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    Clase Adn Dra Gotti Clase Adn Dra Gotti Presentation Transcript

    • Analisis de ADN. Aplicacion de la Biologia Molecular en la Justicia Civil y Criminal Dra Adriana Silvia Gotti Bioquimica . Directora del Centro de Estudios Biomoleculares y Genetica Forense CEBYG.Posadas . Misiones LAC _Corrientes
    • El Paradigma
    • La prueba de ADN
      • A partir del descubrimiento de zonas variables en el ADN , y la posibilidad de emplearlas para identificación humana a mediados de la década del 80 , la certeza en los estudios de paternidad y de identificación criminal se incremento a más del 99,99% .
    • Reseña Histórica
      • Abril de 1985 _se resuelve el primer caso judicial mediante el estudio de Huellas Digitales genéticas o Fingerprinting .Gran Bretaña.
      • Junio de 1985 una corte civil Inglesa acepta la evidencia de ADN en un caso de Paternidad discutida.
      • Octubre de 1986 se produce el debut de esta prueba en la identificación criminal comprobándose la inocencia del principal sospechoso en un caso de violación y muerte.
      • 1987 _Las pruebas de ADN son admitidas como evidencias en las Cortes criminales de Gran Bretaña y Estados Unidos.
      • 1988 se desarrollan amplificaciones de ADN por PCR.(polymerase Chain Reaction.(Biología Molecular)
      • 1989 _a raiz de dudosos resultados en un caso criminal realizados por Lifecodes Corp se discute en EEUU la validez Científica de la prueba de ADN.
      • 1990 The U. S. Congress Office of Technoly Assessment concluye que la identificación de individuos basada en la prueba de ADN es Científicamente válida, siempre que se disponga de la certeza metodológica de su realización
    • Aplicación de los Estudios de ADN en la Justicia Civil y penal. Dra Adriana Silvia Gotti Bioquimica Especialista en genetica Forense
    •  
    •  
    • Núcleo Citoplasma Membrana Plasmática La célula
    • El núcleo Contiene toda la información genética y regula su expresión
    • Composición y Estructura del ADN
      • Desoxirribosa (azúcar de tipo pentosa)
      • Un grupo Fosfato
      • Cuatro tipo de Bases Nitrogenadas (Citosina,Timina,Adenina y Guanina)
    • NUCLEÓTIDO
      • Cada Subunidad de ADN formada por una Desoxirribosa, un grupo fosfato y una base nitrogenada se denomina NUCLEÓTIDO
    • El “ADN” como almacén de información La doble Hélice de ADN
    • Los cromosomas Pares de bases DNA cromosoma Celula Nucleo Histonas
    • GENES
      • Unidad Básica de la HERENCIA
      • Están contenidos en los CROMOSOMAS
      • Formados por ADN
      • La secuencia del ADN está estructurada en codones de 3 nucleótidos. Se pueden distinguir:
      • Genes o secuencias codificantes, que contienen la infomación para sintetizar proteínas.
      • Secuencias no codificantes, que incluyen secuencias reguladoras de la expresión (promotores, intrones, …).
      • Genoma es el conjunto de todos los genes de un organismo.
      Los genes, unidades de información
    •  
    • PROYECTO DEL GENOMA HUMANO
      • “ Manual de instrucciones de los seres humanos”
      • 3 mil millones de bases nitrogenadas
    • Implicaciones del diagnóstico genético
      • Identificar portadores de enfermedades hereditarias y tumores malignos.
      • Aplicaciones en la medicina forense
      • Investigaciones sobre paternidad
    •  
    • Identificación visual
    • IDENTIFICACION HUMANA Individuos vivos Cadáveres
      • Exámenes generales: datos fisonómicos, sexo, peso, talla, cabello, color de ojos y piel, marcas.
      • Registro de voz.
      • Trazado caligráfico.
      • Huellas dactilares.
      • Huellas genéticas.
      • Métodos bioquímicos
      • Diagnóstico de especie.
      • Datación de los restos.
      • Exámenes generales.
      • Elementos extrínsecos.
      • Caracteres patológicos, naturales o traumáticos.
      • Identidad radiográfica y dental.
      • Métodos bioquímicos.
    • METODOS BIOQUIMICOS Evalúan fenotipo Evalúan genotipo: ADN
      • Grupos sanguíneos: ABO, RH, MNS, Duffy, Lewis.
      • Proteínas plasmáticas: haptoglobina,  1-antitripsina, transferrina.
      • Enzimas eritrocitarias: fosfatasa ácida eritrocitaria, adenilato kinasa, PGM, ADA.
      • HLA: Antígenos de histocompatibilidad.
      • Minisatélites: sondeos de locus múltiple y locus único.
      • Microsatélites: métodos de PCR.
      • Variantes de secuencia: HLA-DQ  Polymarker, genoma mitocondrial.
    • ADN
      • Existen regiones codificantes, que contienen la información para la síntesis proteica, y no codificantes.
      • Dentro de las no codificantes existen regiones polimórficas.
      • Existen alrededor de 3 x 10 6 sitios polimóficos en nuestro genoma.
    • DRA. GOTTI ADRIANA SILVIA Nuclear - 2 copias por célula - Heredado 50 % de cada progenitor - Único para cada individuo Tipos de ADN en genética forense Mitocondrial - ~1000 copias/célula - Herencia materna - No es único para cada individuo
    • DRA. GOTTI ADRIANA SILVIA Tipos de ADN según su TRANSMICIÓN 1. Nuclear: 50% padre + 50% madre - altísimo poder discriminación - recombinación 2. Mitocondrial: 100% madre poder discriminación limitado 3. Cromosoma “Y”: 100% padre poder discriminación limitado
    • DRA. GOTTI ADRIANA SILVIA POLIMORFISMOS De secuencia: Individuo 1: ……GTACGGTACGT…… Individuo 2: ……GTACCGTACGT…… Individuo 1: ……GTACGGTACGT…… Individuo 2: ……GTACGTACGT…… De longitud: Individuo 1: ……(AATG) (AATG) (AATG)…… 3 repeticiones Individuo 2: ……(AATG) (AATG)…… 2 repeticiones
    • DRA. GOTTI ADRIANA SILVIA ADN nuclear 1. Unidades: 3000 millones x 2 23 pares de cromosomas 2. Herencia mixta: padre y madre 3. Dos copias por célula (núcleo)
    • DRA. GOTTI ADRIANA SILVIA
    • DRA. GOTTI ADRIANA SILVIA Longitud de las unidades de repetición STRs Di nucleótidos: CA Tri nucleótidos: AAT Tetra nucleótidos: AGAT Penta nucleótidos: AATGT
    • DRA. GOTTI ADRIANA SILVIA Marcadores forenses Altamente polimórficas Elevado grado de heterocigosidad genética
    • DRA. GOTTI ADRIANA SILVIA Vía de Herencia del ADN del cromosoma “Y” (representa el 2% del genoma humano)
    • DRA. GOTTI ADRIANA SILVIA PRINCIPALES APLICACIONES DE LOS STRs DEL CROMOSOMA “Y” - Investigación Biológica de la paternidad - Criminalística - Estudios de Identificación Genética - Estudios sobre el origen y evolución de las poblaciones
    • DRA. GOTTI ADRIANA SILVIA ADN mitocondrial 1. Unidades: 16.569 pb 2. Herencia materna 3. de 100 a 10.000 copias por célula 10 a 100 mitocondrias por célula 10 a 100 copias por mitocondria
    • DRA. GOTTI ADRIANA SILVIA Vía de herencia del ADN mt
    • DRA. GOTTI ADRIANA SILVIA ADNmt - Técnicas de PCR y secuenciación automática - Altamente polimórfico - Alto número de copias - Herencia estrictamente materna - Se conoce con exactitud la secuencia de todos sus nucleótidos - Tasa de evolución entre 5 y 10 veces mayor que un gen nuclear
    • DRA. GOTTI ADRIANA SILVIA ORGANIZACIÓN GENÓMICA Sólo el 10% es ADN no codificante
    • DRA. GOTTI ADRIANA SILVIA MUTACIONES ADNmt acumula un numero de mutaciones superior al ADN genómico Normal Sustitución Deleción Inserción
    • DRA. GOTTI ADRIANA SILVIA Sustituciones Transiciones Py-Py: C>T T>C Pu-Pu: A>G G>A Transversiones C>A T>G G>C A>T A>C G>T C>G T>A
    • DRA. GOTTI ADRIANA SILVIA HETEROPLASMIA: coexistencia, debida a mutaciones, de dos o más poblaciones de ADNmt en un individuo HETEROPLASMIA DE SECUENCIA heteroplasmia intercelular heteroplasmia intramitocondrial heteroplasmia intracelular HOMOPLASMIA: misma secuencia en todas las moléculas de ADNmt
    • DRA. GOTTI ADRIANA SILVIA HETEROPLASMIA DE LONGITUD
    • DRA. GOTTI ADRIANA SILVIA PREPARACIÓN DE LA MUESTRA EXTRACCIÓN DEL ADN CUANTIFICACIÓN AMPLIFICACIÓN POR PCR PURIFICACIÓN PCR SECUENCIACIÓN PURIFICACIÓN SECUENCIACIÓN ANÁLISIS DE DATOS ELECTROFORESIS
    • DRA. GOTTI ADRIANA SILVIA USO DEL ADNmt EN GENÉTICA FORENSE 1. Identificación de restos antiguos 2. Identificación de restos cadavéricos (desastres en masa) 3. Identificación de vestigios mínimos - pelos sin bulbo - manchas biológicas mínimas y parcialmente degradadas 4. Estudios de relaciones familiares vía materna
    • Polimorfismos de Longitud Alelo 1 Alelo 2 Sitio de Restricción Sitio de Restricción Unidad de Repetición
    • Tipos de Polimorfismos de Longitud. VNTR Minisatélites Locus Múltiple Locus Específico Microsatélites Locus Específico PCR/PAGE o automatización Southern Southern PCR /Agarosa
    • Evolución de los Sistemas de Identificación Molecular
      • 1985 Minisatélites Locus Múltiple Jeffreys.
      • 1987 Minisatélites Locus Específico Nakamura.
      • 1989 HLA-Dq  Higuchi.
      • 1991 Microsatélites (STRs) Edwards.
      • 1992 Secuenciación de mtDNA HVRI y II Ginther.
      • 1993 STRs del Cromosoma Y Roewer.
    • 1985 Minisatélites Locus Múltiple Jeffreys.
      • Alto Poder Discriminativo.
      • Patrones fenotípicos.
      • Baja reproducibilidad entre laboratorios.
    • 1987 Minisatélites de Locus Específico _NAKAMURA
      • Constituyen los marcadores más eficientes en estudios en los que la calidad y cantidad de ADN no son restrictivos.
    • 1991_Microsatélites o STRs.
      • Herramienta indispensable para la investigación forense.
      • Gran número de STRs disponibles.
      • Alta sensibilidad.
      • Evaluación manual o automatizada.
    • Análisis automatizado de STRs
    • 1989 HLA-Dq  Higuchi.
      • Poder Discriminativo muy limitado (equivalente a un grupo sanguíneo).
      • Muy sensible.
      • Utilidad actual escasa o nula.
    • 1992_Secuenciación del ADN mt. GINTHER
      • Permite el rastreo de la línea materna.
      • Gran sensibilidad debida al alto número de copias, reducido tamaño y estructura circular.
    • Análisis de Minisatélites.
      • Transferencia de Southern.
      • Gran capacidad discriminativa.
      • Requiere integridad y alta concentración de ADN.
      • Optimo para estudios de paternidad.
      • Económica.
    • Dra .Adriana Silvia Gotti Centro de Estudios Biomoleculares y Genetica Forense. Posadas . Misiones Argentina Amplificación de DNA in vitro : PCR (Polymerase Chain Reaction)
    • Objetivos
      • Conocer:
      • Los fundamentos de la técnica de amplificación de DNA por PCR
      • Usos y aplicaciones de la PCR
      • Ventajas y desventajas de la PCR
      • Métodos de secuenciación de DNA
    • PCR Polymerase Chain Reaction
      • Es la amplificación de DNA in vitro por medio de la polimerización en cadena de DNA utilizando un termociclador.
      • El propósito del PCR es hacer muchas copias de un fragmento de DNA.
      • Se realiza la amplificación de un segmento específico de DNA, teniendo poco material disponible.
    • Polimerasa Chain Reaction: Reacción en Cadena de la Polimerasa
      • Fue diseñada por el Dr. Kary Mullis en 1987.
      • Ganó el premio Nóbel de Química en 1993 por su invento.
      • Utilizo la reacción PCR para amplificación del gen de  -hemoglobina humana, y el diagnóstico prenatal de anemia falsiforme.
    • Termociclador
      • La PCR se realiza en un “ Thermo Cycler ” Termociclador.
      • Es una máquina que calienta y enfría la reacción en periodos cortos de tiempo.
      • 1. Desnaturalización : Consiste en separar la doble hebra de DNA y convertirla en hebra sencilla.
      • -Típicamente se usa una temperatura de 95 ˚C - 97˚C, por 15 a 40 segundos –el tiempo depende del tamaño del genoma-
      El proceso de “PCR” incluye 3 pasos básicos que se repiten 25 veces o más:
      • 2. Apareamiento o “anneling”:
      • Los cebadores “primers” previamente diseñados, reaccionan con la hebra sencilla de DNA y se pegan en lugares específicos por complementariedad de bases. Para esto, se baja la temperatura -ej: 55˚C por 30 segundos-. La temperatura y el tiempo puede variar entre cebadores según sea el caso.
        • 3. Polimerización o Extensión.
        • Una Polimerasa de DNA extiende los “primers”, en el espacio comprendido entre ambos “primers”, y coloca dinucleotidos trifosfatados (dNTP’s) de 5’a 3’ leyendo el DNA de 3’a 5’. De estas forma sintetiza la secuencia complementaria de las hebras de DNA moldee
        • Se efectúa a 70 ˚C por 1½ minutos (puede variar según sea necesario)
      Los pasos 1, 2 y 3 se repiten cuantas veces sea necesario.
    •  
    • En la PCR hay una amplificación exponencial
    • Reactivos necesarios para PCR:
      • Amortiguador (Buffer): 50mM KCl, 10mM Tris. Cl (pH 8.3 a temperatura ambiente) y 1.5 mM MgCl2.
      • MgCl2 : Puede estar en forma de MgCl2, MgSO4. Se usa 25mM -Es un cofactor para la función de la polimerasa-
      • dNTP’s (Dinucleotidos trifosfatados): dATP, dGTP, dCTP, dTTP.
      • -La concentración de dNTPS, es proporcional al tamaño del fragmento que se desea amplificar. Ej: Si vamos a amplificar un fragmento de 500pb vs uno de 5500 pb, necesitamos más concentración de dNTPS para el de 5500pb.
      • -Generalmente, se usa una concentración de 200  M de cada uno.
    • Reactivos necesarios para PCR:
      • Cebadores “primers”: Son secuencias cortas de nucleótidos 20-24 nucleótidos de longitud, complementarias a una región del DNA que se quiere amplificar. -Se usa a concentración de 1  M-
      • DNA molde: El DNA a amplificar puede tener desde 50 a 2,000 nucleótidos de longitud.
      • El mínimo va de 10-100 ng. y el máximo entre 400-500 ng.
      • Polimerasa: Generalmente se usa 2 unidades por reacción.
    • ADYUVANTES DE LA PCR
      • Son elementos que mejoran el rendimiento y la especificidad de la PCR.
      • Se usa DMSO, glicerol o BSA.
      • El adyuvante más utilizado es el BSA . A concentraciones por encima de 0.8 µg/µl el BSA incrementa la eficiencia de la PCR y actúa como una proteína captadora de iones que pueden ser inhibidores de la Taq polimerasa
      • En un principio, la polimerasa de DNA que se utilizaba era de la bacteria E. coli , pero esta es sensible a alta temperatura, por lo que había que añadir enzima fresca al comenzar el tercer ciclo.
      • Se reemplazo la enzima por la de la bacteria “ Thermus aquaticus ” conocida como Taq pol
      Polimerasa
    • Análisis de la Muestra
      • La detección del producto de la PCR se realiza normalmente mediante corrido electroforético.
      • Dependiendo del tamaño de la amplificación y la resolución que deseemos utilizaremos diferentes medios (agarosa, poliacrilamida) a distintas concentraciones.
    • Análisis de la Muestra
      • La posterior visualización se puede realizar con bromuro de etidio (lámpara de luz UV), tinción de plata, fluorescencia, radioactividad
      Ladder: pesos conocidos 1: Fragmento a 1857 pb 2 y 4: Fragmento a 800 pb 3: No hay producto 5: Multiples bandas (primers inespecíficos se pegan a varios sitios)
    • Análisis de la Muestra
      • En algunos casos, los productos amplificados poseen secuencias que son reconocidas por endonucleasas
      • Hibridación, Southern Blot
      • Se puede amplificar directamente de:
        • ADN genómico
        • cDNA (RT-PCR)
      Aplicaciones
        • Detección de agentes infecciosos como: hepatitis B y C, papiloma virus, HIV, entre otros
        • Análisis de DNA de cualquier organismo vivo o muerto, análisis de fósiles
        • Mutagénesis dirigida (cambios en la información contenida a través de “primers” con mutaciones)
        • Investigación forense
        • Pruebas de paternidad
    • Aplicaciones
      • Ejemplo de un caso de criminalística resuelto utilizando electroforesis en gel vertical de acrilamida.
      • Si se observan los patrones bandas podrá comprobarse como los perfiles obtenidos en las manchas de sangre encontradas en el sombrero (Hat) y pantalón (Jeans) del sospechoso (S) coinciden con el perfil genético de la víctima (V)
      Criminalística
    • Utilidad del PCR
    • Ventajas del “PCR”
      • A partir de una muestra pequeña de ADN se puede obtener una cantidad considerable para el estudio que se vaya a realizar.
      • El producto se puede utilizar para clonar, secuenciar y análisis.
      • Se puede amplificar ADN de cualquier organismo vivo o muerto.
      • Sus aplicaciones son múltiples: medicina forense, diagnósticos, análisis prenatales, etc.
    • Desventajas del “PCR”
      • Se puede reproducir solamente partes del genoma en donde se conoce por lo menos una mínima secuencia de 20 – 40 pb.
      • Se necesitan “ primers ” específicos que sean complementarios al fragmento que se desea sintetizar.
      • La polimerización puede tener errores al sintetizar el ADN
      • Puede contaminarse con otro ADN (puede ser del mismo investigador o de cualquier otro)
    • Materiales Para PCR
      • Termociclador “Thermo cycler”
      • Microcentrífuga
      • Micropipetas de 2, 20 y 200 ul
      • Microtubos para “PCR”, estériles
      • Puntas estériles
      • Agua destilada, desionizada y estéril
      • ADN molde (ADN en estudio)
      • Primer Forward y Reverse
      • dNTP’s ( dATP, dTTP, dCTP, dGTP de [25 μ M] c/u)
      • 10X buffer para PCR ( Solución amortiguadora para “PCR”)
      • MgCl 2 (25 mM)
      • BSA
      • Polimerasa Taq
    • Herencia del DNA mitocondrial
      • Amplificaremos una region hipervariable. Genoma de 16571 pares de bases: Hebra pesada (H), Hebra liviana (L). Primer Directo H34, primer reverso L15829
    • Procedimiento para extracción del DNA genómico (previamente realizado)
      • Se realizó un frotis bucal
      • El contenido del hisopo “swab” se resuspende en 1000 ul de NaCl 0.9%
      • Centrifugar por 5 minutos a 7K
      • Descarta sobrenadante
      • Resuspender el precipitado “pellet” en 500ul de chelex al 10%
      • Incubar a 100˚C por 20 minutos
      • Centrifugar por 5 minutos a 7K
      • Tomar el sobrenadante ( DNA en solución)
      • Dejar la muestra a -20 grados hasta cuando se va a trabajar con ella
      • Nota: El chelex actúa como agente desestabilizador de membranas y quelante.
    • Diagrama de la extracción del DNA genómico (previamente realizado)
    • Procedimiento para amplificar el DNA (PCR)
      • Añada los siguientes reactivos en el orden indicado:
      Mix 1 17.3 Mix 2 2.7 Total: 25 ul Buffer 10X 2.5 DNA en estudio 5.0 Taq pol 0.2 Primer L15829. 3’-5’ 1.0 Primer H34. 5’-3’ 1.0 2.5 Mm de dNTPs 1.5 BSA 100X 0.5 MgCl 2 25mM 3.0 Agua estéril (dH 2 O) 10.3 Componente Cantidad (ul)
      • Condiciones para reacción en el termociclador:
      • 1 ciclo : 94 °C por 2.5 minutos.
      • 32 ciclos: 94 °C por 30 segundos
      • 54 °C por 1 minutos
      • 72 °C por 70 segundos
      • 1 ciclo: 72 °C por 10 minutos
      • Lleve a reaccionar en el termociclador.
    • Secuenciación de DNA
      • Método enzimático de terminación de cadena (método dideoxi de Sanger)
      • Polimerización interrumpida de ADN
      • Se lleva a cado polimerización de ADN en presencia de derivados dideoxi que detienen la polimerización en diferente momento, obteniéndose fragmentos de diferente tamaño.
      • Se examinan en electroforesis, se “lee” secuencia directamente del gel
    • Método dideoxi de Sanger
    • Método dideoxi de Sanger (2)
    • Método dideoxi de Sanger (3)
    • Método secuenciación automática
    • Electroferograma de la secuenciación automática
    • Geles de secuencia Secuencia automática Secuencia Manual
    • Direcciones de animaciones
      • Dirección PCR
      • http://www.sumanasinc.com/webcontent/anisamples/molecularbiology/pcr.html
      • Dirección de secuenciación
      • http:// smcg.cifn.unam.mx / enp - unam /03- EstructuraDelGenoma /animaciones/ secuencia.swf
    • TOMA Y CONSERVACION DE MUESTRAS PARA ANALISIS DE ADN.
    • Obtención de las Evidencias.
      • Constituye el punto crítico para la resolución de una causa judicial.
      • Cada Servicio de Investigación Forense deberá establecer claros protocolos para la manipulación, transporte y conservación de las evidencias.
      • Cualquier manipulación inadecuada permitirá a la defensa invalidar los resultados del análisis.
    • Lugar del Hecho = Quirófano !
    • Conservación de muestras de sangre.
      • Soportes adsorbentes.
      • Conservación a temperatura ambiente.
      • Largo tiempo de conservación.
      • Permite generar un banco de muestras.
    • Otras evidencias
    • CASO: VIOLACION
      • Sangre de sospechoso/ s.
      • Evidencias: hisopados, prendas, pelos, uñas, etc.
      • Sangre de la víctima.
    • Prendas SI NO
    • Hisopados
    • IMPORTANTE: En el análisis previo de las evidencias se debe considerar la disponibilidad de muestras para análisis de ADN.
    • MATERIAL CADAVERICO Los restos humanos como evidencia para el análisis de ADN
    • Requisitos Para la Conservación de Evidencias.
      • Material cadavérico fresco: congelado -20C.
      • Material cadavérico descompuesto: en mezcla de sales (hasta 2 meses), congelado si el periodo es mayor
      • Material Cadavérico esqueletizado: conservar a temperatura ambiente, en sobres limpios, luego de lavados.
      • Se debe evitar en todos los casos el empleo de fijadores con formol.
    • Cadáveres reducidos Tiempo de muerte aproximado: 1,5 años
    • Cadáveres Quemados
    • Cadáveres Saponificados Tiempo de muerte aprox 8 años Tiempo de muerte aprox 1,5 años
    • Cadáveres en los Primeros Estadíos de Descomposición
    • Cadáver conservado
      • Conservado desde su muerte en cámara fría (8 meses).
    • Cadáver Momificado
      • Tiempo de muerte aprox. 16 años.
      • Inhumado en nicho.
      • Proceso de momificación espontáneo.
    • Tejidos Conservados
      • Ciertos tejidos se conservan debido a condiciones ambientales durante periodos prolongados.
      • Material muscular con más de 10 meses entre escombros de una explosión.
    • Huesos quemados con más de 10 Años Recibidos En proceso
    • Material de elección en casos de cuerpos muy descompuestos o reducidos
    • Identificación Molecular de Restos Fragmentados
    • En ciertos casos el análisis del ADN cadavérico puede ser superfluo
      • Si la persona es reconocible.
      • Si se dispone de identificación adecuada (huellas dactilares, etc.).
      • Si no hay rastros de dudosa procedencia.
    • En otros puede ser de gran utilidad.
    • Interpretación de resultados
    • Violación E S
    • Violación E S V
    • E S V Violación
    • E A S V E B Violación
    • E A S V E B Violación
    • E A S V E B Violación
    • Análisis de una Violación Evidencia Frac. femenina Evidencia Frac. masculina Víctima Sospechoso 1 Sospechoso 2 Match Match Match
    • Algunos casos de identificación por ADN
    • Análisis de ADN en restos humanos provenientes de desastres en masa
    • 1992
    •  
    • Toma de muestras del atentado
    •  
    • 1993
    • Santo Tomé (1993).
      • Análisis efectuado en 1995.
      • Restos óseos y dentales quemados.
      • Identificación por comparación con un grupo familiar.
    • Los Y-STRs dieron la primera pista.
    • El ADNmt permitió confirmar la matrilínea.
      • La secuenciación de las HVR I y II permitió correlacionar a la madre con los supuestos restos de su hijo.
    • 1994
    • Atentado a la AMIA Vista general
    • Atentado a la AMIA. Muestras
    • Atentado a la AMIA. Resultados
    • Atentado a la AMIA. Resultados
    • Atentado a la AMIA. Resultados
    • Atentado a la AMIA. Resultados
    • 1999
    • Accidente Aéreo de LAPA
    • 1999 ACCIDENTE AEREO
    • 1999 ACCIDENTE AEREO
    • CRISTÓBAL COLÓN Dra. Adriana Silvia Gotti Dra. Adriana Silvia Gotti 1. Teoría genovesa clásica: -hermanos del mismo padre y madre 2. Teoría genovesa renovada: -hermanos del mismo padre y diferente madre 3. Teoría mallorquinista -hermanos de la misma madre y diferente padre CRISTÓBAL COLÓN ? ?
    • CRISTÓBAL COLÓN Dra. Adriana Silvia Gotti
    • Carlos de Evreux, Príncipe de Viana Dra. Adriana Silvia Gotti
    • CRISTÓBAL COLÓN Dra. Adriana Silvia Gotti
    • Dra. Adriana Silvia Gotti
    • 1506 1509 Dra. Adriana Silvia Gotti
    • Cuba República Dominicana Dra. Adriana Silvia Gotti
    • Caribe 1544 Dra. Adriana Silvia Gotti
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    • Caribe 1544 1795 1898 Dra. Adriana Silvia Gotti
    • Sevilla 1898 Dra. Adriana Silvia Gotti
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    • 1. Teoría genovesa clásica: -mismo padre y madre 2. Teoría genovesa renovada: - mismo padre y diferente madre 3. Teoría mallorquinista - misma madre y diferente padre Dra. Adriana Silvia Gotti CRISTÓBAL COLÓN
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