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METABOLISMO DE LAS
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E.A.P AGROINDUSTRIAL
GRUPO:

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METABOLISMO DE LAS PROTEINAS
I.

INTRODUCCION

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3.3. Material de vidrio
Placas Petri
Tubos de ensayo...
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 DEGRADACION DE COMPUESTOS AMINADOS
Hidrolisis de l...
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Agar Gelatina
o Sembramos Pseudomona yE.Coli por med...
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5. RESULTADOS

CALDO TRIPTONADO
 (Producción del Ind...
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Dejamos reposar 24h, luego llevamos a ...
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RESULTADOS MOSTRADOS EN FOTOGRAFÍAS.

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De este modo en 1970 y principios de 1980A.Ciechanove...
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Metabolismo de las proteinas

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Metabolismo de las proteinas

  1. 1. METABOLISMO DE LAS PROTEINAS UNIVERSIDAD NACIONAL DEL SANTA FACULTAD DE INGENIERIA E.A.P AGROINDUSTRIAL GRUPO: “B” DOCENTE: Blgo.Mblgo. Eterio Alva Muñoz CÓDIGO: 0201212051 Alumno: VEGA VIERA JHONAS ABNER. CICLO:“IV” 2013 –
  2. 2. UNIVERSIDAD NACIONAL DEL SANTA FACULTAD DE INGENIERÍA AGROINDUSTRIAL METABOLISMO DE LAS PROTEINAS I. INTRODUCCION Las bacterias son muy versátiles en la degradación de polímeros. Sin embargo, existen microbios que son más activos frente a ciertos compuestos. Los proteolíticos, se caracterizan por ser degradadores de proteínas en forma más activa que otras, de igual manera los amilos líticos, los lipoliticos, hemolíticos, etc. Existen microorganismos que se comportan como proteolíticos, amilo lítico, lipoliticos, etc. Debido a que tienen un sistema enzimático muy versátil. La degradación se puede demostrar por la aparición de unidades monómeras derivados de los compuestos poliméricos, así, de las proteínas, se obtendrán aminoácidos, y a partir de estos derivados como el indol, escatol, ácido sulfhídrico, amoniaco, etc. La degradación de compuestos nitrogenados se evidencia por la aparición de amoniaco u otros compuestos. Siempre que existan las condiciones adecuadas, el microorganismo y el sustrato a degradarse, aparecerán compuestos producto de la degradación. II. OBJETIVOS Demostrar la acción de las bacterias frente a compuestos poliméricos nitrogenados, como proteínas, urea, etc. Demostrar que no todas las bacterias tienen la capacidad de degradar ciertos compuestos. Observar la presencia de algunos compuestos de la degradación de proteínas por medio de reactivos de lectura. III. MATERIALES Y METODOS MATERIAL: 3.1. Material biológico Cultivos puros de Escherichiacoli, Pseudomonas y Proteusvulgaris 3.2. Medios de cultivo Medio Urea Medio Gelatina Caldo Tríptonado
  3. 3. UNIVERSIDAD NACIONAL DEL SANTA FACULTAD DE INGENIERÍA AGROINDUSTRIAL 3.3. Material de vidrio Placas Petri Tubos de ensayo 13x100mm 3.4. Otros Asa bacteriológica Mechero, otros METODOS:  DEGRADACION DE PROTEINAS Licuefacción de la gelatina. La gelatina es una proteína capaz de dar consistencia solida al medio de cultivo a temperaturas cercanas a los 10ºC. Los microorganismos capaces de degradarla gelatina quitan la propiedad solida a la temperatura mencionada. En los tubos conteniendo medio de gelatina se ha sembrado Pseudomonas y E.coli, se ha llevado a incubar a 37ºC/24h, hacer las lecturas de licuefacción de la gelatina.  PRODUCCION DE INDOL Y H2S Ciertos microbios son capaces de degradar al triptófano en indol, otros en degradar los aminoácidos azufrados y producir la liberación del ácido sulfhídrico (H2S) y finalmente otros producen las dos cosas. Se ha sembrado a E.coli, Citrobacter y Proteusvulgaris y se ha llevado a incubar a 37ºC/24h.Hacer las lecturas
  4. 4. UNIVERSIDAD NACIONAL DEL SANTA FACULTAD DE INGENIERÍA AGROINDUSTRIAL  DEGRADACION DE COMPUESTOS AMINADOS Hidrolisis de la Urea. De la hidrolisis de la urea se libera el amoniaco y como resultado el medio se torna alcalino haciendo virar el indicador de pH al color grosella. Se ha sembrado Proteus y E.coli. Se ha llevado a incubar a 37ºC/24h. Hacer las lecturas. 4. PROCEDIMIENTO. Agar Urea o Sembramos Pseudomona, Proteus y E.Coli por medio de picadura y estría. Esterilizamos el asa bacteriológica POR PICADURA Esterilizamos el tubo antes de realizar la siembra POR ESTRÍA
  5. 5. UNIVERSIDAD NACIONAL DEL SANTA FACULTAD DE INGENIERÍA AGROINDUSTRIAL Agar Gelatina o Sembramos Pseudomona yE.Coli por medio de picadura. Esterilizamos los instrumentos a usar antes de cada siembra mediante picadura Agar Triptongado o Sembramos Proteus y E.Coli por medio de puntura, usando la asa bacteriológica de punta redonda. Esterilizamos los instrumentos a usar antes de cada siembra mediantepuntura (agitamos el asa de punta redonda dentro del tubo que contiene el agar Triptonado)
  6. 6. UNIVERSIDAD NACIONAL DEL SANTA FACULTAD DE INGENIERÍA AGROINDUSTRIAL 5. RESULTADOS CALDO TRIPTONADO  (Producción del Indol) Positivo: anillo de color rosado a rojo tras agregarle el reactivo (E.coli), (CitrobacterFreundii). Negativo: Sin cambio de color tras el agregado del reactivo adecuado. (Proteus). La prueba del indol estudia la capacidad de degradar el triptófano con producción de Indol y metabolitos indólicos.  (Producción de H2S) Negativo: (E.coli), (CitrobacterFreundii). Positivo: (Proteus). DEGRADACIÓN DE COMPUESTOS AMINADOS En la prueba con el agar urea podemos notar que el único microorganismo que reacciona es el Proteusvulgaris, ya que este produce ureasa que es la enzima que permite hidrolizar la urea. Por lo tanto el cambio de pH hará que cambie de color a grosella lo que indica la liberación de amoniaco.
  7. 7. UNIVERSIDAD NACIONAL DEL SANTA FACULTAD DE INGENIERÍA AGROINDUSTRIAL AGAR GELATINA Dejamos reposar 24h, luego llevamos a refrigerar de 3 a 4 horas. Solo el tubo de ensayo que contenía Pseudomonas cambio de consistencia, ya que este microorganismo puede hidrolizar la gelatina debido a que produce enzimas del tipo proteolíticas (Licuando la gelatina). Sin embargo el tubo de ensayo que contenía E.coli se conservó igual (consistencia gelatinosa), debido a que esta bacteria no es capaz de hidrolizar la gelatina.
  8. 8. UNIVERSIDAD NACIONAL DEL SANTA FACULTAD DE INGENIERÍA AGROINDUSTRIAL RESULTADOS MOSTRADOS EN FOTOGRAFÍAS. 6. CUESTIONARIO  ¿Qué importancia tiene el estudio de la degradación de proteínas? La degradación proteica es un mecanismo esencial en varios procesos celulares, incluyendo el ciclo celular, la regulación de la expresión génicay las respuestas al estrés oxidativo. La importancia de la degradación proteica dentro de las células y el rol de la ubiquitina en dicho proceso fue reconocido con el Premio Nobel de Química en 2004. Cabe decir también que la degradación ayuda a las proteínas que van estropeando y es necesario “reciclarlas” para crear otras nuevas. Continuamente se generan nuevas proteínas a partir de antiguas, pero antes ha habido que desmontarlas.
  9. 9. UNIVERSIDAD NACIONAL DEL SANTA FACULTAD DE INGENIERÍA AGROINDUSTRIAL De este modo en 1970 y principios de 1980A.Ciechanover, A. Hershko e I.descubrieron y caracterizaron el sistema de degradación de proteínas mediado por ubiquitina, ya que en esos años, la investigación estaba centrada en el estudio de síntesis proteica y no se planteaba el estudio de su degradación. Y es que las proteínas se van estropeando y es necesario “reciclarlas” para crear otras nuevas. Continuamente se generan nuevas proteínas a partir de antiguas, pero antes ha habido que desmontarlas.  ¿fundamente la hidrolisis de las proteínas en la formación de indol y ácido sulfhídrico? PRODUCCIÓN DE INDOL El indol es uno de los productos de degradación metabólica del aminoácido triptófano también podemos decir que Esta prueba se realiza para determinar la capacidad de las bacterias para producir indol a partir del triptófano; en la que las bacterias que poseen la triptofanasa son capaces de hidrolizar y desaminar el triptofano con producción de indol, ácido pirúvico y amoníaco. La producción de indol es una característica importante para la identificación de muchas especies de microorganismos. La prueba de indol está basada en la formación de un complejo rojo cuando el indol reacciona con el grupo aldehído del pdimetilaminobenzaldehído. Este es el principio activo de los reactivos de Kovacs y Ehrlich descriptos más adelante. El medio de cultivo utilizado debe ser rico en triptofano. El indol, ácido pirúvico y amoniaco son uno de los productos de degradación metabólica del aminoácido triptofano. Qué compuestos se obtienen mediante la degradación del triptófano ocasionada por la acción bacterial? El enrojecimiento de la capa superficial del cultivo en tubo de ensayo ¿Qué le indica? El desarrollo de un vivo color rojo fucsia en la interfase del reactivo y el caldo, segundos después de añadir el reactivo indica la presencia de indol y una prueba positiva.
  10. 10. UNIVERSIDAD NACIONAL DEL SANTA FACULTAD DE INGENIERÍA AGROINDUSTRIAL PRODUCCIÓN DE ÁCIDO SULFHÍDRICO Muchas bacterias producen sulfuro de hidrógeno (sulfhídrico) a partir de aminoácidos azufrados (cisteína o metionina) o tiosulfato. El sulfuro de hidrógeno, denominado ácido sulfhídrico en disolución acuosa (H2Saq), es un hidrácido de fórmula H2S. Este gas, más pesado que el aire, es inflamable, incoloro, tóxico, odorífero: su olor es el de materia orgánica en descomposición, como de huevos podridos. A pesar de ello, en el organismo humano desempeña funciones esenciales. El ácido sulfhídrico se encuentra naturalmente en petróleo «crudo» (no procesado), gas natural, gases volcánicos y manantiales de aguas termales. También puede existir en aguas pantanosas, lagunas o aguas estancadas, desagües, estanques de harina o de aceite de pescado, barcos pesqueros y alcantarillados.  ¿Explique el cambio de color en la hidrolisis de la urea? Ésta será degradada por aquellos microorganismos capaces de producir el enzima ureasa. Esta degradación produce amoniaco que hará variar el color del indicador de amarillo a rojo, poniéndose así de manifiesto la actividad ureasa. Para revelar el resultado de esta prueba es importante tener en cuenta el tiempo de incubación ya que especies de Proteus vuelven alcalino el medio poco después de la inoculación y sus resultados deben ser leídos en las primeras 2-6 horas, mientras que Citrobacterfreundii y Klebsiellapneumoniae tienen actividad ureasa dentro de las 24-48 horas de incubación. 7. DISCUSIÓN En esta prueba se pretende determinar la capacidad de un microorganismo de producir enzimas de tipo proteolíticas (gelatinasas) que licuan/hidrolizan la gelatina o muestran cambios característicos debido a los productos de degradación. La gelatina como proteína derivada del colágeno animal es hidrolizada por la gelatinasa en sus aminoácidos constituidos, con pérdida de sus características gelificantes. Se genera el indol por una desaminación reductiva del triptófano vía la molécula intermediaria ácido indolpirúvico. Las triptofanasas catalizan la reacción de desaminación, durante el cual se remueve el grupo amino (NH2) de la molécula de triptófano. Los productos finales de la reacción son el indol, ácido pirúvico, amoníaco (NH3) y energía.
  11. 11. UNIVERSIDAD NACIONAL DEL SANTA FACULTAD DE INGENIERÍA AGROINDUSTRIAL Cuando una bacteria contiene la enzima ureasa puede descomponer la urea. Los productos de esta reacción de hidrólisis son el amoniaco y el dióxido de carbono. Por sí mismo, esto no sería perceptible. Cuando la reacción se produce en presencia de indicadores de pH, sin embargo, produce un color perceptible. El amoníaco provoca un pH básico (alcalino) a desarrollar y el indicador de pH cambiará, por lo tanto, de color. El indicador más comúnmente utilizado para esta prueba es de color rojo fenol, que se vuelve de color rosa después de la exposición al amoniaco. 8. CONCLUSIONES Hay muchos tipos de bacterias. Algunas son dañinas, algunas son beneficiosas y otras no son ni lo uno ni lo otro. La capacidad de distinguir entre estas bacterias es crucial para la prevención y el tratamiento de enfermedades. A menudo, las bacterias pueden ser identificadas por su capacidad para reaccionar con compuestos químicos. La urea es uno de tales compuestos y la prueba de hidrólisis de la urea se utiliza para distinguir unos grupos de bacterias de los otros. 9. BIBLIOGRAFIA  http://microcereus.blogspot.com/2012/05/gelatina-nutritiva-peptona-yel.html  http://books.google.com.pe/books?id=FYWSzy7EjR0C&pg=PA214&dq=pro duccion+de+indol&hl=es&sa=X&ei=PhCcUrKUIYK3sASb0wE&ved=0CC4Q6 AEwAA#v=onepage&q=produccion%20de%20indol&f=false  http://www.monografias.com/trabajos28/metabolismobacteriano/metabolismo-bacteriano.shtml  MacFaddin, Jean F. "Biochemical Tests for Indentification of Medical Bacteria." Williams &Wilkins, 1980, pp 173 - 183.  PELCZAR. M. J, Introducción a la microbiología.

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