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小胞体モデル異常タンパク質Dproに対するO型糖鎖付加の試験管内再構成
小胞体品質管理                リボソーム      mRNA              サイトゾル                                  プロテアソーム       Sec61p           ...
小胞体品質管理                             小胞体関連分解                リボソーム         (ERAD)      mRNA              サイトゾル              ...
O型糖鎖付加サイトゾルSec61p        Pmt小胞体内腔              M:マンノース    異常タンパク質
O型糖鎖付加サイトゾル                                in vivo   in vitroSec61p        Pmt                        DGpaF     ○         ...
O型糖鎖付加サイトゾル                                in vivo   in vitroSec61p        Pmt                        DGpaF     ○         ...
in vitro ERAD / O型糖鎖付加 assay系pDGpaFミクロソーム    Reference McCracken, A.A., and Bordsky, J.L. (1996). J. Cell Biol. 132, 291-2...
in vitro ERAD / O型糖鎖付加 assay系pDGpaFミクロソーム                pDGpaF                      Sec61p                               ...
in vitro ERAD / O型糖鎖付加 assay系pDGpaFミクロソーム                pDGpaF                      Sec61p                               ...
in vitro ERAD / O型糖鎖付加 assay系pDGpaFミクロソーム                pDGpaF                      Sec61p                               ...
pDproのin vitro翻訳反応             pDGpaF             pDpro  泳動量      2 ml   4 ml   2 ml       4 ml46.0 kDa30.0 kDa20.5 kDa
pDproの翻訳終了後の膜透過反応 トリプシン                  -                         +                     +Triton X-100            -       ...
pDproの翻訳終了後の膜透過反応 トリプシン                  -                         +                     +Triton X-100            -       ...
pDproの翻訳と共役した膜透過反応 トリプシン                   -                           +                    +Triton X-100             -   ...
Dproのin vitro ERAD / O型糖鎖付加 assay                        野生株由来のミクロソーム トリプシン                  -              +            +...
Dproのin vitro ERAD / O型糖鎖付加 assay                        野生株由来のミクロソーム トリプシン                  -              +            +...
Dproのin vitro ERAD / O型糖鎖付加 assay                          Dpmt2株由来のミクロソーム トリプシン                    -              +      ...
本研究のまとめ1. in vitroにおいて、Dproを翻訳と共役した   膜透過反応によってミクロソームに   取り込ませることに成功した。2. in vitroアッセイにおいても、Dproは   Pmt2p依存でO型糖鎖付加された可能性が ...
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小胞体モデル異常タンパク質△proに対するO型糖鎖付加の試験管内再構成(卒業研究)

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自分の大学時代の卒業研究の発表スライドです。
ファイルの整理をしていて偶然見つけたので懐かしくなってアップしました。
実験生物学の研究です。

実験結果の図表ばかりで説明があまりなく、いかにも実験系という発表です。


発表時の台本はこちら
http://www.slideshare.net/teapipin/proo-16714706

卒業論文はこちら
http://www.slideshare.net/teapipin/proo-16720850

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小胞体モデル異常タンパク質△proに対するO型糖鎖付加の試験管内再構成(卒業研究)

  1. 1. 小胞体モデル異常タンパク質Dproに対するO型糖鎖付加の試験管内再構成
  2. 2. 小胞体品質管理 リボソーム mRNA サイトゾル プロテアソーム Sec61p Sec61p タンパク質小胞体 修復 異常タンパク質 正常タンパク質 ゴルジ体以降へ
  3. 3. 小胞体品質管理 小胞体関連分解 リボソーム (ERAD) mRNA サイトゾル プロテアソーム Sec61p Sec61p タンパク質小胞体 修復 異常タンパク質 正常タンパク質 ゴルジ体以降へ
  4. 4. O型糖鎖付加サイトゾルSec61p Pmt小胞体内腔 M:マンノース 異常タンパク質
  5. 5. O型糖鎖付加サイトゾル in vivo in vitroSec61p Pmt DGpaF ○ ○ Dpro ○小胞体内腔 M:マンノース 異常タンパク質
  6. 6. O型糖鎖付加サイトゾル in vivo in vitroSec61p Pmt DGpaF ○ ○ Dpro ○小胞体内腔 M:マンノース 本研究の目的 モデル異常タンパク質 Dproを基質とした ERAD/O型糖鎖付加の 異常タンパク質 in vitro再構成
  7. 7. in vitro ERAD / O型糖鎖付加 assay系pDGpaFミクロソーム Reference McCracken, A.A., and Bordsky, J.L. (1996). J. Cell Biol. 132, 291-298.
  8. 8. in vitro ERAD / O型糖鎖付加 assay系pDGpaFミクロソーム pDGpaF Sec61p ミクロソーム DGpaF Reference McCracken, A.A., and Bordsky, J.L. (1996). J. Cell Biol. 132, 291-298.
  9. 9. in vitro ERAD / O型糖鎖付加 assay系pDGpaFミクロソーム pDGpaF Sec61p ミクロソーム DGpaF サイトゾル プロテアソーム + サイトゾル画分 + ATP再生系 Reference McCracken, A.A., and Bordsky, J.L. (1996). J. Cell Biol. 132, 291-298.
  10. 10. in vitro ERAD / O型糖鎖付加 assay系pDGpaFミクロソーム pDGpaF Sec61p ミクロソーム DGpaF ERAD O型糖鎖付加 サイトゾル プロテアソーム Pmt + サイトゾル画分 30℃ MMM + ATP再生系 インキュベート M:マンノース Reference McCracken, A.A., and Bordsky, J.L. (1996). J. Cell Biol. 132, 291-298.
  11. 11. pDproのin vitro翻訳反応 pDGpaF pDpro 泳動量 2 ml 4 ml 2 ml 4 ml46.0 kDa30.0 kDa20.5 kDa
  12. 12. pDproの翻訳終了後の膜透過反応 トリプシン - + +Triton X-100 - - + min 0 10 30 60 0 10 30 60 0 10 30 60 pDpro リボソーム mRNA pDpro pDpro Sec61p
  13. 13. pDproの翻訳終了後の膜透過反応 トリプシン - + +Triton X-100 - - + min 0 10 30 60 0 10 30 60 0 10 30 60 pDpro リボソーム mRNA pDpro pDpro Sec61p
  14. 14. pDproの翻訳と共役した膜透過反応 トリプシン - + +Triton X-100 - - + min 0 10 30 60 0 10 30 60 0 10 30 60 pDpro Dpro リボソーム mRNA Sec61p Dpro
  15. 15. Dproのin vitro ERAD / O型糖鎖付加 assay 野生株由来のミクロソーム トリプシン - + +Triton X-100 - - +chase (min) 0 10 30 60 0 10 30 60 0 10 30 60 pDpro Dpro 120 100 Dpro Dproの存在量 80 スメアバンド 60 (%) 40 20 0 10 20 30 40 50 60 min
  16. 16. Dproのin vitro ERAD / O型糖鎖付加 assay 野生株由来のミクロソーム トリプシン - + +Triton X-100 - - +chase (min) 0 10 30 60 0 10 30 60 0 10 30 60 pDpro Dpro 120 合計量 100 Dpro Dproの存在量 80 スメアバンド 60 (%) 40 20 0 10 20 30 40 50 60 min
  17. 17. Dproのin vitro ERAD / O型糖鎖付加 assay Dpmt2株由来のミクロソーム トリプシン - + +Triton X-100 - - +chase (min) 0 10 30 60 0 10 30 60 0 10 30 60 pDpro Dpro 120 100 Dproの存在量 80 Dpro 60 (%) 40 20 0 10 20 30 40 50 60 min
  18. 18. 本研究のまとめ1. in vitroにおいて、Dproを翻訳と共役した 膜透過反応によってミクロソームに 取り込ませることに成功した。2. in vitroアッセイにおいても、Dproは Pmt2p依存でO型糖鎖付加された可能性が 考えられた。3. DproがERADでの分解が起こらなかったのは in vitroでは、DGpaFの場合でもERADでの 分解効率が低く、O型糖鎖付加の方が進行 しやすいことと一致する。

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