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Tinción de Gram.

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Tinción de Gram.

  1. 1. https://www.facebook.com/tato762 ESCUELA POLITÉCNICA DEL EJÉRCITO CARRERA INGENIERÍA AGROPECUARIA SANTO DOMINGO Asignatura: Microbiología Estudiante: Renato Andrade Cevallos Fecha: Miércoles 22 de mayo del 2013 Práctica No.8
  2. 2. 1. TEMA Tinción de Gram. 2. OBJETIVO GENERAL Conocer las técnicas de preparación y observación microscópica de bacterias. 3. OBJETIVOS ESPECÍFICOS: Aprender a desarrollar de manera adecuada la tinción de Gram Observar y diferenciar bacterias Gram positivas y Gram negativas. Estudiar las características morfológicas de diferentes géneros de bacterias Determinar la reacción Gram negativa y positiva de bacterias. 4. REVISIÓN DE LITERATURA La tinción de Gram fue creada por Hans Christian Gram a fines del siglo XIX. La Tinción de Gram (o método de Gram) es un método para diferenciar especies bacterianas en dos grandes grupos (Gram-positivas y Gram-negativas). El nombre proviene de su inventor, Hans Christian Gram. Tinción de Gram diferencia las bacterias por las propiedades químicas y físicas de sus paredes celulares mediante la detección de peptidoglicano, que está presente en una capa espesa en las bacterias Gram positivas. Los resultados Gram positivos se denotan por un color púrpura / azul, mientras que las gram negativas son rosa / rojo. La tinción de Gram es casi siempre el primer paso en la identificación de un organismo bacteriano. Mientras que la tinción de Gram es una herramienta de diagnóstico valiosa, tanto en entornos de investigación clínica, no todas las bacterias pueden ser clasificadas definitivamente por esta técnica. Esto da lugar a grupos de Gram-variables y Gram- indeterminado. (Forbes, 2009) La Tinción de Gram es una técnica de laboratorio bacteriológico se utiliza para diferenciar especies bacterianas en dos grandes grupos (Gram-positivas y Gram- negativas) sobre la base de las propiedades físicas de sus paredes celulares. La Tinción de Gram no se utiliza para clasificar las arqueas, anteriormente arqueobacterias, ya que estos microorganismos producen muy diversas respuestas que no siguen sus grupos filogenéticos. (Cavallini, 2005 ) La tinción de Gram no es una herramienta infalible para el diagnóstico, identificación, o filogenia, y es de uso muy limitado en la microbiología ambiental. Se ha sustituido en gran medida por las técnicas moleculares, incluso en el laboratorio de microbiología médica. Algunos organismos Gram son variables (que significa, que pueden manchar ya sea negativo o positivo); algunos organismos no son susceptibles a la mancha ya sea utilizado por la técnica de Gram. En un moderno laboratorio del medio ambiente o la microbiología molecular, la mayoría identificación se realiza utilizando secuencias genéticas y otras técnicas moleculares, que son mucho más específico e informativo que la tinción diferencial. (Cavallini, 2005 )
  3. 3. Las bacterias Gram-positivas tienen generalmente una sola membrana rodeada por una gruesa capa de peptidoglicano. Esta regla es seguida de dos filos-Firmicutes (a excepción de las clases de Mollicutes y Negativicutes) y Actinobacteria. Por el contrario, los miembros de la Chloroflexi (bacterias verdes no del azufre) son monodermas pero poseen una capa delgada de peptidoglicano y pueden manchar negativo, positivo o indeterminado. Los miembros del grupo Deinococcus-Thermus, tiñen positivamente. (Forbes, 2009) Las bacterias Gram-negativas poseen generalmente una fina capa de peptidoglicano entre dos membranas (didermas). La mayoría son phyla bacteriana Gram-negativas, incluyendo las cianobacterias, espiroquetas y bacterias verdes del azufre, y la mayoría de Proteobacteria. (EUNED, 2004) 5. EQUIPOS: Microscopio estereoscopio Microscopio compuesto Estufa de incubación Estufa de esterilización Cámara de flujo laminar Autoclave Cocineta eléctrica 6. MATERIALES: Cultivos bacterianos Placas porta objeto Laminas cubre objeto Vasos de precipitados Kit de disección Mechero de alcohol Platos petri conteniendo medio de cultivo Sacabocado Asas de inoculación Goteros 7. REACTIVOS E INSUMOS: Alcohol antiséptico Agua destilada Cristal violeta Alcohol cetona Yoduro de potasio Safranina
  4. 4. Aceite de inmersión 8. PROCEDIMIENTO: Tinción simple Se limpió bien las placas portaobjeto, eliminando la grasa y pelusas. Las grasas serán eliminadas con xilol y las pelusas haciendo una o dos pasadas de la placa por sobre la columna de calor del mechero, - Frotis. Consiste en extender o repartir la suspensión de bacterias sobre la placa portaobjeto, una vez que ha sido depositada la gota de agua-bacteria, éste extensión se hará con la ayuda de un asa o placa portaobjeto limpia, lo que permitirá realizar una mejor observación - Fijación. Fije las bacterias a la placa haciendo pasar tres veces el portaobjeto en la llama del mechero de alcohol a una altura prudencial, para no deformar las agrupaciones bacterianas que pudieran existir. - Tinción. emplee un solo colorante como el azul de metileno, fuscina, rojo congo, tiñe la placa completamente y deje actuar el colorante por un minuto. - Retire el colorante, enjuague y luego séquela a la columna del mechero de alcohol o por simple exposición al aire con movimientos horizontales - Agregue una gota de aceite de inmersión sobre el frotis y observe las bacterias al microscopio, utilizando el lente húmedo o de inmersión. Tinción Compuesta - Se colocó el colorante A (violeta de genciana) por espacio de medio minuto., elimine el exceso. - Se agregó el colorante B (solución de yodo) por un minuto. Elimine el exceso con leves sacudimientos de la placa o con la pisceta. - Añada la solución C (safranina) por 30 segundos. - Se lavó la placa con agua corriente y luego séquela a la columna del mechero de alcohol, o por simple exposición al aires con movimientos horizontales. - Se agregó una gota de aceite de inmersión sobre el frotis y observe las bacterias al microscopio, utilizando el lente húmedo o de inmersión. 9. RESULTADOS 10. CONCLUSIONES 11. CUESTIONARIO. ¿Qué es una tinción diferencial? Defina cual es el rol de los colorantes utilizados en la Tinción compuesta Es en la que se usa mas de un colorante, son tinciones usadas para diferenciar estructuras bacterianas, como Schaefer-fulton para endosporas, como la tinción de Gram para gram - y gram+.
  5. 5. 12. BIBLIOGRAFÍA Cavallini, E. R. (2005 ). Bacteriología General: Principios Y Prácticas de Laboratorio. Costa Rica: Universidad de Costa Rica. EUNED. (2004). Introducción a la microbiología. Reverte. Forbes, B. A. (2009). Diagnostico Microbiologico. Médica Panamericana.

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