4. Basic protein responsible in the formation of the chromatin with the DNA Involved in removing acetyl groups from lysine residues on histones. Set of changes in the DNA molecule leading to alterations in the replication and transcription Group of diseases characterized by uncontrolled cell division leading to growth of abnormal tissue.
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8. Células cancerígenas 1 x 10 a la 6 2.Se lavan con PBS y lisan con una sln buffer (Tris, KCl… e inhibidores de proteasas) 3. Se centrifugan a 600 rpm/ 5 min a 4ºC 4. el aglomerulado se resuspende en una solucion TE 5. Se centrifugans a 600 rpm/5 min a 4ºC 6.El aglomerulado se resuspendio en una solucion 0.2 M H2S04, seguidas por la incubacion en hielo por una hora, haciendo vortex cada 15 min por 10s . 7. Centrifugar a 10.000 rpm/ 10 min a 4ºC 8.El sobrenadante se incuba con acetona fría por almenos 1 hora. 9. Las muestras fueron centrifugadas a 10.000 rpm/ 10 min a 4ºC 10. Los granulos se secan y se resuspenden en agua destilada.
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13. Figura 1. El tubacin produce daño en la tubulina, pero no en las histonas en células HFS.
14. Figura 2. El tubacin produce daño en la tubulina, pero NO en las histonas en células LNCaP
15. Figura 3. Efecto de shRNA en diferentes dominios sobre la expresión de histonas
16. Figura 4. Degradación de PARP en células LNCaP. 4A. Con tubacin, SAHA o ambos. 4B. Con tubacin, etopocido o ambos.
17. Figura 5. Acumulación de H2AX y pChk2, como evidencia de la degradación de HDAC 6, mejorada por agentes químicos.
18. Figura 6. Aparición de DDIT3, podría contribuir a mejorar el efecto quimiosensibilizante de la célula LNCaP.
19. Ropero S, Esteller M (2007 Mol Oncol The role of histone deacetylases (HDACs) in human cancer. yes Martínez-López W, Folle GA, Obe G, Jeppesen P (2001) Chromosome regions enriched in hyperacetylated histone H4 are preferred sites for endonuclease- and radiationinduced breakpoints. yes Munshi A, et al. (2005) Histone deacetylase inhibitors radiosensitize human melanoma cells by suppressing DNA repair activity. yes Kawaguchi Y, et al. (2003) The deacetylase HDAC6 regulates aggresome formation and cell viability in response to misfolded protein stress. Yes
PAGE poliacrilamida H2AX: gen de la histona 2ª ChK2: punto de control 2 quinasa DDIT3: transcripción inducible del DNA tipo 3
PBS:Tampón fosfato salino buffer, isotonico no lisa la cell
RNAsa exonucleasa que me degrada la hebra de RNA Citometria de flujo: una técnica de análisis celular que implica medir las características de dispersión de luz y fluorescencia que poseen las células conforme se las hace pasar a través de un rayo de luz.
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