1. UNIVERSIDAD TECNICA PARTICULAR DE LOJA ESCUELA DE BIOQUIMICA Y FARMACIA “ EVALUACIÓN DEL EFECTO GENOTÓXICO DE LA ARGENTATINA B MEDIANTE EL ENSAYO DE CBMN EN CÉLULAS MCF-7 (CÁNCER DE MAMA)” Previo a la obtención del título de Bioquímico Farmacéutico AUTORIA: Lorena Elizabeth Palacios Arrobo DIRECTORA: Dra. Natalia Bailón Moscoso Loja – Ecuador 2009

2. Grupo de más de 100 enfermedades. Crecimiento descontrolado de las células debido a cambios en los mecanismos de proliferación, diferenciación y muerte celular. CÁNCER

3. Ecuador 12.000 1.615 American Cancer Society 2007 CÁNCER Yépez , 2006 Garrido et al ., 2003

4. CA Cancer J Clin 2006;56:106–130 CÁNCER

5. CÁNCER

7. De los agentes aprobados por la FDA para el tratamiento del cáncer, aproximadamente el 65% son metabolitos secundarios o análagos semi-sintéticos o sintéticos basados en farmacóforos obtenidos de metabolitos secundarios. Newman, D.J. and Cragg, G.M. Natural Products as Sources of New Drugs over the Last 25 Years. J. Nat. Prod., 70, 3, 461 - 477, 2007

9. Parthenium argentatum . ARGENTATINA B Parra, 2005 Evaluation of the cytoticity, cytostaticity and genotoxicity of Argentatina A and Argentatina B from Partheniium argentatum (Gray). Life Sciences 77, 2844-2865.

14. Argentatina B Viabilidad (FDA) CBMN 5, 15 y 25 uM MCF-7

15. 37ºC 5% de CO 2 24 horas 3x10 5 células Células MCF-7 3 REPETICIONES 54 PLACAS 200 CÉLULAS ESQUEMA VIABILIDAD (FDA) 37ºC 5% de CO 2 24 horas Argentatina B DMSO 5 uM 15 uM 25 uM DOX DOXORUCINA DMSO 0.05 uM 0.1uM 0.075 uM PBS RPMI FDA PBS EtBr Células + VIVAS MUERTAS

16. 37ºC 5% de CO 2 24 horas 3x10 5 células Células MCF-7 3 REPETICIONES 54 PLACAS ESQUEMA CBMN Fijador de Carnoi 3:1 Tinción 37ºC 5% de CO 2 24 horas ARGENTATINA B DMSO 5 uM 15 uM 25 uM DOX DOX DMSO 0.05 uM 0.1uM 0.075 uM

17. CITOSTACIDAD GENOTOXICIDAD 200 células mono, bi y tetra IDN = {CMN + 2 (CBN) + 3 (CPN)} / N 54 PLACAS ESQUEMA CBMN Frecuencia de MN en 1000 CBN

18. Gráfica No. 1 Porcentaje de viabilidad (FDA) de MCF-7 tratados con Doxorubicina. Cada barra representa la media ± EE de tres experimentos independientes que se realizaron por duplicado. P < 0.001 ACTIVIDAD CITOTÓXICA DE LA DOX

19. Gráfica No. 2 Índice de división nuclear calculado para la Doxorubicina. Cada barra representa la media ± EE de tres experimentos independientes por duplicado. P<0,05.

20. Gráfica No. 3 Efecto de la Doxorubicina en relación al control negativo (DMSO 0.1%) sobre la frecuencia de CBN con MN. Las barras representan la media ± EE de tres experimentos independientes por duplicado.P >0,001

21. Gráfico No. 4 Porcentaje de viabilidad de MCF-7 tratadas con Argentatina B y DOX (0.1uM). Cada barra representa la media de tres experimentos independientes con su respectivo error estándar cada uno por duplicado. p < 0,001 ACTIVIDAD CITOTÓXICA DE LA ARGENTATINA B

23. Gráfica No. 6 Efecto de la Argentatina B (5, 15, y 25 uM) y DOX (0.1 Um) sobre la frecuencia de CBN con MN. Las barras representan la media ± EE de tres experimentos independientes por duplicado. P > 0,001 Parra, 2005 .

25. GRACIAS…