución de las  poblaciones
DRA.  GOTTI ADRIANA SILVIA ADN mitocondrial 1.  Unidades: 16.569 pb 2.  Herencia materna 3.  de 100 a 10.000 copias  por célula  10 a 100 mitocondrias por célula 10 a 100 copias por mitocondria
DRA.  GOTTI ADRIANA SILVIA Vía de herencia del ADN mt
DRA.  GOTTI ADRIANA SILVIA ADNmt -  Técnicas de PCR y secuenciación automática -  Altamente polimórfico -  Alto número de copias -  Herencia estrictamente materna -  Se conoce con exactitud la secuencia de todos sus nucleótidos  -  Tasa de evolución entre 5 y 10 veces mayor  que un gen nuclear
DRA.  GOTTI ADRIANA SILVIA ORGANIZACIÓN GENÓMICA   Sólo el 10% es ADN  no codificante
DRA.  GOTTI ADRIANA SILVIA MUTACIONES   ADNmt acumula un numero de mutaciones superior al ADN  genómico Normal Sustitución   Deleción Inserción
DRA.  GOTTI ADRIANA SILVIA Sustituciones   Transiciones   Py-Py: C>T T>C Pu-Pu: A>G G>A Transversiones  C>A  T>G  G>C  A>T A>C  G>T  C>G  T>A
DRA.  GOTTI ADRIANA SILVIA HETEROPLASMIA:   coexistencia, debida a mutaciones,  de dos o más poblaciones de ADNmt en un individuo HETEROPLASMIA DE SECUENCIA heteroplasmia  intercelular   heteroplasmia intramitocondrial heteroplasmia  intracelular   HOMOPLASMIA:   misma secuencia en todas las moléculas  de ADNmt
DRA.  GOTTI ADRIANA SILVIA HETEROPLASMIA DE LONGITUD
DRA.  GOTTI ADRIANA SILVIA PREPARACIÓN DE LA MUESTRA EXTRACCIÓN DEL ADN CUANTIFICACIÓN  AMPLIFICACIÓN POR PCR PURIFICACIÓN PCR SECUENCIACIÓN PURIFICACIÓN SECUENCIACIÓN ANÁLISIS DE DATOS ELECTROFORESIS
DRA.  GOTTI ADRIANA SILVIA USO DEL ADNmt EN GENÉTICA FORENSE 1. Identificación de restos antiguos  2. Identificación de restos cadavéricos  (desastres en masa) 3. Identificación de vestigios mínimos - pelos sin bulbo - manchas biológicas mínimas y parcialmente degradadas 4. Estudios de relaciones familiares vía materna
Polimorfismos de Longitud  Alelo 1 Alelo 2 Sitio de Restricción Sitio de Restricción Unidad de Repetición
Tipos de Polimorfismos de Longitud. VNTR Minisatélites Locus Múltiple Locus Específico Microsatélites Locus Específico PCR/PAGE o  automatización Southern Southern PCR /Agarosa
Evolución de los Sistemas de Identificación Molecular ,[object Object],[object Object],[object Object],[object Object],[object Object],[object Object]
1985 Minisatélites  Locus  Múltiple Jeffreys. ,[object Object],[object Object],[object Object]
1987 Minisatélites de  Locus  Específico _NAKAMURA ,[object Object]
1991_Microsatélites o STRs. ,[object Object],[object Object],[object Object],[object Object]
Análisis automatizado de STRs
1989 HLA-Dq   Higuchi. ,[object Object],[object Object],[object Object]
1992_Secuenciación del ADN mt. GINTHER ,[object Object],[object Object]
Análisis de Minisatélites. ,[object Object],[object Object],[object Object],[object Object],[object Object]
Dra .Adriana Silvia Gotti Centro de Estudios Biomoleculares y Genetica Forense.  Posadas . Misiones Argentina Amplificación de DNA  in vitro : PCR (Polymerase Chain Reaction)
Objetivos ,[object Object],[object Object],[object Object],[object Object],[object Object]
PCR     Polymerase Chain Reaction   ,[object Object],[object Object],[object Object]
Polimerasa Chain Reaction: Reacción en Cadena de la Polimerasa   ,[object Object],[object Object],[object Object]
Termociclador ,[object Object],[object Object]
[object Object],[object Object],El proceso de “PCR” incluye 3 pasos básicos que se repiten 25 veces o más:
[object Object],[object Object]
[object Object],[object Object],[object Object],Los pasos 1, 2 y 3 se repiten cuantas veces sea necesario.
 
En la PCR hay una amplificación exponencial
Reactivos necesarios para PCR: ,[object Object],[object Object],[object Object],[object Object],[object Object]
Reactivos necesarios para PCR: ,[object Object],[object Object],[object Object],[object Object]
ADYUVANTES DE LA PCR ,[object Object],[object Object],[object Object]
[object Object],[object Object],Polimerasa
Análisis de la Muestra ,[object Object],[object Object]
Análisis de la Muestra ,[object Object],Ladder: pesos conocidos 1: Fragmento a 1857 pb 2 y 4: Fragmento a 800 pb 3: No hay producto  5: Multiples bandas (primers inespecíficos se pegan a varios sitios)
Análisis de la Muestra ,[object Object],[object Object]
[object Object],[object Object],[object Object],Aplicaciones ,[object Object],[object Object],[object Object],[object Object],[object Object]
Aplicaciones ,[object Object],[object Object],Criminalística
Utilidad del PCR
Ventajas del “PCR” ,[object Object],[object Object],[object Object],[object Object]
Desventajas  del “PCR” ,[object Object],[object Object],[object Object],[object Object]
Materiales Para PCR ,[object Object],[object Object],[object Object],[object Object],[object Object],[object Object],[object Object],[object Object],[object Object],[object Object],[object Object],[object Object],[object Object]
Herencia del DNA mitocondrial ,[object Object]
Procedimiento para extracción del DNA genómico (previamente realizado) ,[object Object],[object Object],[object Object],[object Object],[object Object],[object Object],[object Object],[object Object],[object Object],[object Object]
Diagrama de la extracción del DNA genómico (previamente realizado)
Procedimiento para amplificar el DNA (PCR) ,[object Object],Mix 1 17.3 Mix 2 2.7 Total: 25 ul Buffer 10X 2.5 DNA en estudio 5.0 Taq pol 0.2 Primer L15829. 3’-5’ 1.0 Primer H34. 5’-3’ 1.0 2.5 Mm de dNTPs 1.5 BSA 100X 0.5 MgCl 2  25mM   3.0 Agua estéril (dH 2 O) 10.3 Componente Cantidad (ul)
[object Object],[object Object],[object Object],[object Object],[object Object],[object Object],[object Object]
Secuenciación de DNA ,[object Object],[object Object],[object Object],[object Object]
Método dideoxi de Sanger
Método dideoxi de Sanger (2)
Método dideoxi de Sanger (3)
Método secuenciación automática
Electroferograma de la secuenciación automática
Geles de secuencia Secuencia automática Secuencia Manual
Direcciones de animaciones ,[object Object],[object Object],[object Object],[object Object]
TOMA Y CONSERVACION DE MUESTRAS PARA ANALISIS DE ADN.
Obtención de las Evidencias. ,[object Object],[object Object],[object Object]
Lugar del Hecho = Quirófano !
Conservación de muestras de sangre. ,[object Object],[object Object],[object Object],[object Object]
Otras evidencias
CASO: VIOLACION ,[object Object],[object Object],[object Object]
Prendas  SI NO
Hisopados
IMPORTANTE: En el análisis previo de las evidencias se debe considerar la disponibilidad de muestras para análisis de ADN.
MATERIAL CADAVERICO Los restos humanos como evidencia para el análisis de ADN
Requisitos Para la Conservación de Evidencias.  ,[object Object],[object Object],[object Object],[object Object]
Cadáveres reducidos Tiempo de muerte  aproximado: 1,5 años
Cadáveres Quemados
Cadáveres Saponificados Tiempo de muerte aprox 8 años Tiempo de muerte aprox 1,5 años
Cadáveres en los Primeros Estadíos de Descomposición
Cadáver conservado ,[object Object]
Cadáver Momificado  ,[object Object],[object Object],[object Object]
Tejidos Conservados ,[object Object],[object Object]
Huesos quemados con más de 10 Años Recibidos En proceso
Material de elección en casos de cuerpos muy descompuestos o reducidos
Identificación Molecular de Restos Fragmentados
En ciertos casos el análisis del ADN cadavérico puede ser superfluo ,[object Object],[object Object],[object Object]
En otros puede ser de gran utilidad.
Interpretación de resultados
Violación E S
Violación E S V
E S V Violación
E A S V E B Violación
E A S V E B Violación
E A S V E B Violación
Análisis de una Violación  Evidencia Frac. femenina Evidencia Frac. masculina Víctima Sospechoso 1 Sospechoso 2 Match Match Match
Algunos casos de identificación por ADN
Análisis de ADN en restos humanos provenientes de desastres en masa
1992
 
Toma de muestras del atentado
 
1993
Santo Tomé (1993). ,[object Object],[object Object],[object Object]
Los Y-STRs dieron la primera pista.
El ADNmt permitió confirmar la matrilínea. ,[object Object]
1994
Atentado a la AMIA Vista general
Atentado a la AMIA. Muestras
Atentado a la AMIA. Resultados
Atentado a la AMIA. Resultados
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Atentado a la AMIA. Resultados
1999
Accidente Aéreo de LAPA
1999 ACCIDENTE AEREO
1999 ACCIDENTE AEREO
CRISTÓBAL COLÓN Dra. Adriana Silvia Gotti Dra. Adriana Silvia Gotti 1. Teoría genovesa clásica: -hermanos del mismo padre y madre 2. Teoría genovesa renovada: -hermanos del mismo padre    y diferente madre 3. Teoría mallorquinista -hermanos de la misma madre    y diferente padre CRISTÓBAL COLÓN ? ?
CRISTÓBAL COLÓN Dra. Adriana Silvia Gotti
Carlos de Evreux, Príncipe de Viana Dra. Adriana Silvia Gotti
CRISTÓBAL COLÓN Dra. Adriana Silvia Gotti
Dra. Adriana Silvia Gotti
1506 1509 Dra. Adriana Silvia Gotti
Cuba República Dominicana Dra. Adriana Silvia Gotti
Caribe 1544 Dra. Adriana Silvia Gotti
Dra. Adriana Silvia Gotti
Dra. Adriana Silvia Gotti
Caribe 1544 1795 1898 Dra. Adriana Silvia Gotti
Sevilla 1898 Dra. Adriana Silvia Gotti
Dra. Adriana Silvia Gotti
Dra. Adriana Silvia Gotti
1. Teoría genovesa clásica: -mismo padre y madre 2. Teoría genovesa renovada: -  mismo padre y diferente madre 3. Teoría mallorquinista -  misma madre y diferente padre Dra. Adriana Silvia Gotti CRISTÓBAL COLÓN
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