Cómo identificar una proteína y su respectiva función

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Cómo identificar una proteína y su respectiva función

  1. 1. ¿CÓMO IDENTIFICAR UNA PROTEÍNA Y SU RESPECTIVA FUNCIÓN? Las proteínas cumplen un papel fundamental en los seres vivos y esnecesario realizar un reconocimiento de su estructura y función. Por medio delanálisis de resultados experimentales de laboratorio tales como ladesnaturalización de la proteína que se produce al suministrar calor o alreaccionar con ácidos o álcalis, sufre un cambio en su composición del cual sepuede obtener información fundamental sobre la función que ésta cumple en elorganismo. Las enzimas son moléculas de naturaleza proteica que catalizanreacciones químicas en el organismo y que también pierden su función al sufrirdesnaturalización como es el caso de la catalasa (una importante enzima quecataliza la descomposición de H2O2) que pierde su función fundamental alsuministrarle calor ;Además se encupor otro lado se halla las moléculas de ADNque se encuentran en el núcleo de la célula , específicamente dentro de lamembrana nuclear , en el cual se encuentra unido a proteínas , formandoproteínas conjugadas ; para identificar el ADN se debe homogenizar el tejido yromper las células para separar el núcleo , romper este para liberar el ADN ,separarlo de las proteínas y precipitarlo para extraerlo de la solucion .El objetivo principal de éste estudio es realizar un reconocimiento experimental dealgunas moléculas muy importantes en el organismo de los seres vivos, talescomo las proteínas, las enzimas y el ADN, para sustentar estos resultados se usanlos métodos que se presentan a continuación.Coagulación de una proteína1. Colocar en un tubo de ensayo una pequeña cantidad de clara de huevo.2. Añadir 5 gotas de ácido acético y calentar el tubo a la llama del mechero.Reacciones coloreadas1.Reacción xantoproteica- Poner en un tubo de ensayo 3 centímetros cúbicos de clara de huevo.- Añadir 1 centímetro cúbico de ácido nítrico concentrado.- Calentar al baño maría a 100°C-Enfriar en agua fría
  2. 2. -Añadir gota a gota una disolución de hidróxido de sodio al 40%1.1-Poner en el tubo de ensayo de 3 centímetros cúbicos de clara de huevo-Añadir 2 centímetros cúbicos de solución de hidróxido de sodio al 20%- Añadir 10 gotas de solución de acetato de plomo al 5%- calentar el tubo hasta ebullición2. Reacción de Biuret- Tomar un tubo de ensayo y poner 3 centímetro cúbicos de albúmina de huevo- Añadir 20 centímetro cúbicos de solución de hidróxido de sodio al 20%-Agregar 5 gotas de solución de sulfato cúprico diluida al 1%.ENZIMAS1. Reconocimiento de la catalasa- Colocar en un tubo de ensayo unos trocitos de hígado.- Añadir 5 mililitros de agua oxigenada.2. Desnaturalización de la catalasa.-Colocar en un tubo de ensayo unos trocitos de hígado.- Anadir agua y hervir durante unos minutos.- Retirar agua sobrante y añadir agua oxigenada.3. Hidrólisis de almidón-poner en una gradilla cuatro tubos de ensayo, numerados del 1 al 4.- Añadir a cada tubo 5 mililitros de una solución diluida de almidón.- A los tubos 3 y 4 añadir una pequeña cantidad de saliva.- En el tubo 1 se realiza la reacción de fehling- En el tubo 2 se realiza la reacción de Lugol.- A los tubos 3 y 4 se llevan al baño maría evitando que el agua realice ebullición.
  3. 3. - En el tubo 3 se realiza la reacción de fehling y en el tubo 4 la prueba de Lugol.Reacción de fehling-Tomar 3 centímetros cúbicos de la muestra que se quiere analizar.- Añadir 1 centímetro cúbico de fehling A y 1 centímetro cúbico de fehling B.-Calentar el tubo a baño maría o en un mechero de laboratorio.Reacción de Lugol-Poner en un tubo de ensayo 3 centímetros cúbicos del glúcido a investigar.- Añadir unas gotas de Lugol.EXTRACCIÓN DE ADN-Triturar medio hígado de pollo en un mortero. Añadir arena al mortero y continuarcon la trituración.- Añadir 50 centímetros cúbicos de agua y remover hasta hacer un puré.-Filtrar varias veces sobre una tela.- Medir con una probeta el volumen del filtrado- Agregar al filtrado un volumen igual de cloruro de sodio 2M.- Añadir 1 centímetro cúbico de dodecil sulfato de sodio (SDS)- Añadir mediante una pipeta 50 centímetros cúbicos de alcohol 96°.- Introducir una varilla de vidrio e ir removiendo en la misma dirección. En la prueba de coagulación de la proteína se obtiene una solución coloide, en la cual la proteína forma coágulos y se hace insoluble en el agua. Esto se debe a que la proteína del huevo sufre una desnaturalización producida por el ácido acético y el calor que se suministro, de este modo los aminoácidos que la componen se desordenan generando un cambio de su estructura.
  4. 4. En la reacción xantoproteica se forma un compuestoaromático nitrado de un color amarillo y cambia aanaranjado oscuro al agregar hidróxido de sodio. Esto sedebe a que los aminoácidos de la proteína presente en laclara de huevo son portadores de grupos bencénicosespecialmente en presencia de tirosina. En esta práctica se obtuvo un precipitado de color negruzco. El color oscuro se debe a que se formó sulfuro de plomo tomando como base principal la composición azufrada de los aminoácidos que componen la proteína de la albúmina huevo.En la reacción de Biuret se forma una solución decolorvioleta producida por el contacto de la proteína de la clarade huevo con el hidróxido de sodio que a la vez hacecontacto con el sulfato de cobre.Se observa un intenso burbujeo debido al desprendimientode oxígeno que produce la acción de la enzima catalasasobre el agua oxigenadaEn este caso no se observa ninguna reacción entre el aguaoxigenada y el hígado porque el calor que se le suministrohizo que la enzima catalasa contenida en los tejidos sedesnaturalizara y por eso no pudo catalizar ladescomposición de agua oxigenada.
  5. 5. En la primera práctica la proteína sufre una desnaturalización debida a la accióndel ácido acético y el calor los cuales desordenan la estructura terciaria ycuaternaria y generan una solución coloide en la cual aparecen los coágulos delas proteínas. En la reacción xantoproteica se realiza una sustitución electrolíticaaromática de los residuos de la tirosina de las proteínas por el ácido nítrico dandoun compuesto coloreado de color amarillo de un pH muy ácido.

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