Extracción de un preparado enzimático crudo amilásico

3,669 views

Published on

Published in: Technology
0 Comments
2 Likes
Statistics
Notes
  • Be the first to comment

No Downloads
Views
Total views
3,669
On SlideShare
0
From Embeds
0
Number of Embeds
4
Actions
Shares
0
Downloads
86
Comments
0
Likes
2
Embeds 0
No embeds

No notes for slide

Extracción de un preparado enzimático crudo amilásico

  1. 1. BIOTECNOLOGÍA DE LOS PRODUCTOS AGROINDUSTRIALES“EXTRACCIÓN DE UN PREPARADO ENZIMÁTICO CRUDO TRUJILLO-2012 (AMILÁSICO)” PROFESOR: ING. SÁNCHEZ GONZALES, JESÚS ALEXANDER ALUMNA: MARTÍNEZ SALDAÑA, YURICO ELIZABETH CICLO: IX HORARIO: JUEVES 11-1PM TRUJILLO-2012
  2. 2. “EXTRACCIÓN DE UN PREPARADO ENZIMÁTICO CRUDO (AMILÁSICO)”LABORATORIO N°05 EXTRACCIÓN DE UN PREPARADO ENZIMÁTICO CRUDO (AMILÁSICO)”I. INTRODUCCIÓNEs muy relevante tener conocimientos de las propiedades de productos enzimáticos para mejorar laselección de las propiedades de los productos. Se debe lograr un adecuado control en susaplicaciones tecnológicas, así como para facilitar el diseño de un apropiado proceso de modo quepueda aplicarse a los al campo de ingeniería agroindustrial.Las enzimas que catalizan la hidrólisis de los enlaces peptídicos de las proteínas son las Proteasas,que están presentes en todos los organismos vivos, las cuales se agrupan según los residuos deaminoácidos del centro activo y los mecanismos de acción en cinco grupos: serino, cisteíno,aspártico, metalo proteasas y peptidasas de mecanismo catalítico desconocido. La Papaína es unode los miembros que pertenecen a las familias de cisteínopeptidasas , las cuales son las másconocidas.Dichas biomoléculas se han utilizado tradicionalmente como ablandadoras de carnes. Además, seutilizan como complemento alimenticio.Se ha descrito que muestran varias accionesfarmacológicas: aumentan la absorción de otros medicamentos, se han utilizado en tratamientos dedesórdenes digestivos, en enfermedades virales y en la formulación de vacunas. Tienenpotencialidades como antiedematosas, antiinflamatorias, antitrombóticas y fibrinolíticas. Sedemostró recientemente, la posible actividad antitumoral de cisteíno-proteasas como la bromelina.Sin embargo, el número de proteasas vegetales que se han aislado y caracterizado es aún muybajo y existen muchas fuentes naturales por explorar, se han estudiado menos del 1 % de lasespecies vegetales conocidas, de ahí el interés en la búsqueda de nuevas fuentes naturales deobtención de proteasas vegetales.II. OBJETIVOS Identificar cualitativamente del Preparado Enzimático Crudo, la actividad enzimática de la amilasaIII. FUNDAMENTO TEÓRICOMuchas investigaciones encaminadas a explicar los mecanismos de activación de las cisteínoproteasas in vivo han demostrado claramente que la activación de estas enzimas depende del pH.Los autores sugieren un predominio de moléculas de enzima activa a pH ácido y está claro que las 1
  3. 3. “EXTRACCIÓN DE UN PREPARADO ENZIMÁTICO CRUDO (AMILÁSICO)”variaciones de pH neutro a pH ácido en las vacuolas provocan cambios en la conformación nativade la enzima inactiva, lo que permite el procesamiento y plegamiento de la enzima activa.Pocas enzimas intracelulares son producidas a gran escala y las ventas de estas enzimasrepresentan solo un pequeño porcentaje del total de ventas. Sin embargo, la producción deenzimas intracelulares es de gran interés por varias razones. Con los avances en las técnicas deinmovilización, el uso de enzimas y células inmovilizadas está en aumento. Por ejemplo, se hanestablecido procesos comerciales para la producción de jarabes de fructosa usando glucosaisomerasa.ENZIMASSon proteínas especializadas en la función catalítica y las sustancias sobre las cuales actúan sedenomina sustratos.Lo que distingue a las enzimas de las demás proteínas es precisamente que,una vez producido el reconocimiento molecular del sustrato, se realiza la transformación de lasustancia reconocida, como consecuencia de diferentes interacciones entre la proteína enzimática ysu sustrato este experimenta un reordenamiento de sus elementos constituyentes debido a laruptura y formación de algunos enlaces químicos. La que resulta de la acción de la enzima sobre elsustrato recibe el nombre de producto.La existencia del complejo enzima-sustrato y la característica de que la mayoría de los sustratospresentan un tamaño varias veces menor que la estructura de la enzima, implica que la enzima soloentra en contacto con el sustrato en una pequeña zona específica de su voluminosa estructura.Las proteínas enzimáticas presentan dos regiones o sitios importantes, uno de ellos reconoce y ligaal sustrato (sitio de reconocimiento) y el otro cataliza la reacción (sitio catalítico) toda vez que elsustrato se ha unido. Estos dos sitios están adyacentes uno al otro en la forma activa de la enzimay en ocasiones, el sitio catalítico es parte del de reconocimiento, estas dos regiones en conjuntoreciben el nombre de centro activo. Su función es de ser “Catalizador Óptimo”.Las enzimas poseen dos propiedades fundamentales, derivándose estas de las características delcentro activo: Gran eficiencia catalítica. Elevada especificidad. Siendo la Elevada Especificidad, la que sirve de fundamento para establecer la clasificación y nomenclatura de las enzimas. 2
  4. 4. “EXTRACCIÓN DE UN PREPARADO ENZIMÁTICO CRUDO (AMILÁSICO)”Se han establecido 6 grupos principales: Oxidoreductasas: Enzimas que catalizan reacciones de oxidoreducción. Transferasas: Catalizan la transferencia de un grupo químico entre un donante y un aceptor, se excluyen aquellas que transfieren electrones o sus equivalentes, pues pertenecen a la clase anterior y aquellas en que el aceptor del grupo es el agua y pertenece a la clase siguiente. Hidrolasas: Catalizan la ruptura de enlaces químicos con la participación de las moléculas de agua. Liasas: Catalizan reacciones en las cuales se produce la adición o sustracción de grupos químicos a dobles enlaces. Isomerasas: Catalizan la interconversión de dos isómeros. Ligasas: Catalizan la unión covalente de dos sustratos mediante la energía de hidrólisis de nucleósidostrifosfatados, generalmente el ATP.A) Estabilidad de las EnzimasLa frágil naturaleza proteica de las enzimas, que conlleva a una estabilidad limitada de suestructura y funcionalidad, constituye un aspecto importante en un contexto tecnológico. Seconsidera que una enzima es apropiada para una aplicación comercial, si su estabilidad essuficiente para dicha aplicación. Diagrama de flujo para la producción de enzimas a partirde tejidos animales o vegetales “Diagrama de Enzyme´sBiotechnology”. (Figura 1).Las enzimas se obtienen por fermentación en cultivos semisólidos, sumergidos, extracción detejidos ya sea en plantas o animales bajo condiciones controladas. 3
  5. 5. “EXTRACCIÓN DE UN PREPARADO ENZIMÁTICO CRUDO (AMILÁSICO)” Figura 1. “Diagrama de Enzyme´sBiotechnology”.B) Fuentes de enzimasEs obvio que hay tres fuentes de enzimas: células animales, vegetales y microbianas. En añospasados, las plantas y los animales fueron las fu entes tradicionales de enzimas, pero dados losavances recientes de la biotecnología, probablemente el futuro está en los sistemas microbianos.1. Enzimas de origen animalObtenidas a partir de tejidos animales, por lo general, se preparan de animales recién sacrificados.Inmediatamente después del sacrificio, se quitan los tejidos y se congelan para evitar ladegradación bioquímica y de sulfuración. Se remueven los tejidos extraños, particularmente loscuerpos grasosos, y a continuación el tejido es cortado en rebanadas o se pasa a través de unmolino de martillos. En algunos casos la preparación resultante se pasa también por un mezcladorpara obtener un puré fino.Varios tejidos animales se usan como fuente de enzimas, incluyendo el páncreas, bazo, hígado yvarias porciones del intestino. Por supuesto, la extracción de la enzima va acompañada por variospasos de purificación, los cuales serán tratados con enzimas microbianas (Scragg, 1996). 4
  6. 6. “EXTRACCIÓN DE UN PREPARADO ENZIMÁTICO CRUDO (AMILÁSICO)” Tabla 1. Enzimas que se obtienen de tejidos animales Enzima Fuente α-amilasa Páncreas Lipasa/estearasa de ácidos grasos Páncreas bovino/porcino LIsozima Albúmina de huevo de bovino Fosfolipasa A Páncreas porcino Tripsina Páncreas bovino/porcino Quimo tripsina Páncreas bovino/porcino Pepsina Mucosa porcina Renina Bovino Fuente, Scragg, 1996.2. Células y tejidos vegetalesPor muchos años se han hecho preparaciones alimentarias de enzimas vegetales (Tabla 2). Sinembargo, la extracción de enzimas a partir de plantas es a menudo difícil y requiere equipo pesadopara macerar y moler el material típicamente fibroso. Los sistemas de molienda comunes por logeneral son insuficientes, excepto en los casos donde la fuente de materia es tejido de las hojas yes posible usar molinos de martillos de uso rudo modificado. Tabla 2. Enzimas derivadas de tejidos vegetales Enzima Fuente Β-amilasa Grano de cebada Peroxidasa Raíz de rábano Papaína Látex del árbol de papaya Bromelina Bromas sp. Ficina Higuera Fuente: Scragg, 1996 5
  7. 7. “EXTRACCIÓN DE UN PREPARADO ENZIMÁTICO CRUDO (AMILÁSICO)”3. Células microbianasSe acepta generalmente que la fuente principal de enzimas a escala industrial serán, en el futuro,los microorganismos (Tabla 3). Las razones son: Los sistemas de producción microbianos pueden mantenerse bajo estrecho control. Las concentraciones de enzimas y, por lo tanto, la productividad, se pueden manipular en forma genética y ambiental. El aumento progresivo y la alimentación del sistema no presentan el mismo problema logístico que una fuente derivada de la agricultura. Hay un grado inherente de flexibilidad en el proceso a través de la elección de varias enzimas. Los métodos de tamizado para sistemas microbianos son comparativamente simples. Tabla 3. Enzimas microbianas y sus aplicaciones Enzima Fuente Aplicación Bacillus subtilis Asperyllusoryzae Deprestado de textiles, licuefacción de Amilasa Penicilliumroquefort almidón, producción de glucosa. AspergillusNíger Penicilinasa Bacillussubtilis Degradación de la penicilina. Aspergillus Níger Invertasa Industria de la confitería Saccharomyecescerevisiae Aspergillus Níger Disminución de la viscosidad, auxiliares Celulasa Trichodermasp. de digestión Pectinasa Aspergillus niger Clarificación de vinos y jugos de fruta Proteasa Clostridiumsp Suavizante, auxiliar en la digestión Fuente, Scragg, 1996La mayoría de las enzimas microbianas usadas comercialmente son extracelulares, esto es, seproducen en el interiro de las células y luego se excretan o difunden en el medio de cultivo, del cualpueden ser operados. Esto reduce el problema que se presentan a menudo con plantas y, algunasveces con tejidos animales, de tener que romper las células individuales (Scragg, 1996). 6
  8. 8. “EXTRACCIÓN DE UN PREPARADO ENZIMÁTICO CRUDO (AMILÁSICO)”C) AlmidónSe encuentra en los cereales, tubérculos y en algunas frutas como polisacárido de reservaenergética y su concentración varía con el estado de madurez; el caso del plátano es muy indicativoen este sentido; en estado verde o inmaduro, el almidón constituye la mayor fracción de los hidratosde carbono, ya que los azúcares son muy escasos; a medida que la fruta madura, el polisacárido sehidroliza por la acción de las amilasas, y mediante otros sistemas enzimáticos se sintetizasacarosa y fructosa que se encuentran cuando llega la maduración.Químicamente el almidón esuna mezcla de dos polisacáridos muy similares, la amilasa y la amilo pectina; el primero es elproducto de la condensación de D-glucopiranosas por medio de enlaces α (1-4), que establececadenas lineales con 200-2500 unidades y pesos moleculares hasta de un millón; es decir, laamilasa es una α-D-(1-4)-glucana cuya unidad repetitiva es la α-maltosa. Tiene la facilidad deadquirir una conformación tridimensional helicoidal, en la que cada vuelta de la hélice consta deseis moléculas de glucosa.Por su parte la amilopectina se diferencia de la amilasa en que contiene ramificaciones que le danuna forma molecular similar a la de un árbol; las ramas están unidas al tronco central (semejante ala amilosa) por enlaces α-D-(1-6), localizadas cada 15-25 unidades lineales de glucosa. Su pesomolecular es muy alto ya que algunas fracciones llegan a alcanzar hasta 200 millones de saltones.En términos generales, los almidones contienen aproximadamente 17-27% de amilasa y el resto deamilopectina (Badui, 1996).Identificación de almidonesSe hace de manera cualitativa se realiza de una manera muy sencilla. Esta prueba se basa en queel yodo reacciona con la amilasa y genera un fuerte color azul característico debido al complejo quese establece entre una molécula de éste con cada 7-8 glucosas; como para desarrollarperfectamente la coloración se requiere un mínimo de 40 residuos de monosacáridos, las cadenasmuy cortas de amilasa, en lugar de azul, producen un color rojo. Aparentemente, el complejoamilasa-Yodo se establece por la inclusión del I2en hélice, mecanismo semejante al que se observaen los mono glicéridos que se usan en la elaboración del pan. Por otra parte, la amilo pectina sóloacompleja una pequeña cantidad de I2 y desarrolla una coloración roja (Badui, 1996).D) CarbohidrasasEnzimas comercialmente disponibles, las carbohidrasas son las más abundantes y tal vez las másempleadas principalmente de fuentes microbianas que pueden ser hongos, levaduras, bacterias 7
  9. 9. “EXTRACCIÓN DE UN PREPARADO ENZIMÁTICO CRUDO (AMILÁSICO)”i. Amilasas: En esta categoría se encuentran la α y la β-amilasa, cuyos mecanismos de actividad se detallarán más adelante. El uso más importante de estas amilasas es en la industria de la panificación, ya que hidrolizan el almidón y producen los azúcares (glucosa y maltosa) que a su vez, facilitan las reacciones de oscurecimiento no enzimático que dan origen al color en el horneado; también favorecen la generación del anhídrido carbónico, pues son sustratos fáciles para las levaduras, lo cual provoca el esponjamiento, y por último mejoran la textura del pan (Badui, 1996). La α-amilasa es una endohidrolasa que actúa de manera aleatoria sobre los enlaces internos α(1,4) de la amilasa y de la amilopectina, con lo cual se producen dextrinas; se le da el nombre de enzima licuante debido a que su presencia provoca la rápida reducción de la viscosidad de las soluciones de almidón. Es capaz de romper las uniones glucosídicas adyacentes a ambos lados del enlace α(1,6) de la amilopectina, aunque no ataca específicamente este enlace. Por su parte la β-amilasa hidroliza los enlaces α(1,4) a partir de los extremos no reductores de la amilasa y de la amilopectina, y produce moléculas de maltosa; esta actividad la clasifica consecuentemente como una exoenzima. Su acción se detiene al llegar a las uniones α(1,6) de la amilopectina, y su nombre se refiere a que ocasiona una inversión del enlace α a β y genera moléculas de β-maltosa. Durante la maduración de cereales, como el trigo, la actividad de α-amilasa se incrementa considerablemente, se concentra en las capas más externas y disminuye cuando alcanza la madurez; la β-amilasa también aumenta su actividad pero la mantiene cuando alcanza la madurez.ii. Amiloglucosidasa: Esta enzima, también llamada glucoamilasa, tiene la capacidad de hidrolizar tanto los enlaces α(1,4) como los α(1,6) de las glucanas; su acción prolongada puede causar la ruptura total del almidón, por lo que se emplea en la fabricación de los jarabes de glucosa.iii. Dextranasa:Las dextranas son polímeros de glucosa sintetizados a partir de la sacarosa por acción del Leuconostocmesenteroides en el jugo de la caña; por sus características de hidrocoloide, estos polisacáridos incrementan la viscosidad y dificultan la manipulación de los líquidos. La adición de la dextranasa se hace para hidrolizar estos carbohidratos y facilitar así la manipulación de los líquidos en la elaboración de la sacarosa.iv. Lactasa: La β-galactosidasa o lactasa desdobla la lactosa en sus correspondientes monosacáridos y se puede emplear en diversos productos lácteos, sobre todo en los que se elaboran para las poblaciones que no toleran este disacárido. En algunos países existe 8
  10. 10. “EXTRACCIÓN DE UN PREPARADO ENZIMÁTICO CRUDO (AMILÁSICO)” incluso una prelación a base de la enzima, que se le añade a la leche antes de consumirla para reducir la cantidad de lactosa (Badui, 1996). v. β-glucanasa: La acción hidrolítica de esta enzima se ejerce sobre los enlaces β(1,3) y β(1,4) de diversos polisacáridos, como algunas gomas; s eemplea para mejorar la extracción del mosto de cervecería. vi. Celulasa: La celulasa es en realidad un sistema complejo de enzimas que hidrolizan las uniones β(1,4) de las glucanas, como la celulosa, produciendo celulodextrinas; se ha usado en forma limitada para mejorar la extracción de aceites esenciales, así como para ablandar los tejidos celulósicos de verduras y frutas y para ayudar la rehidratación de diversos productos. vii. Pululanasa: La pululanasahidroloza los enlaces α (1,6) de la maltotriosa (pululano), por lo que tiene la capacidad de actuar sobre la amilopectina y las dextrinas límites. viii. Invertasa: La β-fructofuranosidasa o invertasa hidroliza la sacarosa en sus dos monómeros constituyentes: su mayor aplicación es en la elaboración del azúcar invertido. ix. Hemicelulosa: Esta enzima actúa sobre los enlaces β(1,4) de gomas como la guar y la de algarrobo, por lo que ayuda a descascarar los granos de café y en la producción del mosto para la cervecería. x. Pectinasa: Las preparaciones comerciales de esta enzima son en realidad mezclas de la pectinmetilestearasa, la poligalacturonasa y la pectinliasa: la forma de acción de cada una de ellas fue descrita en los ítems anteriores. Se usa en la extracción, clarificación y filtración de diversos jugos de frutas y de vinos, así como en la elaboración de purés y concentrados frutícolas. Figura 2. Polímero de AlmidónFormada por 1000 o más unidades de alfa-glucosa unidas por enlaces glicosídicos. 9
  11. 11. “EXTRACCIÓN DE UN PREPARADO ENZIMÁTICO CRUDO (AMILÁSICO)” Figura 3. Enlaces y disposición del almidónEl polímero de almidón existe en forma de espiral. La forma de espiral es mantenida por los enlacesde hidrógeno.IV. MATERIALES Y MÉTODOS A. Materiales y Equipos Materiales 2 muestras de papaya 1 muestra de hígado de pollo de nuestro horario y la otra muestra del hígado del laboratorio de la mañana Solución de Almidón Agua destilada HCl 0.1M KCl 0.154M Solución de I2 0.01N Equipos Tubos de ensayo Centrifuga Mortero Embudo de Vidrio Gasa Pipetas Mortero 10
  12. 12. “EXTRACCIÓN DE UN PREPARADO ENZIMÁTICO CRUDO (AMILÁSICO)” B. Metodología Tomar nuestras muestras de papaya e hígado de pollo (para este caso hacer varios lavados, para eliminar la sangre y luego triturarlo) 20g de cada uno. Hacemos el lavado de las muestras con solución de KCl al 0.154M. Homogeneizamos en un Mortero con soluciones de KCl 20 mL, para el caso de las muestras de papaya e hígado. El KCl permite una diferente presión y llega a establecer un desprendimiento de la enzima. El KCl se agrega durante la Trituración. Hacemos un filtrado, con la ayuda de una gasa la cual esta debe estar humedecida con KCl(se pone en el embudo). Disolver bien el triturado y filtramos. Centrifugamos los tubos preparados a 4000 RPM por 10 minutos. Nos quedamos con el líquido sobrenadante de cada tubo (PEC , porque no sabemos si el preparado tiene enzimas. En los tubos de ensayo ingreso el Sustrato la “Solución Almidón Soluble”: 400ppm a 0.4g almidón en un litro de agua destilada. A continuación en Cuadro1, la cual se muestra en Resultados; procedemos a realizar para la Identificación del Preparado enzimático Crudo. De este modo preparamos los tubos blanco, problema y testigo. Cuadro 1. Agregados para los tubos testigos, problemas y Blanco en PEC Soluciones Testigo Problema BlancoSolución almidón 400 rpm 2.5 mL 2.5mL -------Agua destilada 0.4mL 0.4mL 2.9mLPEC ------ 0.1mL 0.1mL Incubar a 35°C por 15 minutosAgregar HCl 0.1N 2.5 mL 2.5mL 2.5mLPEC 0.1mL ------ ------Solución de Iodo 0.1mL 0.1mL 0.1mL 11
  13. 13. “EXTRACCIÓN DE UN PREPARADO ENZIMÁTICO CRUDO (AMILÁSICO)”V. RESULTADOS Y DISCUSIONES TESTIGO PROBLEMA BLANCO EXTRACTO DE PAPAYA Figura 4.Papaya preparada en el primer turno de la mañana asignada a nuestro horario PAPAYA Figura 5. Papaya del primer turnoSegún Crueger (1993), la Piña (Bromelina); su temperatura óptimaesta entre 45 y 60ºC; elincremento muy grande puede provocar desnaturalización e inactivación. Su actividad enzimáticadependerá del color que tome a un mayor color indicará que no hay actividad enzimática. De lafigura 4, vemos que la papaya preparada la de color transparente la tercera “Tubo Blanco”, tienemayor actividad enzimática y la que de color azul tubo “Testigo”; como la de color morado “TuboProblema”; a mayor color menos actividad enzimática tendrá y el tubo color azul hay presencia dealmidón pero no hay actividad enzimática.Según Hernández, et al (1999); las enzimas son más susceptibles a la desnaturalización einactivación a altos contenidos de humedad. Esto se comprueba en la Figura 5 donde vemos que eltubo es de color marrón, por lo que interpretamos que no hubo reacción. Porque a mayor color nohay reacción enzimática. Pero no olvidemos que este tuvo corresponde al primer turno que por loque diríamos que el tiempo fue un factor en la actividad enzimática. 12
  14. 14. “EXTRACCIÓN DE UN PREPARADO ENZIMÁTICO CRUDO (AMILÁSICO)” TESTIGO PROBLEMA BLANCO EXTRACTO DE HIGADO Figura 6.Hígado de pollo preparado en el primer turno TESTIGO PROBLEMA BLANCO EXTRACTO DE HIGADO Figura 7. Hígado de pollo preparado en mi turno 11-1pmSegúnBadui (1996), la catalasa es una enzima común encontrada en los organismos vivos, dondefuncionan como catalizadores en las reacciones de descomposición del peróxido dehidrógeno(H2O2) en agua y oxígeno; esto se puede encontrar en el hígado.De la figura 6, vemosque el hígado tiene presencia de catalasas en el tubo Blanco, vemos que con el hígado de lamañana no hubo reacción. En el tubo primero “Tubo Testigo”, color azul fuerte es la que menosactividad enzimática tiene, de igual modo en el segundo tubo “Tubo Problema”; la que es másamarillenta “Tubo Blanco”, es la que más actividad enzimática.Tiene entonces a más transparente 13
  15. 15. “EXTRACCIÓN DE UN PREPARADO ENZIMÁTICO CRUDO (AMILÁSICO)”que sea el tubo más actividad enzimática tendrá y la menos transparente es la que menos actividadenzimática tiene de igual modo a mas color menos actividad enzimática tendrá. De igual modoobservamos en la Figura 7 que el color azul representa la presencia de almidón.SegúnWiseman (1996), la identificación de almidones presentes en un compuesto, se hace demanera cualitativa se realiza de manera muy sencilla. Esta prueba se basa en que el yodoreacciona con la amilasa y genera un fuerte color azul característico debido al complejo que seestablece entre una molécula de éste con cada 7-8 glucosas; como para desarrollar perfectamentela coloración se requiere un mínimo de 40 residuos de monosacáridos, las cadenas muy cortas deamilasa, en lugar de azul, producen un color rojo. Aparentemente, el complejo amilasa-Yodo seestablece por la inclusión del I2en hélice, mecanismo semejante al que se observa en los monoglicéridos que se usan en la elaboración del pan. Por otra parte, el amilo pectina sólo acomplejauna pequeña cantidad de I2 y desarrolla una coloración roja. Esto se pudo comprobar en las figuras4, 6 y 7 donde vemos que la presencia de almidón se darácuando haya menos coloración la cual sehace con la ayuda de la reacción del yodo y el color azul que se genera en estas muestras indicanpresencia de almidón. De la figura 7, vemos que si hay presencia de almidón en el tubo Azul”TuboTestigo” es la de mayor presencia de almidón y la que tiene menor presencia de almidón es el tubocolor transparente“Tubo blanco” ya que u color azul refleja la presencia de almidón.Según Frazier (1981), en los tubos testigos hay presencia de sustrato y no reacciona, en los tubosproblemas aquí solo hay reacción y tiene sustrato y enzima. En el tubo Blanco no hay sustrato sienzima, por lo que no hay reacción. Esto se comprobó en las figuras 4 donde en el tubo testigo nohay reacción por la presencia del sustrato y no de la enzima, en la Figura 6 vemos que en el hígadode pollo el tubo testigo no hay reacción pero si actividad enzimática.VI. CONCLUSIONES Se llegó a identificar cualitativamente un preparado enzimático crudo con papaya e hígado de pollo en lo cual vemos que si el tubo de ensayo se torna de color azul indicará la presencia del almidón. se identificó cualitativamente la actividad enzimática de las mismas muestras donde los tubos testigos no había reacción porque a mayor color no hay reacción y en los tubos blancos al tener un color más claro si hará reacción. VII. REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICASBADUI, S. (1996). Química de los Alimentos. Editorial Pearson Education. México 14
  16. 16. “EXTRACCIÓN DE UN PREPARADO ENZIMÁTICO CRUDO (AMILÁSICO)”CRUEGER, W. (1993). Biotecnología - Manual de Microbiología Industrial. Edit. Acribia, S.A Zaragoza. EspañaFRAZIER, C. (1981). Microbilogía de los Alimentos, 2ª Ed. Edit. Acribia, S.A. Zaragoza. España.HERNÁNDEZ M, CARVAJAL C, SANTOS R, MÁRQUEZ M, BLANCO M, GONZÁLEZ J,( 1999). Purificationalternatives of obtained bromelain from different sources.Pineapple News.1999; 6:5.WISEMAN, A.(1986). “Principios de Biotecnología”. Editorial ACRIBIA S.A. ZARAGOSA (España).SCRAGG (1996). Biotecnología para Ingenieros. Sistemas Biológicos en procesos tecnológicos. EditorialLimusa Editores. México D.F.ANEXOS Figura 8. Figura 9. Centrifugación Figura 10. Materiales a Extraccióndesolucion desolución de papaya usar en laboratorio de papaya 15

×