2da 9na practica bioquímica i

15,604 views

Published on

biologia

Published in: Education
0 Comments
0 Likes
Statistics
Notes
  • Be the first to comment

  • Be the first to like this

No Downloads
Views
Total views
15,604
On SlideShare
0
From Embeds
0
Number of Embeds
2
Actions
Shares
0
Downloads
92
Comments
0
Likes
0
Embeds 0
No embeds

No notes for slide

2da 9na practica bioquímica i

  1. 1. Laboratorio de Bioquímica y Biología Molecular I Segundo Laboratorio Agua, pH y Acción Amortiguadora de los Aminoácidos I. Introducción Las biomoléculas polares orgánicas e inorgánicas de las células vivientes existen yreaccionan de manera primaria en un ambiente acuoso. El agua, una moléculanotablemente escencial para la vida, solubiliza y modifica las características debiomoléculas como ácidos nucleicos, proteínas y carbohidratos al formar puentes dehidrógeno con sus grupos funcionales, interacciones que modifican las propiedades dedichas biomoléculas y sus conformaciones en una solución. La comprensión de los mecanismos homeostáticos utilizados por los organismospara conservar un entorno intracelular relativamente constante debe considerar el pH, elamortiguamiento del mismo a nivel de los líquidos corporales y compartimientossubcelulares. Por otro lado tenemos que una de las múltiples funciones de los aminoácidos es que,tanto aminoácidos libres, así como, algunos que aún formando parte de las proteínas,pueden potencialmente funcionar como buffers. Esto se debe gracias a que losaminoácidos en un medio acuoso contienen un grupo carboxilo que funciona comoácido débil, y un grupo amino que funciona como base débil. II. Objetivos1. Definir el concepto de amortiguador (buffer) y estudiar sus funciones y modo de acción.2. Conocer los componentes de un buffer.3. Demostrar la acción de los amortiguadores en el pH.4. Demostrar la acción amortiguadora de los aminoácidos. III. ProcedimientoIII a) Sustancia buffer1. Se toman tres beakers de 25ml y se preparan de la siguiente manera: a) Beaker 1 (Problema 1): 10ml de agua destilada + 2 gotas de anaranjado de metilo. b) Beaker 2 (Problema 2): 8ml de agua destilada + 1ml de ácido acético + 1ml de acetato de sodio + 2 gotas de anaranjado de metilo. c) Beaker 3 (Control de color): 8ml de agua destilada + 1ml de ácido acético + 1ml de acetato de sodio + 2 gotas de anaranjado de metilo.
  2. 2. Se toman los beakers 1 y 2 se procede a titular con gotas de ácido clorhídrico 0.1N hasta observar un cambio de color en comparación con el beaker 3. Cuente y anote las gotas utilizadas en cada caso.2. Se toman tres beakers de 25ml y se preparan de la siguiente manera: a) Beaker 1 (Problema 1): 10ml de agua destilada + 2 gotas de fenolftaleína. b) Beaker 2 (Problema 2): 8ml de agua destilada + 1ml de ácido acético + 1ml de acetato de sodio + 2 gotas de fenolftaleína. c) Beaker 3 (Control de color): 8ml de agua destilada + 1ml de ácido acético + 1ml de acetato de sodio + 2 gotas de fenolftaleína. Se toman los beakers 1 y 2 se procede a titular con gotas de hidróxido de sodio 0.1N hasta observar un cambio de color en comparación con el beaker 3. Cuente y anote las gotas utilizadas en cada caso.III b) Acción buffer de los amonoácidos1. Se toman 2 beakers y se agrega 10ml de glicina 0.1N a cada uno y se procede a medir el pH de la misma (pH basal)2. Se toma uno de los beakers y con el electrodo del pHmeter dentro de la solución, se procede a titular con HCl 0.1N de la siguiente manera: 5 veces 0.1ml (2 gotas) 5 veces 0.2ml (4 gotas) 14 veces 0.5ml (10 gotas) 5 veces 0.2ml (4 gotas) 5 veces 0.1ml (2 gotas) En cada adición de HCl, esperar y anotar la medida de pH3. Se toma el otro beaker con glicina y con el electrodo del pHmeter dentro de la solución, se procede a titular con NaOH 0.1N de la misma forma descrita en el paso anterior.LEER DE SU LIBRO DE TEXTO1. AGUA, pH y BUFFER2. GENERALIDADES, PROPIEDADES Y TITULACION DE LOS AMINOACIDOS
  3. 3. Acción Buffer de los Aminoácidos pH Basal de GlicinaVolúmen pH Volúmen pH HCl NaOH
  4. 4. Laboratorio de Bioquímica y Biología Molecular I Tercer Laboratorio Actividad de la Anhidrasa Carbónica y Acidez Titulable I. Introducción El mantenimiento estable de la concentración de hidrogeniones a nivel delorganismo es escencial para la vida. Generalmente el pH tanto a nivel intra comoextracelular es mantenido a niveles muy constantes. El pH del organismo es estabilizadogracias a la capacidad amortiguadora que poseen los líquidos corporales. Uno de los buffers en el organismo es el ácido carbónico; este ácido en solución seencuentra parcialmente disociado en hidrogenión y bicarbonato: H2CO3 H+ yHCO3¯. Si a una solución de ácido carbónico le añadimos H+, el equilibrio de laecuación anterior tiende a desviarse a la izquierda, y por el contrario si agregamos gruposOH¯ a la solución el equilibrio tiende a ir a la derecha de la ecuación. Como ejemplo deotros buffers a nivel del organismo tenemos a las proteínas tanto intra comoextracelulares. Uno de los órganos que contribuye con el mantenimiento del pH a nivel sistémicoson los riñones durante la formación de la orina. En el laboratorio podemos determinarla cantidad de H+ añadidos al líquido tubular (orina) que se han combinado con elamortiguador de fosfato y otros amortiguadores orgánicos. El procedimiento consiste entitular la orina con una base fuerte como NaOH hasta un pH de 7.4, que es el pHnormal del plasma. El número de miliequivalentes de NaOH necesarios para hacer que elpH de la orina vuelva a 7.4 es igual al número de miliequivalentes de H+ añadidos a laorina que se han combinado con el amortiguador de fosfato y otros amortiguadoresorgánicos. El ácido titulable medido no incluye a los H+ unidos a NH4+ porque el pKde la reacción del amoníaco/amonio es de 9.2 y sólo llevamos con NaOH hasta un pHde 7.4. II. Objetivos1. Conocer los principales sistemas amortiguadores del organismo y su localización.2. Estudiar la función, localización y modo de acción de la anhidrasa carbónica.3. Definir la importancia y determinar la acidez titulable de la orina
  5. 5. III. ProcedimientoIII a) Acción de la Anhidrasa Carbónica1. A un estudiante voluntario se le extraen 3 ml de sangre y se procede a desfibrinarla en un beaker pequeño con perlas de cristal.2. Se toman tres tubos de ensayo rotulados como A, B y C respectivamente y se preparan de la siguiente manera: a) Tubo A: 15 ml de agua destilada + 1 ml de azul de bromotimol 0.04% + 0.5 ml de bicarbonato al 5%. b) Tubo B: 15 ml de agua destilada + 1 ml de azul de bromotimol 0.04% + 0.1 ml de sangre desfibrinada + 0.5 ml de bicarbonato al 5%. c) Tubo C: 15 ml de agua destilada + 1 ml de azul de bromotimol 0.04% + 0.1 ml de sangre desfibrinada + 0.5 ml de bicarbonato al 5% + 1 ml de acetazolamida al 1 %. NOTA: Todos los tubos se preparan y se mantienen en hielo para lograr y mantener una temperatura de 4 grados centígrados.3. Usando el pHmeter se procede a tomar el pH a cada tubo.4. Luego se colocan los tubos en una corriente de CO2 y se tomará el tiempo necesario para que el contenido de cada tubo de ensayo cambie de color.5. Finalmente se procede a tomar nuevamente el pH de cada tubo. Anote y analice los resultados obtenidos: pH antes del pH luego del Tubo CO2 CO2 Tiempo A B C
  6. 6. III b) Acidez Titulable 1. Un estudiante voluntario procede a depositar orina en un beaker. 2. En otro beaker se toman 25 ml de la orina y se mide el pH. 3. Con el electrodo del pHmeter dentro del beaker se titulan los 25 ml de orina con NaOH 0.1N hasta llegar a un pH de 7.4. 4. Se calculan los miliequivalentes de ácidos excretados en la orina utilizando la siguiente equivalencia: 1 ml de NaOH 0.1N ≈ 0.1 mEq de ácidos urinariosLEER DE SU LIBRO DE TEXTOPRINCIPALES SISTEMAS AMORTIGUADORES DEL ORGANISMO Y SULOCALIZACION
  7. 7. Laboratorio de Bioquímica y Biología Molecular I Cuarto Laboratorio Reconocimiento de los Aminoácidos y las Proteínas I. Introducción Las proteínas son las biomoléculas más abundantes después del agua y desempeñanun gran número de funciones, que las caracterizan como componentes escenciales eindispensables para la vida. Virtualmente todos los procesos en los organismos vivosdependen de este tipo de moléculas. Por ejemplo, las enzimas y las hormonaspolipeptidicas dirigen y regulan el metabolismo en el cuerpo, mientras que las proteínascontractiles del músculo permiten el movimiento. En el hueso, forman el esqueletonecesario para el depósito de cristales de calcio y fosfato, actuando como lo hacen lasvarillas en el concreto armado. En el torrente sanguíneo, las proteínas como lahemoglobina y la albúmina plasmática son moléculas escenciales para la vida, igualmentelas inmunoglobulinas participan en la destrucción de bacterias y virus. En resumen, lasproteínas realizan una increible diversidad de funciones. Las proteínas no son más que polímeros de 20 L alfa aminoácidos unidos medianteenlaces peptídicos y van a mostrar una amplia variación en sus tamaños, formas ypropiedades. Sus propiedades químicas y fisiológicas dependen no sólo de su tamaño yforma, sino tambien de las propiedades de los aminoácidos que las componen. II. Objetivos1. Estudiar la estructura, propiedades, clasificación y función de de los aminoácidos, péptidos y proteínas.2. Identificar aminoácidos y proteínas utilizando pruebas de laboratorio específicas.3. Desmostrar el efecto de la desnaturalización de las proteínas por acción del pH, metales pesados y la temperatura. III. ProcedimientoIII a) Pruebas utilizadas para la identificación de aminoácidos y proteínas:1. Reacción de la Ninhidrina: Los aminoácidos en general reaccionan con la nihidrina (hidrato de hicelohidrindeno) en presencia de calor dando dióxido de carbono, amoniáco y un aldehído que contiene un átomo de carbono menos que el compuesto original. La reacción da lugar a la formación de un producto de color azul o púrpura, que es útil para la estimación cualitativa y cuantitativa de los aminoácidos. No obstante, el color azul no es específico para aminoácidos debido a que el amoníaco y la mayoría de los polipéptidos y proteínas desarrollan el color con la ninhidrina.
  8. 8. Para realizar la prueba se toman 2 ml de la solución a analizar en un tubo de ensayo y se le agregan 5 gotas de la solución de ninhidrina. Se calienta en un baño de maría por 1 a 2 minutos y si la prueba es positiva se desarrollará un color azul.2. Reacción de Biuret: La reacción de Biuret está dada por aquellas sustancias cuyas moléculas contienen 2 grupos carbamino (-CO.NH) ligados directamente o a través de un solo átomo de carbono o nitrógeno. Sustancias similares que contienen en lugar del grupo carbamino, grupos CS.NH, también responden a la prueba. Esto implica que compuestos no proteicos que contienen los grupos necesarios responderán a la prueba. Las proteínas disuelven el hidróxido cúprico del reactivo y forman compuestos coloreados violeta o violeta-rosado que depende de la naturaleza de las proteínas. Para realizar la prueba se toman 2 ml de la solución a analizar en un tubo de ensayo y se le agregan 2 ml del reactivo de Biuret, mezcle bien y si la prueba es positiva se desarrollará un color violeta.3. Reacción de Millón: Esta reacción se debe a la presencia de grupos hidroxifenilos (C6H5OH) en la molécula proteica. Cualquier compuesto fenólico que no esté sustituido en la posición 3, 5, como la tirosina, fenol y timol, dan lugar a la reacción. De estos compuestos, solamente la tirosina o tirosina halogenada se encuentran presentes en las proteínas, de manera que la reacción de Millón tiene lugar únicamente con las proteínas que tienen tirosina. La prueba no es satisfactoria para soluciones que contienen sales inorgánicas en gran cantidad, ya que el mercurio del reactivo de Millón es precipitado y se vuelve inactivo, razón por la que este reactivo no se usa para medir albúmina en la orina. Si la solución a examinarse es muy alcalina debe ser previamente neutralizada, ya que el álcali precipita también el mercurio en forma de óxidos amarillos. Para realizar la prueba se toman 2 ml de la solución a analizar en un tubo de ensayo y se le agregan 3 a 4 gotas del reactivo de Millón. Se mezcla y se calienta en un baño de maría por 1 a 2 minutos. Las proteínas se precipitan por acción de los ácidos minerales fuertes del reactivo, dando un precipitado blanco que se vuelve gradualmente rojo al calentar. Si no se desarrolla color añada 2 o 3 gotas más del reactivo y caliente otra vez. Se debe evitar un exceso de reactivo ya que puede producir un color amarillo, el cual no indica reacción positiva.4. Reacción Xantoproteica: Esta reacción se debe a la presencia en la molécula proteica de grupos fenilos (-C6H5), con el cual el ácido nítrico forma compuestos nitrados amarillos. Los complejos de la molécula proteica de importancia en esta reacción son los de tirosina y triptófano. La fenilalanina no responde a este ensayo en las condiciones en que se ha desarrollado. La reacción no es satisfactoria para el examen de orina debido al color amarillo de la reacción final. Para realizar la prueba se toman 2 ml de la solución a analizar en un tubo de ensayo y se le agrega 1 ml de ácido nítrico concentrado. Se calienta en un baño de maría y se observa la formación de un precipitado amarillento que se vuelve gradualmente amarillo y se disuelve impartiendo el color a la solución. Deje enfriar y añada cuidadosamente un exceso de hidróxido de amonio o de sodio y observe que el color amarillo se intensifica y pasa a anaranjado.
  9. 9. III b) Identificación de aminoácidos y proteínas: 1. Tome 4 tubos de ensayo y coloque en ellos 2 ml de agua destilada y proceda a realizar las pruebas de Ninhidrina, Biuret, Millón y Xantoproteica. 2. Tome 4 tubos de ensayo y coloque en ellos 2 ml de la solución de glicina y proceda a realizar las pruebas de Ninhidrina, Biuret, Millón y Xantoproteica. 3. Tome 4 tubos de ensayo y coloque en ellos 2 ml de la solución de albúmina de huevo diluida y proceda a realizar las pruebas de Ninhidrina, Biuret, Millón y Xantoproteica. Anote y analice los resultados obtenidos. Sustancia Prueba Realizada Analizada Ninhidrina Biuret Millón Xantoproteica Agua Destilada Glicina Albúmina III c) Desnaturalización de las proteínas por acción del pH: Se toman 3 tubos de ensayo y se les agrega 2 ml de solución de albúmina de huevo a cada uno de ellos. Al tubo número 1 agregue 10 gotas de HCl concentrado y observe, al número 2 agregue 10 gotas de ácido acético glacial y observe, al tubo número 3 agregue 10 gotas de agua destilada como control. Luego realice la prueba de Biuret a cada tubo. Anote y analice los resultados obtenidos. Tubo Observación Prueba de Biuret1 Albúmina+HCl2 Albúmina+CH3COOH3 Albúmina+Agua destilada III d) Desnaturalización de las proteínas por acción de los metales pesados: Se toman 3 tubos de ensayo y se les agrega 2 ml de solución de albúmina de huevo a cada uno de ellos. Al tubo número 1 agregue 10 gotas de nitrato de plata y observe, al número 2 agregue 10 gotas de nitrato de potasio y observe, al tubo número 3 agregue 10 gotas de agua destilada como control. Luego realice la prueba de Biuret a cada tubo. Anote y analice los resultados obtenidos.
  10. 10. Tubo Observación Prueba de Biuret1 Albúmina+Nitrato de plata2 Albúmina+Nitrato de potasio3 Albúmina+Agua destilada III e) Desnaturalización de las proteínas por acción de la temperatura: Se toman 1 tubo de ensayo y se le agrega 2 ml de solución de albúmina de huevo. Lleve el tubo al calor y observe. Luego realice la prueba de Biuret. Anote y analice los resultados obtenidos. Tubo Observación Prueba de Biuret1 Albúmina+Calor LEER DE SU LIBRO DE TEXTO: ESTRUCTURA Y FUNCION DE AMINOACIDOS, PEPTIDOS Y PROTEINAS.
  11. 11. Laboratorio de Bioquímica y Biología Molecular I Quinto Laboratorio Obtención e Identificación de la Caseína de la Leche I. Introducción La leche es un alimento muy nutritivo, ya que contiene proteínas, lípidos, lactosa, salesinorgánicas y vitaminas. La caseína es la proteína principal, siendo esta una proteínaconjugada que posee fósforo como grupo prostético. Como muchas otras proteínas de origen animal, esta es de un alto valor biológico, ya queposee todos los aminoácidos escenciales para el desarrollo y crecimiento normal del hombre. La separación de la caseína se realiza mediante la precipitación con ácido y junto a ésta,cierta cantidad de grasa que será extraída con solventes orgánicos en los que la caseína esinsoluble. II. Objetivos1. Conocer los fundamentos bioquímicos del aislamiento de la caseína.2. Conocer la importancia de las reacciones de Biuret, Millón y Xantoproteica en la identificación de la caseína y algunos de los aminoácidos que la componen.3. Determinar la presencia en la leche de fosfatos utilizando la prueba de Molibdato de Amonio y la presencia de cloruros mediante la prueba de Nitrato de Plata. III. ProcedimientoIII a) Aislamiento de la caseína:1) Caliente 100 ml de leche hasta 40 grados centígrados y luego agregue 1 ml de ácido acético glacial hasta que precipite toda la proteína. Filtre con una gaza o al vacío hasta sacar el máximo de líquido. Guarde el filtrado para la determinación de fosfatos y cloruros identificandolo como filtrado acuoso.2) Suspenda el precipitado del paso anterior en 50 ml de etanol al 95% y agite. Filtre con una gaza o al vacío hasta sacar el máximo de líquido. Guarde el filtrado para la determinación de fosfatos y cloruros identificandolo como filtrado alcohólico. Repita el proceso añadiendo 50 ml de una solución alcohol-éter 1:1 y filtre al vacío. Guarde el filtrado para la determinación de fosfatos y cloruros identificandolo como filtrado alcohol-éter.3) El resíduo obtenido es la caseína que procederemos a identificar.
  12. 12. III b) Identificación de la caseína y aminoácidos de la misma: En 3 tubos de ensayo diferentes añada 0.5 gramos de la caseína obtenida y realice laspruebas de Biuret, Millón y Xantoproteica. Observe y anote los resultados. Prueba Biuret Millón Xantoproteica ResultadosIII c) Determinación de fosfatos y cloruros:1) Tome los filtrados obtenidos durante el aislamiento de la caseína; si tienen turbidez llevelos a centrifugar y tome el sobrenadante.2) Determinación de fosfatos con la prueba de Molibdato de Amonio: En 3 tubos de ensayo por separados tome una muestra de 2 ml de cada uno de los filtrados obtenidos en el paso A. Acidifique el medio añadiendo ácido nítrico y luego añada 2 ml de molibdato de amonio. Observe el cambio de color.3) Determinación de cloruros con la prueba de Nitrato de Plata: En 3 tubos de ensayo por separados tome una muestra de 2 ml de cada uno de los filtrados obtenidos en el paso A y añada a cada uno nitrato de plata al 1% gota a gota. Observe la formación de un precipitado blanco. Tabla de resultados Filtrado Nitrato de plata Molibdato amonio Acuoso Alcohólico Alcohol-éter
  13. 13. Laboratorio de Bioquímica y Biología Molecular I Sexto Laboratorio Digestión de Carbohidratos por la Amilasa Salival I. Introducción Virtualmente todas las reacciones que ocurren en el organismo están mediadas porenzimas, proteínas catalíticas que incrementan la velocidad de las reacciones sin que ellas seconsuman durante el proceso que ellas catalizan. Sin enzimas la vida no sería posible ya quelas mismas llevan a cabo funciones capitales relacionadas con la salud y la enfermedad. La velocidad de ciertas reacciones catalizadas por enzimas responde a las variacionessutiles del pH intracelular que caracterizan la acidosis o alcalosis metabólica. Además, dadoque esta velocidad se eleva o disminuye en respuesta a las fluctuaciones correspondientes entemperatura, la fiebre y la hipotermia perturban la homeostasia al modificar numerosasreacciones catalizadas por enzimas. Sin embargo estos cambios mínimos pueden convertirseen ventaja para el médico si éste manipula controladamente dichos cambios. Otros factores que afectan la velocidad de las reacciones catalizadas por enzimas sonlos cambios en la concentración, ya sea, de los sustratos sobre los cuales actúa la enzima, asícomo, cambios en la concentración de la propia enzima. También la cinética enzimáticapuede verse afectada debido a la presencia de sustancias inductoras o inhibidoras de laactividad enzimática. II. Objetivos 1. Estudiar el concepto de enzima. 2. Analizar los diferentes factores que afectan la cinética enzimática. 3. Estudiar el papel de la amilasa salival en la digestión de los carbohidratos. 4. Introducir otras enzimas que participan en la digestión de los carbohidratos. III. ProcedimientoIII a) Efecto de la temperatura sobre la acción de la amilasa salival: 1. Tome 4 tubos de ensayo y agregue a cada uno de ellos 1 ml de solución saliva 1:9 y luego, lleve cada tubo a la temperatura indicada para cada uno de ellos en el cuadro que aparece más adelante y deje incubar durante 5 minutos. 2. Luego de incubar agregue a cada tubo 5 ml de solución almidón al 1%. 3. Dejando los tubos en su temperatura correspondiente, proceda a realizar la prueba de Yodo a cada tubo a los 0, 3, 6 y 9 minutos luego de agregado el almidón.
  14. 14. 4. Al cabo de los 9 minutos, realice la prueba de Benedict a cada uno de los tubos de ensayo. 5. Complete el siguiente cuadro con los resultados obtenidos: Prueba de Yodo Prueba de Tubo # Temperatura 0 Min 3 Min 6 Min 9 Min Benedict 1 0 Grados 2 Temp. Ambiente 3 38 Grados 4 100 Grados III b) Efecto del pH sobre la acción de la amilasa salival: 1. Tome 7 tubos de ensayo y agregue a cada uno de ellos 1.5 ml de solución saliva 1:9 y luego, agregue 3 ml de la solución buffer correspondiente a cada tubo (indicado en el cuadro que aparece más adelante). Deje en incubación durante cinco minutos. 2. Luego de incubar agregue a cada tubo 5 ml de solución almidón al 1%. 3. Proceda a realizar la prueba de Yodo a cada tubo a los 0, 3, 6, 9 y 12 minutos luego de agregado el almidón. 4. Al cabo de los 12 minutos, realice la prueba de Benedict a cada uno de los tubos de ensayo. 5. Complete el siguiente cuadro con los resultados obtenidos: Prueba de Yodo Prueba deTubo Solución Buffer 0 Min 3 Min 6 Min 9 Min 12 Min Benedict # 1 pH 2.5 2 pH 5.4 3 pH 6.0 4 pH 6.8 5 pH 7.4 6 pH 8.0 7 pH 10.0
  15. 15. III c) Efecto de la presencia de inductores e inhibidores enzimáticos: 1. Tome 6 tubos de ensayo y agregue a cada uno de ellos 1 ml de solución saliva 2:8, añada luego, a cada tubo, 1 ml de la sustancia indicada en el cuadro que aparece más adelante, deje en incubación durante cinco minutos. 2. Luego de incubar agregue a cada tubo 5 ml de solución almidón al 1%. 3. Proceda a realizar la prueba de Yodo a cada tubo a los 0, 5, 10, y 15 minutos luego de agregado el almidón. 4. Al cabo de los 15 minutos, realice la prueba de Benedict a cada uno de los tubos de ensayo. 5. Complete el siguiente cuadro con los resultados obtenidos: Prueba de Yodo Prueba deTubo # Sustancia 0 Min 5 Min 10 Min 15 Min Benedict 1 Agua destilada 2 Cloroformo 3 NaF 4 NaCl 0.9% 5 Fenol puro 6 HgCl2 1% Leer de su libro de texto: Propiedades generales de las enzimas Cinética enzimática Factores que afectan cinética enzimática
  16. 16. Laboratorio de Bioquímica y Biología Molecular I Séptimo Laboratorio Caracterización de Carbohidratos I. Introducción Los carbohidratos se presentan en forma de azúcares, almidones y fibras, y son uno delos tres principales macronutrientes que aportan energía al cuerpo humano (los otros son loslípidos y las proteínas). Actualmente está comprobado que al menos el 55% de las caloríasdiarias que ingerimos deberían provenir de los carbohidratos. Los carbohidratos o hidratos de carbono ó glúcidos constituyen compuestos químicosformados principalmente por carbono, hidrógeno y oxígeno, elementos que se conjugan paraformar diversos tipos, en una proporción generalmente de 1:2:1, respectivamente. Estasbiomoléculas ejercen funciones fundamentales en los seres vivos, como: soporte (celulosa),reserva de alimento (almidón), reserva energética (glucógeno), energía inmediata (glucosa). Pueden clasificarse atendiendo a varios criterios: de acuerdo al número de monómerosque constituyen al carbohidrato, al número de carbonos de sus monómeros o según el grupofuncional que posee ese monómero. Entre los polisacáridos que son fisiológicamente importantes tenemos al almidón y elglucógeno. El primero está formado por una cadena α-glucosídica. Compuesto que soloproduce glucose en la hidrólisis, es un homopolímero denominado glucosano o glucano.Constituye la fuente más importante de carbohidratos de los alimentos. Los dosconstituyentes principales del mismo son: la amilosa (15-29%) que tiene estructura helicoidalno ramificada y la amilopectina (80-85%), que consiste en cadenas muy ramificadas. Por suparte, el glucógeno es el polisacárido que se almacena en el organismo animal y contiene unaestructura mucho más ramificada que la amilopectina. II. Objetivos1. Estudiar las propiedades, diferencias y clasificación de los carbohidratos.2. Utilizar distintas pruebas de laboratorio para caracterizar y clasificar los carbohidratos. III. ProcedimientoIII a) Pruebas utilizadas para la identificación de carbohidratos:1. Reacción de Molish: La presencia de carbohidratos en una muestra se pone demanifiesto por la reacción de Molish, que a cierto punto es la reacción universal paracualquier carbohidrato. Se basa en la acción hidrolizante y deshidratante del ácido sulfúricosobre los hidratos de carbono. En dicha reacción el ácido sulfúrico cataliza la hidrólisis delos enlaces glucosídicos de la muestra y la deshidratación a furfural (en las pentosas) o
  17. 17. hidroximetilfurfural (en las hexosas). Estos furfurales se condensan con el alfa naftol delreactivo de Molisch (reacción de Molisch) dando un producto coloreado.Realización de la prueba: en un tubo de ensayo se depositan 2 ml de la muestra a ensayar,agregue dos gotas de reactivo de Molisch y mezcle bien. Luego incline el tubo y deposite 1ml de H2SO4 concentrado deslizándolo lentamente por la pared del tubo. No mezcle. Sólocoloque el tubo en posición vertical y observe la formación del anillo rojo violeta queaparece en la zona de contacto de los dos líquidos.2. Reacción de Benedict: Una de las reacciones más comunes en la identificación decarbohidratos es la reacción de Benedict. Esta reacción es específica para azúcares congrupo reductores libres (C=O). Todos los monosacáridos poseen un grupo reductor libre.Los disacáridos maltosa y lactosa tienen grupos reductores libres, pero la sacarosa no losposee, ya que se pierden los grupos reductores de sus componentes cuando ésta es formada.Esta prueba se basa en la capacidad del carbohidrato de reducir el Cu2+ en un medioalcalino. Este Cu1+ se oxida y precipita en forma de Cu2O, lo que proporciona lacoloración positiva de la reacción. La coloración dependerá de la concentración de óxido decobre y ésta a su vez de la reducción del cobre; va desde verde, amarillo, anaranjado o rojizo,dependiendo de la coloración.Realización de la prueba: en un tubo de ensayo se depositan 2 ml de la muestra a ensayar,agregue 2 ml del reactivo de Benedict y proceda a colocar el tubo de ensayo en un baño deMaría a 100° C durante dos minutos.3. Reacción de Seliwanoff: Los carbohidratos se clasifican como cetosas o aldosas. Valedecir, que las cetosas en el carbono 2 tienen una función cetona, que en presencia de unácido fuerte producen rápidamente derivados furfúricos que reaccionan con un difenolllamado resorcina que está contenido en el reactivo de Seliwanoff. La sacarosa (un disacáridoformado por glucosa y fructosa) y la inulina (un polisacárido de la fructosa) dan positiva lareacción, ya que el HCl del reactivo provoca en caliente la hidrólisis del compuesto liberandofructosa (responsable de la reacción positiva).Realización de la prueba: en un tubo de ensayo se depositan 2 ml de la muestra a ensayar,agregue 2 ml del reactivo de Seliwanoff y proceda a colocar el tubo de ensayo en un baño deMaría a 100° C durante dos minutos.4. Reacción de Bial: Consiste en la formación de un producto de color azul-verdoso entreel furfural de los carbohidratos y el orcinol del reactivo de bial en medio clorhídrico. Esespecífica de pentosas.Realización de la prueba: en un tubo de ensayo se depositan 2 ml de la muestra a ensayar,agregue 1 ml del reactivo de Bial + 2.5 ml de ácido clorhídrico concentrado y proceda acolocar el tubo de ensayo en un baño de María a 100° C durante 5-10 minutos.5. Identificación de polisacáridos mediante la prueba de yodo: Los polisacáridos danun color específico en presencia de yodo. El almidón que está compuesto de amilosa(estructura lineal) y amilopectina (estructura ramificada) cuando se le agrega yodo se obtieneun color azul ya que a pesar de que la amilosa es el componente menos abundante, está en laparte externa del gránulo de almidón, sin embargo, si realizaramos la prueba a laamilopectina únicamente obtuvieramos una coloración rojo-violeta en presencia de yodo. Laprueba es igualmente satisfactoria para el glucógeno.
  18. 18. III b) Identificación de carbohidratos: 1. Utilizando 4 tubos de ensayo para cada uno de los carbohidratos indicados en la tabla que aparece más adelante, deposite 2 ml de cada uno de ellos en cada uno de los tubos y proceda a realizar las pruebas de Benedict, Molish, Seliwanoff y Bial a los tubos respectivamente. RESULTADOS Carbohidrato Molish Benedict Seliwanoff Bial Glucosa 1% Maltosa 1% Manosa 1% Ribosa 1% Galactosa 1% Fructosa 1% Lactosa 1% Sacarosa 1% Agua destilada 2. En un plato de petri o en un vidrio de reloj coloque un poco de solución de almidón y agregue gotas de una solución de yodo. Repita el mismo procedimiento con un poco de yuca y papa. Sustancia Resultados prueba de yodo Solución almidón Yuca PapaLEER DE SU LIBRO DE TEXTO:CARBOHIDRATOS DE IMPORTANCIA FISIOLOGICACLASIFICACION, NOMENCLATURA Y ESTRUCTURA DE LOSCARBOHIDRATOS
  19. 19. Laboratorio de Bioquímica y Biología Molecular I Octavo Laboratorio Caracterización de Lípidos I. Introducción Los lípidos son biomoléculas orgánicas formadas básicamente por carbono ehidrógeno y generalmente también oxígeno; pero en porcentajes mucho más bajos. Ademáspueden contener también fósforo, nitrógeno y azufre. Es un grupo de sustancias muyheterogéneas que tienen en común estas dos características:1. Son insolubles en agua2. Son solubles en disolventes orgánicos, como éter, cloroformo, benceno, etc. Son compuestos de gran importancia bioquímica, ya que desempeña grandes funcionescomo la liberación y reserva de energía química, proven de una barera hidrofóbica quepermite la compartimentalización del contenido acuoso de las células y estructurassubcelulares. En adicción a esto, los lípidos llevan a cabo varias funciones en el organismo,por ejemplo, algunas vitaminas liposolubles tienen funciones regulatorias o funciones comocoenzimas, y las prostaglandinas y hormonas esteroideas juegan papeles mayores en elcontrol de la homeostasis del organismo. Hay ciertos ácidos grasos poliinsaturados esenciales que deben ser suministrados en ladieta como lo es el ácido linoleico dándole esto mayor valor nutricional. Los lípidos se clasifican de varias formas, una de ellas es atendiendo a que posean ensu composición ácidos grasos (Lípidos saponificables) o no lo posean (Lípidosinsaponificables), dividiendose así en dos grupos:1. Lípidos saponificables A. Simples 1. Acilglicéridos 2. Céridos B. Complejos 1. Fosfolípidos 2. Glucolípidos2. Lípidos insaponificables A. Terpenos B. Esteroides C. Prostaglandinas Los triglicéridos son los más abundantes en los vegetales y uperio uperiors. Seacumulan en los depósitos grasos y en las semillas como forma de reserva alimenticia.
  20. 20. II. Objetivos1. Estudiar los lípidos; su importancia, estructura, clasificación, función y características físico-químicas.2. Estudiar la importancia de las diferentes pruebas usadas en la identificación de los lípidos y reacciones de importancia biológica para la identificación de las caracteristicas de los lípidos. III. ProcedimientoIII a) Solubilidad de los lípidos: Los lípidos son insolubles en agua. Cuando se agitan fuertemente en ella se dividen enpequeñísimas gotas formando una emulsión de aspecto lechoso, que es transitoria, puesdesaparece en reposo por reagrupación de las gotitas de grasa en una capa que, por su menordensidad, se sitúa sobre el agua. Por el contrario, las grasas son solubles en disolventes orgánicos, como el éter,cloroformo, acetona, benceno, etc. Su solubilidad en alcoholes dependerá del tamaño delmismo así como de su ramificación (a mayor número de carbonos más soluble será el lípidono así con la ramificación). Procedimiento: Tome 10 tubos de ensayo y añada a cada tubo 2 mL de cada una de las siguientessustancias o disolventes: Agua destilada, ácido clorhídrico concentrado, benceno,cloroformo, tetracloruro de carbono, éter, alcohol metílico, alcohol etílico, alcoholisopropílico, alcohol butílico . A todos los tubos añada 1 mL de aceite. Observe losresultados.III b) Número de yodo: Es una medida del grado de insaturación de los componentes de una grasa. Será tantomayor cuanto mayor sea el número de dobles enlaces (C=C) por unidad de grasa,utilizándose por ello para comprobar la pureza y la identidad de las grasas. Es la cantidad(gramos) de yodo absorbidos por 100 gramos de grasa. El número de yodo oscila entre 0 (ácidos grasos saturados) a 350. Fundamento teórico del método: La grasa disuelta se hace reaccionar con monobromuro de yodo en exceso. El yodopor sí mismo no reacciona con los dobles enlaces. En su lugar se utilizan bromo ohalogenados mixtos como yoduro de cloro ICl o el bromuro de yodo IBr. La cantidad demonobromuro de yodo que no se adiciona a los dobles enlaces oxida una solución deyoduro (I-) a yodo (I2), y éste se determina por valoración con una disolución de tiosulfatosódico (2Na2S2O3). La reacción de adición se lleva a cabo en oscuridad para evitar que seproduzcan reacciones laterales de radicales inducidos por la luz y ello provocaría un gastoaparente mayor de halógeno, falseando los resultados. A continuación se muestran las tresreacciones involucradas:
  21. 21. 1) IBr + R1-CH=CH-R2 → R1-CHBr-CHI-R2 2) IBr + KI → KBr + I2 3) I2 + 2Na2S2O3 → 2NaI + Na2S4O6 Procedimiento:1) Tomar dos matraces de 500 ml cada uno.Uno de ellos será nuestro matraz blanco o control y el otro, nuestro matraz experimento oproblema. Agrega las siguientes sustancias en sus debidos matraces.• Control: - 10 ml de Cloroformo. - 12 ml de yodo Hanus.• Experimento: - 10 ml de Cloroformo. - 12 ml de yodo Hanus. - 1.0 ml de aceite.2) Lleve estos dos matraces, debidamente tapados, a la oscuridad por un período de 30 mins.Agitar ambos matraces cada 5 minutos.3) Pasado este tiempo, retírelos de la oscuridad y agregue a cada matraz lo siguiente: • 7 ml de KI (solución de yoduro de potasio). Agitar. • 100 ml de agua destilada (lavar el tapón del matraz con esta agua para no perder yodo libre en él) quien añadirá volumen a la mezcla.4) Titular el exceso de yodo de cada matraz con tiosulfato de sodio 0.1N hasta que la mezclacontenida en cada matraz tome una coloración amarillenta. Una vez que esto suceda, tapecada matraz y agítelo para conseguir que cualquier cantidad de yodo libre quede atrapado enla capa de cloroformo y se ponga en contacto con la solución de yoduro de potasio.5) Agregue 1 ml de una solución de almidón al 1% como indicador para asegurarnos de queno quede yodo libre en la solución.6) Calcule el número de yodo para la muestra dada. Cálculos:Calcule los gramos de yodo absorbidos por cada 100 grs. de grasa.1) Para esto primero necesitamos saber qué cantidad de yodo se consumió en el matrazproblema. Esto lo conseguimos restando la cantidad de tiosulfato de sodio 0.1N requeridospor el blanco menos la cantidad de tiosulfato de sodio 0.1N requeridos por el problema yaque esto representa el tiosulfato equivalente al yodo absorbido por la materia grasa.Ej. Suponiendo que el matraz control consumió 50 ml de tiosulfato mientras que el experimento sóloconsumió 20 ml : 50-20 = 30ml que representan los ml de yodo consumidos ya que 1 ml de tiosulfatoequivale a 1 ml de yodo.2) Con una regla de tres busque los mililitros de yodo consumidos por 100 gramos de grasa.Ej. 10 gr de grasa (usados en el experimento) ---- 30 ml de yodos consumidos 100 gramos de grasa -----x
  22. 22. 3) Por ultimo ajuste estos ml de yodos a gramos que es lo que nos interesa. Esto lo puedeslograr por la siguiente regla de tres:Ej. 1ml de yodo ----- 0.0127 gramos de yodo. ml de yodos consumidos* ---- x * = resultado del cálculo anterior.4) Por ultimo debes calcular el número de yodo en base al peso de la grasa, calculando lamisma utilizando la formula de la densidad. D=m/V donde D = densidad, m = masa, V=volumen. D= 0.916 para la grasas.III c) Número de saponificación: La saponificación consiste en una hidrólisis alcalina de la preparación lipídica(conKOH o NaOH). Los lípidos derivados de ácidos grasos (ácidos monocarboxílicosdecadena larga) dan lugar a sales alcalinas (jabones) y alcohol, que son fácilmente extraíblesen medio acuoso. QuickTime™ and a TIFF (LZW) decompressor are needed to see this picture. El número de saponificación no es más que los miligramos de KOH necesarios parasaponificar 1 gramo de materia grasa. Esta prueba es otra prueba cualitativa que podemos aplicar a los lípidos. Esta nospermite ver si el tipo de lípido es saponificable (contiene ácidos grasos) o no (no contieneácidos grasos). En los lípidos saponificables nos orienta hacia cuál sería el peso molecular de lamolécula expresando una relación inversa entre esta molécula y el número de saponificación.Se describe una relación inversa ya que a menor peso de la molécula mayor cantidad demoléculas existirán en cierta cantidad grasa dada, así que mayor cantidad de ácidos grasoshabrán. Debido a esto último también habrán muchos grupos carboxílicos con los cualesreacciona el KOH. Por lo tanto, mayor cantidad de KOH consumida dará un número mayorde saponificación. Tomemos los dos ejemplos siguientes de Tripalmitina (PM=819)yTributirinina(PM=412). En 1 gramo de tributirina hay mayor número de moléculas detnglicéridos que en 1 gramo de tripalimtina, éste último por tener mayor peso molecular,completa el gramo de grasa con menor número de moléculas de triglicéridos.
  23. 23. QuickTime™ and a TIFF (LZW) decompressor are needed to see this picture. Efectivamente, teniendo en cuenta que el peso molecular de la tripalmitina es 819 y dela tributirina es 302, habrá 819/302 6 2.7 veces más moléculas de tributirina que detripalmitina en un mismo peso de cada una de las grasas indicadas. En conclusión, el númerode saponificación de la tributirina será también 2.7 veces mayor que el de la tripalnitina. Procedimiento:1) Tomar dos matraces de 250 mL cada uno.Agrega las siguientes en sus debidos matraces: • Control: - 50 mL de KOH • Experimento: - 50 mL de KOH. - 5mL de aceite.2) Conecte cada matraz a un condensador de reflujo enfriado por aire y lleve a baño de maríapor 30 minutos. Agite con frecuencia.3) Añada 1mL de fenolftaleína (indicador de medio básico) a cada matraz y luego titule conHCl 0.5N para corregir cualquier consumo de álcali del control. Anote los mL consumidospor cada matraz.4) Calcule el número de saponificación. Cálculos:Calcule los miligramos de KOH necesarios para saponificar 1 gramo de materia grasa.1) Para esto primero necesitamos saber qué cantidad de KOH que se consumió en el matrazproblema que lo conseguimos restando la cantidad HCl 0.5N consumidos por el blancomenos la cantidad de HCl 0.5N requeridos por el problema.Ej. Suponiendo que el matraz control consumió 50 mL de HCl mientras que el experimento sólo consumió20 mL : 50-20 = 30mL.2) Como lo deseado es saber los gramos de grasa y no los ml de ella, convierta los mLconsumidos a gramos con la fórmula de la densidad de la grasa: D=m/V donde D =densidad, m = masa, V= volumen. D= 0.916 para la grasas.Ej. 10 mL de aceite; m=D*V= 0.916*10mL=9.16gr.3) Con una regla de tres busque los mililitros de HCl consumidos por 1 gramo de grasa.Ej. 9.16 gr de grasa (usados en el experimento) ---- 30 mL de HCl consumidos
  24. 24. 1 gramos de grasa ---- -x4) Por ultimo ajuste estos mL de HCl a su equivalente en KOH que es lo que nos interesa.Esto lo puedes lograr por la siguiente regla de tres:Ej. 1mL de HCl ----- 28.05 mg de KOH. mL de HCl * ---- x *= resultado del cálculo anterior.LEER DE SU LIBRO DE TEXTO:LIPIDOS DE IMPORTANCIA FISIOLOGICA, FUNCIONES, CLASIFICACION,CARACTERISTICAS FISICO-QUIMICAS.
  25. 25. Laboratorio de Bioquímica y Biología Molecular I Noveno Laboratorio Ácidos Nucleicos I. IntroducciónEstructura Primaria.En todas las células vivas hay ácidos nucleicos; en su mayoría están constituyendo lasnucleoproteínas, complejos formados por proteínas básicas (protaminase histonas) y ácidosnucleicos. Desde que Miescher aislara por vez primera una nucleoproteína, en 1869, se hanpuesto a prueba numerosas técnicas para separar los ácidos nucleicos de las proteínas a lasque están unidas. Se sabe que no todos los ácidos nucleicos son iguales; en los tejidosconstituidos por células provistas de grandes núcleos, como el Timo, predomina un tipo deácido nucleico, llamado antes ácido timonucleico; en otras células, que tienen núcleosdiminutos, como las levaduras, predomina un tipo distinto: ácido nucleico de levadura. Estosdos tipos de ácidos nucleicos se denominan hoy, atendiendo a su composición química,ácido desoxirribonucleico (ADN) y ribonucleico (ARN) respectivamente.El ADN está fundamentalmente compuesto de fosfato, las bases púricas: adenina y guanina,las bases pirimídicas: timina y citosina, y el azúcar 2-desoxi-d-ribosa.El ARN difiere del ADN por contener la base pirimídicas uracilo en lugar de la timina y elazúcar d-ribosa en lugar de la 2-desoxi-d-ribosa.Los datos que hoy poseemos ponen de manifiesto la existencia de una fórmula químicabásica, común a ambos tipos de ácidos nucleicos y consistente en una cadena o esqueletoconstituido por grupos alternados de fosfato de azúcar furanosa unidos por enlaces regulares3’5’fosfodiester. Las bases púricas o pirimídicas se unen a este esqueleto o cadena de azúcar–fosfato a través de enlaces Beta–N–glicósilo en la posición 1’de la ribosa o de ladesoxirribosa.A cada sub-unidad estructural, formada por una base nitrogenada y un azúcar, se ledenomina nucleósido. A estos que contienen un fosfato en las posiciones 2’, 3’ ó 5’ se lesllama nucleótidos (el número seguido del signo (‘) indica la posición en la base. A loscompuestos formados por asociación de dos o más nucleótidos, constituyendo pequeñasmoléculas, se les denomina oligonucleótidos.Estructura Secundaria.Los diversos estudios fisioquímicos del ADN en solución acuosa han demostrado que setrata de un polímero del elevado peso molecular (5x10 elevado a la sexta potencia) y queofrece una configuración mas bien rígida y distendida. Entre las consecuencias de su elevadopeso molecular y de la rigidez de sus moléculas se destaca la elevada viscosidad de lassoluciones acuosas de ADN. Solución con 10–4 g/ml de ADN, es dos veces más viscosaque el agua. Otra consecuencia de las citadas propiedades de la molécula de ADN es la gran
  26. 26. facilidad con que las fuerzas de fricción (agitación a gran velocidad, paso a través de unapipeta o jeringa) reducen su peso molecular por rotura de su cadena. Es prácticamenteimposible obtener a partir de material biológico ADN sin que tenga cierto grado de fricción,por lo que es muy probable que los pesos moleculares del ADN aislado (5x10 a la sextapotencia) tengan poco que ver con el tamaño de la molécula del ADN en vitro.El ADN fibroso aislado tiene un modelo de difracción de rayos X muy neto, indicioexperimental directo de una estructura secundaria muy regular. Watson y Crick propusieronen 1953 una estructura secundaria del ADN, que dedujeron de éstos modelos de difracciónde rayos X, y que estaban de acuerdo con las observaciones de Chargaff (4), mostrando queciertos pares de base de ADN, se presentan en cantidades equimoleculares. Esta estructurade Watson y Crick está constituida por dos cadenas de ADN que se enrollan helicoidalmenteen torno a un eje central común, originando una molécula de cadena doble y de unos 20Amgstron de diámetro. Las cadenas de azúcar-fosfato están situadas en la parte externa deestas hélices orientadas con dirección de enrollamiento a la derecha; las bases púricas ypirimídicas se encuentran enlazadas por puentes de hidrógeno, en la parte interna de lascitadas hélices, con los planos de sus anillos orientados perpendicularmente al eje central.Sólo se tolera el apareamiento de bases entre la adenina y la timina o uracilo, en el caso delRNA, y entre la guanina y citosina.Nucleoproteínas.Como se dijo anteriormente, los ácidos nucleicos se encuentran conjugados con proteínas.Las nucleoproteínas el ADN y ARN pueden degradarse en sus components y seridentificados por separados. II. Objetivos1. Estudiar los ácidos nucleicos: clasificación, diferencias estructurales y funcionales,localización y sus componentes.2. Analizar la importancia de la homogenización de las levaduras, pruebas de Bial, Biuret y deidentificación de fosfatos y bases nitrogenadas en el reconocimiento de los componentes queformas los ácidos nucleicos. III. Procedimiento1. Suspenda 15 grs de levadura en 125 ml de NaOH 0.04 M y homogenice con licuadorpor 5 minutos. Transfiera el contenido a un matraz Erlemeyer y caliente en un baño deMaría por 20 minutos. Luego debe centrifugar por 3 minutos y tomar el sobrenadante elcual llevará a un beaker (250ml) donde le agregarán gotas de ácido acético glacial hasta que elmedio este ácido.2. Tome la muestra y agregue 100mL de una solución de HCl/Etanol 95% (1:99).Proceda a centrifugar por 3 minutos. Tome precipitado y lave con Etanol 95%. Centrifuguenuevamente, tomando luego el precipitado. - Tome una muestra del precipitado y haga la prueba de Biuret.
  27. 27. 3. A cada tubo de ensayo con el precipitado restante de la muestra agregue 3mL deH2SO4 3N y lleve a baño de maría durante 3 minutos. Hecho esto realice las siguientespruebas:A. Identificación de la Ribosa.Tome 4 tubos de ensayo y agregue lo siguiente en cada uno: Tubo Sustrato Reactivo de Bial HCL concentrado 1 1 ml Agua destilada 1 ml 2.5 ml 2 1 ml de ribosa 1% 1 ml 2.5 ml 3 1 ml de ribosa 0.5% 1 ml 2.5 ml 4 1 ml del precipitado 1 ml 2.5 mlLleve al calor por 5 minutos o hasta que observe un cambio de color.El reactivo de Bial está compuesto por iones férricos, etanol y orcinol. Consiste en laformación de un producto de color azul-verdoso entre el furfural y el orcinol en medioclorhídrico. Es específico de pentosas.B. Identificación Base Nitrogenada.Agregue gotas de Hidróxido de amonio (NH4OH) concentrado hasta obtener un mediobásico y algunas gotas de Nitrato de Plata 0.1 M a una pequeña cantidad del precipitadoobtenido que ha sido colocado en un tubo de ensayo. Observe.C. Identificación de Fosfatos.Agregue un poco del precipitado en un tubo de ensayo y añada Hidróxido de Amonio(NH4OH) concentrado hasta obtener un medio básico, acidifique con algunas gotas deHNO3 y agregue Molibdato de Amonio (1mL). Observe.LEER DE SU LIBRO DE TEXTO LA ESTRUCTURA Y FUNCION DE LOSACIDOS NUCLEICOS

×