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UNIVERSIDAD TECNICA PARTICULAR DE LOJA ESCUELA DE BIOQUIMICA Y FARMACIA “ EVALUACIÓN DEL EFECTO GENOTÓXICO DE LA ARGENTATI...
Grupo de más de 100 enfermedades. Crecimiento descontrolado de las  células debido a cambios en  los mecanismos de prolife...
Ecuador 12.000 1.615 American  Cancer Society 2007 CÁNCER Yépez ,  2006 Garrido  et al ., 2003
CA Cancer J Clin 2006;56:106–130 CÁNCER
CÁNCER
<ul><li>Cirugía </li></ul><ul><li>Radioterapia </li></ul><ul><li>Quimioterapia </li></ul>ANTINEOPLASICOS TRATAMIENTO DEL C...
De los agentes aprobados por la FDA para el tratamiento del  cáncer, aproximadamente el 65%  son  metabolitos secundarios ...
<ul><li>Triterpenos </li></ul><ul><ul><li>Alcaloides de la vinca </li></ul></ul><ul><ul><li>Epipodofilotoxinas </li></ul><...
Parthenium argentatum .  ARGENTATINA B Parra, 2005  Evaluation of the cytoticity, cytostaticity and genotoxicity of Argent...
ARGENTATINA B: estudios realizados en LINFOCITOS HUMANOS Parra, 2005  Evaluation of the cytoticity, cytostaticity and geno...
ENSAYO DE MICRONUCLEOS CON BLOQUEO DE CITOCINESIS <ul><li>Citocalasina B (impide  citocinesis celular)  </li></ul><ul><li>...
<ul><li>EN UNA DE LAS LINEAS CELULARES EN QUE LA ARGENTATINA B TIENE ACTIVIDAD CITOTOXICA,  PROBABLEMENTE NO PRESENTE  ACT...
<ul><li>Evaluar el efecto genotóxico de la Argentatina B mediante el ensayo de CBMN en células MCF-7 (cáncer de mama). </l...
Argentatina B Viabilidad (FDA) CBMN 5, 15 y 25 uM MCF-7
37ºC  5% de CO 2 24 horas  3x10 5  células Células MCF-7 3 REPETICIONES  54 PLACAS 200 CÉLULAS ESQUEMA VIABILIDAD (FDA) 37...
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CITOSTACIDAD GENOTOXICIDAD 200 células mono, bi y tetra IDN = {CMN + 2 (CBN) + 3 (CPN)} / N 54 PLACAS ESQUEMA CBMN Frecuen...
Gráfica No. 1  Porcentaje de viabilidad (FDA) de MCF-7 tratados con Doxorubicina.  Cada barra representa la media ± EE de ...
Gráfica No. 2  Índice de división nuclear calculado para la Doxorubicina.  Cada barra representa la media ± EE de tres exp...
Gráfica No. 3  Efecto de la Doxorubicina en relación al control negativo (DMSO 0.1%) sobre la frecuencia de CBN con MN.  L...
Gráfico No. 4  Porcentaje de viabilidad de MCF-7 tratadas con Argentatina B y DOX (0.1uM).  Cada barra representa la media...
Gráfica No. 5  Índice de división nuclear calculado para las células MCF-7 tratados con Argentatina B. La doxorubicina se ...
Gráfica No. 6  Efecto de la Argentatina B (5, 15, y 25 uM) y DOX (0.1 Um)  sobre la frecuencia de CBN con MN.  Las barras ...
<ul><li>Las concentraciones probadas de Argentatina B no afectan la  </li></ul><ul><li>viabilidad de las células MCF-7, pu...
GRACIAS…
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“EVALUACIÓN DEL EFECTO GENOTÓXICO DE LA ARGENTATINA B MEDIANTE EL ENSAYO DE CBMN EN CÉLULAS MCF-7 (CÁNCER DE MAMA)”

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“EVALUACIÓN DEL EFECTO GENOTÓXICO DE LA ARGENTATINA B MEDIANTE EL ENSAYO DE CBMN EN CÉLULAS MCF-7 (CÁNCER DE MAMA)”

  1. 1. UNIVERSIDAD TECNICA PARTICULAR DE LOJA ESCUELA DE BIOQUIMICA Y FARMACIA “ EVALUACIÓN DEL EFECTO GENOTÓXICO DE LA ARGENTATINA B MEDIANTE EL ENSAYO DE CBMN EN CÉLULAS MCF-7 (CÁNCER DE MAMA)” Previo a la obtención del título de Bioquímico Farmacéutico AUTORIA: Lorena Elizabeth Palacios Arrobo DIRECTORA: Dra. Natalia Bailón Moscoso Loja – Ecuador 2009
  2. 2. Grupo de más de 100 enfermedades. Crecimiento descontrolado de las células debido a cambios en los mecanismos de proliferación, diferenciación y muerte celular. CÁNCER
  3. 3. Ecuador 12.000 1.615 American Cancer Society 2007 CÁNCER Yépez , 2006 Garrido et al ., 2003
  4. 4. CA Cancer J Clin 2006;56:106–130 CÁNCER
  5. 5. CÁNCER
  6. 6. <ul><li>Cirugía </li></ul><ul><li>Radioterapia </li></ul><ul><li>Quimioterapia </li></ul>ANTINEOPLASICOS TRATAMIENTO DEL CÁNCER
  7. 7. De los agentes aprobados por la FDA para el tratamiento del cáncer, aproximadamente el 65% son metabolitos secundarios o análagos semi-sintéticos o sintéticos basados en farmacóforos obtenidos de metabolitos secundarios. Newman, D.J. and Cragg, G.M. Natural Products as Sources of New Drugs over the Last 25 Years. J. Nat. Prod., 70, 3, 461 - 477, 2007
  8. 8. <ul><li>Triterpenos </li></ul><ul><ul><li>Alcaloides de la vinca </li></ul></ul><ul><ul><li>Epipodofilotoxinas </li></ul></ul><ul><ul><li>Taxanos </li></ul></ul>Se han descrito más de 100 triterpenos con actividad citotóxica.
  9. 9. Parthenium argentatum . ARGENTATINA B Parra, 2005 Evaluation of the cytoticity, cytostaticity and genotoxicity of Argentatina A and Argentatina B from Partheniium argentatum (Gray). Life Sciences 77, 2844-2865.
  10. 10. ARGENTATINA B: estudios realizados en LINFOCITOS HUMANOS Parra, 2005 Evaluation of the cytoticity, cytostaticity and genotoxicity of Argentatina A and Argentatina B from Partheniium argentatum (Gray). Life Sciences 77, 2844-2865. <ul><li>Fig. 3. Nuclear división index, calculated for argentatin B tested at 5, 15 and 25 uM and mitomycin C at 1 uM. (P<0.001) </li></ul>
  11. 11. ENSAYO DE MICRONUCLEOS CON BLOQUEO DE CITOCINESIS <ul><li>Citocalasina B (impide citocinesis celular) </li></ul><ul><li>Efecto genotoxico (clastogénico y aneugénico) </li></ul>
  12. 12. <ul><li>EN UNA DE LAS LINEAS CELULARES EN QUE LA ARGENTATINA B TIENE ACTIVIDAD CITOTOXICA, PROBABLEMENTE NO PRESENTE ACTIVIDAD GENOTÓXICA. </li></ul>HIPÓTESIS
  13. 13. <ul><li>Evaluar el efecto genotóxico de la Argentatina B mediante el ensayo de CBMN en células MCF-7 (cáncer de mama). </li></ul><ul><li>Establecer las dosis subtóxicas a probar en el ensayo de </li></ul><ul><li>micronúcleos con bloqueo de citoquinesis </li></ul><ul><li>Determinar los efectos citostáticos de la Argentatina B mediante </li></ul><ul><li>la determinación del Índice de División Nuclear en células MCF-7 </li></ul><ul><li>Determinar los efectos genotóxicos de la Argentatina B mediante </li></ul><ul><li>la evaluación de Micronúcleos en células MCF-7. </li></ul>GENERAL ESPECÍFICOS
  14. 14. Argentatina B Viabilidad (FDA) CBMN 5, 15 y 25 uM MCF-7
  15. 15. 37ºC 5% de CO 2 24 horas 3x10 5 células Células MCF-7 3 REPETICIONES 54 PLACAS 200 CÉLULAS ESQUEMA VIABILIDAD (FDA) 37ºC 5% de CO 2 24 horas Argentatina B DMSO 5 uM 15 uM 25 uM DOX DOXORUCINA DMSO 0.05 uM 0.1uM 0.075 uM PBS RPMI FDA PBS EtBr Células + VIVAS MUERTAS
  16. 16. 37ºC 5% de CO 2 24 horas 3x10 5 células Células MCF-7 3 REPETICIONES 54 PLACAS ESQUEMA CBMN Fijador de Carnoi 3:1 Tinción 37ºC 5% de CO 2 24 horas ARGENTATINA B DMSO 5 uM 15 uM 25 uM DOX DOX DMSO 0.05 uM 0.1uM 0.075 uM
  17. 17. CITOSTACIDAD GENOTOXICIDAD 200 células mono, bi y tetra IDN = {CMN + 2 (CBN) + 3 (CPN)} / N 54 PLACAS ESQUEMA CBMN Frecuencia de MN en 1000 CBN
  18. 18. Gráfica No. 1 Porcentaje de viabilidad (FDA) de MCF-7 tratados con Doxorubicina. Cada barra representa la media ± EE de tres experimentos independientes que se realizaron por duplicado. P < 0.001 ACTIVIDAD CITOTÓXICA DE LA DOX
  19. 19. Gráfica No. 2 Índice de división nuclear calculado para la Doxorubicina. Cada barra representa la media ± EE de tres experimentos independientes por duplicado. P<0,05.
  20. 20. Gráfica No. 3 Efecto de la Doxorubicina en relación al control negativo (DMSO 0.1%) sobre la frecuencia de CBN con MN. Las barras representan la media ± EE de tres experimentos independientes por duplicado.P >0,001
  21. 21. Gráfico No. 4 Porcentaje de viabilidad de MCF-7 tratadas con Argentatina B y DOX (0.1uM). Cada barra representa la media de tres experimentos independientes con su respectivo error estándar cada uno por duplicado. p < 0,001 ACTIVIDAD CITOTÓXICA DE LA ARGENTATINA B
  22. 22. Gráfica No. 5 Índice de división nuclear calculado para las células MCF-7 tratados con Argentatina B. La doxorubicina se empleó como control (DOX) a 1 μM. Cada barra representa la media ± EE de tres experimentos independientes por duplicado. P<0.001 Parra, 2005 . <ul><li>Fig. 3. Nuclear división index, calculated for argentatin B tested at 5, 15 and 25 uM and mitomycin C at 1 uM. (P<0.001) </li></ul>
  23. 23. Gráfica No. 6 Efecto de la Argentatina B (5, 15, y 25 uM) y DOX (0.1 Um) sobre la frecuencia de CBN con MN. Las barras representan la media ± EE de tres experimentos independientes por duplicado. P > 0,001 Parra, 2005 .
  24. 24. <ul><li>Las concentraciones probadas de Argentatina B no afectan la </li></ul><ul><li>viabilidad de las células MCF-7, puesto que presentó una </li></ul><ul><li>supervivencia mayor al 70%. </li></ul><ul><li>La Argentatina B no tiene actividad citostática en la línea celular </li></ul><ul><li>MCF-7 evaluado mediante el IDN. </li></ul><ul><li>La Argentatina B no produce daño genotóxico in vitro a </li></ul><ul><li>concentraciones de 5, 15 y 25 uM en células MCF-7 evaluado </li></ul><ul><li>mediante MN. </li></ul>
  25. 25. GRACIAS…

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