Interpretación de pruebas dx prrs

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Interpretación de pruebas dx prrs

  1. 1. Virus del Síndrome Reproductivo y Respiratorio del cerdo PRRS Interpretación de pruebas diagnósticas Diplomado en Medicina y Producción Porcina. FMVZ-UNAM 2013-2014 Juan Manuel Palacios Mc
  2. 2. Definición • Infección viral de los porcinos causada por un Arterivirus de dos orígenes; Europeo ( Cepa Lelystad) y Americana ( Cepa VR-2332) la cual provoca signos reproductivos en pie de cría y signos respiratorios en cerdos de la línea de producción. La cepas virales pueden tener diversos grados de virulencia y son altamente susceptibles a variaciones genéticas.
  3. 3. Circulación del virus en granja REEMPLAZOS PIE DE CRIA DESTETES ENGORDAS
  4. 4. Interpretación de prueba diagnósticas • Las pruebas diagnósticas se utilizan para determinar la circulación viral y o la respuesta de anticuerpos al virus sin embargo se deberá identificar la situación de la granja con base a su categoría de infección.
  5. 5. Clasificación estándar de hatos con infecciones por virus PRRS • Categoria 1. Positivo Inestable. Pie de cría con eliminación viral y respuesta a anticuerpos. Línea de producción con eliminación y anticuerpos. • Categoria 2. Positivo Estable. Pie de cría con anticuerpos sin signologia clínica. Sin viremia en lechones y cerdos de engorda sin signos, viremia ó anticuerpos por 90 días.
  6. 6. Clasificación. • Categoría 3. Negativo provisional. Pie de cría sin excreción pero con anticuerpos. Introducción de reemplazos negativos y permanencia por lo menos de 60 días en ese estado. • Categoria 4. Negativo. Pie de cría negativo a excreción y anticuerpos. Línea de producción negativa a anticuerpos Holtkamp D. 2010
  7. 7. Para determinar que elemento de la infección será identificado por las pruebas diagnósticas es necesario conocer su dinámica.
  8. 8. Pruebas serológicas para la detección del virus de PRRS • Prueba de ELISA. HerdCheck IDDEX. Punto de corte sp: ≥0.4, Sensibilidad 100%, Especificidad 99.5%, detecta anticuerpos contra cepas Europeas y Americanas. • IFA. Inmunofluorescencia; alta especificidad pero la sensibilidad puede variar de acuerdo a la técnica de laboratorio utilizada. • Prueba de Seroneutralización. Menos sensible que las anteriores y hay que tener precaución en su interpretación ya que no existe una completa correlación entre títulos seroneutralizantes, inmunidad y protección.
  9. 9. Conclusiones • La interpretación de pruebas diagnósticas para la infección con virus de PRRS. • 1.- Determina la categoría infecciosa de la granja. • 2.- Determina el grado de riesgo en la introducción de reemplazos. • 3.- Diagnostica infecciones que pueden estar asociadas con otros agentes. • 4.- Determina la introducción de nuevas cepas aparte de la vacunal.
  10. 10. Utilización de la serología • Determinación del estatus de infección de los reemplazos. • Determinar la dinámica de infección en la línea de producción. • En los sementales.
  11. 11. Serología a PRRS en cerdas de reemplazo desde su selección hasta su entrada al hato reproductivo. Respuesta PRRS Respuesta a vacunación 1.4 Probable exposición a virus de campo. 1.2 Ingreso negativo sp 1 0.8 0.6 0.4 0.2 0 7dias 42dias 70dias 105dias Edad en días 154dias 203dias
  12. 12. Interpretación reemplazos • Determinar el estatus de la fuente, ya sea interna (auto-reemplazo) ó externa. • Respuesta a vacunaciónes o aplicación de inóculos homólogos. • Enfriamiento; determina si las hembras ingresan negativas o aún con un proceso de infección.
  13. 13. La serología en la línea de producción permite conocer los puntos de infección. Serología a PRRS 1.8 1.6 1.4 Infección en las áreas de crecimiento y engorda. Inmunidad pasiva 1.2 1 0.8 PRRS 0.6 0.4 0.2 Destetes negativos 20SEM 20SEM 20SEM 20SEM 20SEM 15SEM 15SEM 15SEM 15SEM 15SEM 10SEM 10SEM 10SEM 10SEM 10SEM 7SEM 7SEM 7SEM 7SEM 7SEM 3SEM 3SEM 3SEM 3SEM 3SEM 0
  14. 14. Los sementales siempre deben ser NEGATIVOS, el virus se excreta por semen y puede ser la causa de diseminación.
  15. 15. Limitaciones de las pruebas serológicas • 1.- Una muestra no es suficiente elemento para dar un diagnóstico. • 2.- No diferencia vacunación de infección. • 3.- LA variación antigénica del virus de campo puede afectar el resultado, en especial para las pruebas de IFA y seroneutralización. • 4.- No predicen la excreción o grado de portador en el hato.
  16. 16. Pruebas de PCR. • • • • Son utilizadas para: a) Confirmar el diagnóstico. b) Determinar puntos y grados de viremia c) Correlacionar con signos sugerentes de infección
  17. 17. Permite conocer la frecuencia de infección en cada caseta. rtPCR-PRRS cuantitativo por caseta 1E+09 10000000 10000000 1000000 100000 10000 1000 100 10 1 Caseta Caseta Caseta Caseta Caseta Caseta Caseta Caseta Caseta Caseta Caseta Caseta Caseta Caseta Caseta Caseta 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16
  18. 18. Se puede utilizar en diversos tejidos Fetos Ganglios y pulmón Suero
  19. 19. Limitaciones • Los falsos negativos, básicamente por las variaciones genéticas en los segmentos amplificados. • Usualmente se utilizan los ORF´s (Open Reading Frames) 6 y 7 en donde el genoma está más conservado. Algunos laboratorios también utilizan el ORF5
  20. 20. Interpretando las pruebas de PCR • 1.- Puede haber diferencias entre diferentes laboratorios por cuestiones de técnica y reactivos. • 2.- Las pruebas positivas no necesariamente representan virus con capacidad infectante. • 3.- Se utiliza en combinación con serología para determinar la categoría de cada hato.
  21. 21. Prueba de RFLP ( Restriccion Fragment lenght of Polymorphism) • Técnica que digiere el ORF 5 en diversos fragmentos mediante el uso de tres enzimas de restricción denominadas; MluI, HincII y SacII generando un código de tres dígitos.
  22. 22. El código para la cepa vacunal* por está técnica es el 2-5-2 2 * Ingelvac . PRRS Boheringer-Ingelheim 5 2
  23. 23. Uso de la técnica RFLP • Diferencia la cepa vacunal de otra de campo y registra la introducción de nuevas cepas en un hato. • Existe otra vacuna ( Ingelvac PRRS ATP) con un patrón diferente, 1-4-2
  24. 24. Interpretación de las pruebas de RFLP • Utilizada como un producto del PCR para monitorear nuevas introducciones virales. • Diferencias cepas en hatos vacunados. • No determina virulencia de las cepas. • No correlaciona con protección ó eficacia de la vacuna. • El ORF5 solo representa el 4% del genoma completo por lo cual su corte no es concluyente de variaciones genéticas.
  25. 25. Secuenciación
  26. 26. Usos de la secuenciación • No es un método diagnóstico • Se utiliza para monitorear cepas en una hato o en una región. • Método para diferenciar cepas vacunales de virus de campo en granjas con alta presión infecciosa. • No es predictor de virulencia o eficacia vacunal.
  27. 27. Conclusiones • El diagnóstico de PRRS se enfoca a detectar el cambio de status de una granja de estable o negativa hacia inestable. • La detección de anticuerpos nos indica por donde se dio el ingreso del virus ( reemplazos, sementales, línea de producción) • La detección de antígeno confirma el diagnóstico. • La prueba de RFLP descarta la presencia de un virus vacunal. • La s pruebas de secuenciación y el uso de dendrogramas son herramientas utilizadas en la epidemiología de la enfermedad en una región.

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