Successfully reported this slideshow.
We use your LinkedIn profile and activity data to personalize ads and to show you more relevant ads. You can change your ad preferences anytime.

«ΕΜΜΕΝΟΥΣΕΣ ΙΟΓΕΝΕΙΣ ΛΟΙΜΩΞΕΙΣ» ΑΠΛΟΣ ΕΡΠΗΣ ΤΥΠΟΥ 1 ΚΑΙ 2 (HHV-1 ΚΑΙ HHV-2)

355 views

Published on

ΑΠΛΟΣ ΕΡΠΗΣ ΤΥΠΟΥ 1 ΚΑΙ 2 (HHV-1 ΚΑΙ HHV-2)

Published in: Health & Medicine
  • Be the first to comment

  • Be the first to like this

«ΕΜΜΕΝΟΥΣΕΣ ΙΟΓΕΝΕΙΣ ΛΟΙΜΩΞΕΙΣ» ΑΠΛΟΣ ΕΡΠΗΣ ΤΥΠΟΥ 1 ΚΑΙ 2 (HHV-1 ΚΑΙ HHV-2)

  1. 1. ΒΑΣΙΛΙΚΗ Χ. ΠΙΤΥΡΙΓΚΑ Ιατρός Βιοπαθολόγος- Επίκουρη Καθηγήτρια Ιατρικής Σχολής Ε.Κ.Π.Α. Εργαστήριο Μικροβιολογίας «ΕΜΜΕΝΟΥΣΕΣ ΙΟΓΕΝΕΙΣ ΛΟΙΜΩΞΕΙΣ» ΑΠΛΟΣ ΕΡΠΗΣ ΤΥΠΟΥ 1 ΚΑΙ 2 (HHV-1 ΚΑΙ HHV-2) 3/14/2017 ΗΜΕΡΕΣ ΚΛΙΝΙΚΗΣ ΜΙΚΡΟΒΙΟΛΟΓΙΑΣ 2011
  2. 2. ΕΜΜΕΝΟΥΣΕΣ ΙΟΓΕΝΕΙΣ ΛΟΙΜΩΞΕΙΣ: ΟΡΙΣΜΟΣ 3/14/2017  Λοιμώξεις όπου ο ιός μετά την αρχική μόλυνση παραμένει ζωντανός σε εξειδικευμένα κύτταρα του ξενιστή.  Με σκοπό:  Κύτταρο- ξενιστής  Μόλυνση δια βίου Αλλά..  Αποφυγή θανάτου ή εκτεταμένης βλάβης ΕΠΙΒΙΩΣΗ ΜΕΤΑΔΟΣΗ
  3. 3. 3 ΤΥΠΟΙ ΕΜΜΕΝΟΥΣΑΣ ΑΛΛΗΛΕΠΙΔΡΑΣΗΣ ΙΟΥ-ΞΕΝΙΣΤΗ 3/14/2017 Χρόνια λοίμωξη (chronic infection)  Διαρκής -αδιάκοπη παρουσία της μολυσματικής μορφής του ιού στον ξενιστή  Χρόνια κλινική συμπτωματολογία Βραδεία λοίμωξη (Slow infection)  Παρατεταμένη περίοδος επώασης –προοδευτικά εξελισσόμενη λοίμωξη (απουσία οξείας λοίμωξης) Λανθάνουσα λοίμωξη (latent infection)  Παρουσία μη μολυσματικής μορφής του ιού  Έλλειψη εμφανούς λοίμωξης μεταξύ αναζωπυρώσεων
  4. 4. ΦΥΣΙΚΗ ΠΟΡΕΙΑ ΤΗΣ ΟΞΕΙΑΣ ΚΑΙ ΕΜΜΕΝΟΥΣΑΣ ΙΙΚΗΣ ΛΟΙΜΩΞΗΣ 3/14/2017 Συνεχής γραμμή: διασπορά του μολυσματικού ιού Διακεκομένη γραμμή: ιός όχι εύκολα ανιχνεύσιμος + επεισόδιο υποτροπής
  5. 5. IN VITRO ΜΟΝΤΕΛΑ ΕΜΜΕΝΟΥΣΑΣ ΛΟΙΜΩΞΗΣ 3/14/2017 Τρία είδη εμμένουσας λοίμωξης σε κυτταροκαλλιέργειες  Χρόνια εστιακή (chronic focal)  Χρόνια διάχυτη (chronic diffuse)  Λανθάνουσα (latent)
  6. 6. 3/14/2017 Χρόνια εστιακή μόλυνση  Μικρό ποσοστό μολυσμένων κυττάρων  Θάνατος κύτταρων  Αντισώματα -χαμηλά επίπεδα τον ιό-διατήρηση μόλυνσης Χρόνια διάχυτη μόλυνση  Μόλυνση όλων των κυττάρων  Επιβίωση κυττάρων  Συνεχής πολλ/σμός και απελευθέρωση ιού  Αδυναμία ελέγχου μόλυνσης από αντισώματα Λανθάνουσα μόλυνση  Διαβίβαση του ιικού γονιδιώματος στα θυγατρικά κύτταρα
  7. 7. 3/14/2017
  8. 8. 3/14/2017 Διαφορετικοί μηχανισμοί εγκατάστασης στον ξενιστή για κάθε είδος ιού ΚΟΙΝΟΙ ΜΗΧΑΝΙΣΜΟΙ ΠΑΘΟΓΕΝΕΙΑΣ (i) Επιλογή κατάλληλων κυττάρων ξενιστή για διαμονή μακράς διάρκειας (ii) Τροποποίηση της έκφρασης των ιικών γονιδίων, (iii) Ιική ανατροπή των κυτταρικών οδών απόπτωσης του ξενιστή (iv) Διαφυγή από το ανοσιακό σύστημα του ξενιστή.
  9. 9. ΕΡΠΗΤΟΙΟΙ ΑΠΛΟΣ ΕΡΠΗΤΑΣ 1 ΚΑΙ 2 (HHV-1, HHV-2) 3/14/2017
  10. 10. ΑΝΤΙΓΟΝΙΚΟΙ ΤΥΠΟΙ 3/14/2017 1. Herpes Simplex Virus I (HSV I) 2. Herpes Simplex Virus II (HSV II) 3. Varicella-Zoster Virus (VZV) 4. Epstein-Barr Virus (EBV HHV 4) 5. Cytomegalovirus (CMV HHV 5) 6. Human Herpes Virus 6 (HHV 6) 7. Human Herpes Virus 7 (HHV 7) 8. Human Herpes Virus 8 (HHV 8)
  11. 11. ΒΙΟΛΟΓΙΚΗ ΤΑΞΙΝΟΜΗΣΗ: ΥΠΟΟΙΚΟΓΕΝΕΙΕΣ 3/14/2017 (α) Alphaherpesvirinae Ταχύς πολ/σμός, νευροτρόποι Γένος Simplex Virus : HSV - I, HSV - II Γένος Variccelovirus : HVZ (β) Betaherpesvirinae βραδύς πολ/σμός, περιορισμένο εύρος ξενιστών Γένος Cytomegalovirus : CMV Γένος Roseolavirus: HHV- 6A-Β, HHV-7 (γ) Gammaherpesvirinae Λεμφοτρόποι Γένος Lymphocryptovirus : EBV Γένος Rhadinovirus : HHV- 8
  12. 12. ΤΑΞΙΝΟΜΗΣΗ- ΧΑΡΑΚΤΗΡΙΣΤΙΚΑ  Group: Group I (dsDNA)  Οικογένεια: Herpesviridae  Υποοικογένεια: Alphaherpesvirinae  Γένος: Simplexvirus Δύο διακριτοί τύποι:  Herpes simplex virus 1 (HSV-1)  Herpes simplex virus 2 (HSV-2)  Βραχύς κύκλος αναπαραγωγής  Κύτταρα-στόχος: επιθηλιακά κύτταρα 3/14/2017
  13. 13. ΜΟΡΦΟΛΟΓΙΑ-ΔΟΜΗ (ΜΟΛΥΣΜΑΤΙΚΟ ΙΙΚΟ ΣΩΜΑΤΙΟ-VIRION) 3/14/2017 Δομικά συστατικά: 4 κύρια  Κεντρικός πυρήνας (core) ηλεκτρονιακά πυκνό DNA τυλιγμένο σε πρωτεϊνικό άξονα (ως πηνίο)  Νουκλεοκαψίδιο πρωτεϊνικό εικοσαεδρικό (capsid)(162 καψομεριδια από 5 διαφορετικές πρωτεΐνες )  Ο φάκελος (envelope)  Δίστοιβη λιπιδική μεμβράνη του ξενιστή  ~12 ιικές γλυκοπρωτεΐνες (δίκην ακίδων).  Περικάλυμμα (tegument):  Άμορφο πρωτεϊνικό στρώμα *Smiley et al. 2004, Spear et al. 2004
  14. 14. ΙΙΚΟΣ ΦΑΚΕΛΟΣ 3/14/2017 Τρεις σημαντικές γλυκοπρωτεΐνες για την παραγωγή μολυσματικών σωματιδίων  gB  gD  gH Σύντηξη ιού με κυτταρική μεμβράνη  Ορισμένες διαθέτουν κοινούς αντιγονικούς καθοριστές (gB gD) για HSV-1 και 2 Γλυκοπρωτεΐνη gG Ειδικοί αντιγονικοί καθοριστές Glycoprotein "spikes" on the HSV surface. Glycoprotein B (gB) is clearly visualised in clusters of spikes about 10 nm in length. Dr Linda M Stannard, University of Cape Town, South Africa, 1995
  15. 15. ΔΟΜΗ  Τουλάχιστον 74 γονίδια(ή open-reading frames, ORFs),*  Έλεγχος αναπαραγωγής και μολυσματικότητας ιού  Πρωτεΐνες καψιδίου, περικαλλύματος, φακέλου  2 μοναδικές περιοχές: μακρές(UL) (56 γονίδια) και βραχείες (US) (12 γονίδια) μοναδικές αλληλουχίες  Επαναλαμβανόμενες ανεστραμμένες μικρές αλληλουχίες *McGeoch DJ, Rixon FJ, Davison AJ (2006). Virus Res. 117 (1): 90–104. Mettenleiter TC, Klupp BG, Granzow H (2006). Curr. Opin. Microbiol. 9 (4): 423–9 3/14/2017 Schematic representation of the structure of the HSV genome
  16. 16. ΕΚΦΡΑΣΗ ΓΟΝΙΔΙΩΝ 3/14/2017 ΤΡΕΙΣ ΤΥΠΟΙ ΓΟΝΙΔΙΩΝ α- Immediate early γονίδια, κωδικοποιούν ρυθμιστικές πρωτεΐνες για την έκφραση των early (οξεία φάση της λοίμωξης) β- Πρώιμα γονίδια, (Early gene) (4-8 ωρ.) σύνθεση ενζύμων για την DNA αντιγραφή και γ –Όψιμα γονίδια (late genes)  Παραγωγή δομικών στοιχείων (γλυκοπρωτεϊνών , φακέλου)
  17. 17. ΠΑΘΟΓΕΝΕΣΗ 3/14/2017 Τρεις βιολογικές ιδιότητες που σχετίζονται άμεσα με την μολυσματικότητα του:  Νευροτρόπος δράση  Ικανότητα επιβίωσης σε λανθάνουσα κατάσταση  Δυνατότητα επανενεργοποίησης
  18. 18. ΦΥΣΙΚΗ ΠΟΡΕΙΑ ΤΟΥ ΙΟΥ 3/14/2017  Εισβολή και πολλαπλασιασμός στο επιθήλιο (Κυτταρολυτική φάση λοίμωξης)  Ξενιστής- Απάντηση ανοσολογική/ίαση  Είσοδος στα τελικά άκρα των νευρώνων  Εγκατάσταση λανθάνουσας λοίμωξης -νευρικά γάγγλια Τα νευρικά κύτταρα είναι μακρόβια υψηλής διαφοροποίησης: άριστο περιβάλλον για διαμονή
  19. 19. ΚΛΙΝΙΚΕΣ ΦΑΣΕΙΣ ΛΟΙΜΩΞΗΣ 3/14/2017  Πρωτολοίμωξη (primary infection)  Λανθάνουσα λοίμωξη (latency)  Επανενεργοποίηση -αναζωπύρωση (reactivation)  Ασυμπτωματική απέκκριση (viral shedding)  Αρχική λοίμωξη (initial infection)
  20. 20. HSV-1 HSV-2 3/14/2017  Κυτταρολυτική δράση: επιθήλιο περιοχών του προσώπου  Λανθάνουσα λοίμωξη: Νωτιαία γάγγλια του τρίδυμου νεύρου  Κυτταρολυτική δράση: Γεννητικά όργανα  Λανθάνουσα κατάσταση: γάγγλια της οσφυιοιερής μοίρα
  21. 21. ΠΡΩΤΟΛΟΙΜΩΞΗ (PRIMARY INFECTION) 3/14/2017  Πρώτη επαφή του ιού με τον ξενιστή,  Συμπτωματική ή όχι  Εντοπισμός σε οποιαδήποτε ανατομική θέση (οφθαλμοί, έσω- έξω περιοχή στόματος, γεν. όργανα) Σχηματισμός:  Φυσαλίδες  Εξελκώσεις  Εσχάρες Σε ανοσοκατεσταλμένους -ιαιμία Gupta R, Warren T, Wald A. "Genital herpes". Lancet, 370, 2127, 2007.
  22. 22. ΕΠΑΝΕΝΕΡΓΟΠΟΙΗΣΗ (REACTIVATION) 3/14/2017  Επιστροφή του ιού από τα νευρικά γάγγλια στο επιθήλιο 2 ΜΟΡΦΕΣ  αποβολή ιικών σωματιδίων (viral shedding )  Συμπτωματική υποτροπή λοίμωξης-αναζωπύρωση (recurrent infection) Ασυμπτωματική
  23. 23. ΑΝΑΖΩΠΥΡΩΣΗ-ΕΚΛΥΤΙΚΟΙ ΠΑΡΑΓΟΝΤΕΣ 3/14/2017  Stress,  Πυρετός,  Ορμονικές μεταβολές,  Εμμηνόρροια,  Υπεριώδης ακτινοβολία,  Θερμότητα,  Φυσικό τραύμα στο νευρώνα κλπ. GAGLIONIC TRIGGERS - SKIN TRIGGERS
  24. 24. ΕΠΑΝΕΝΕΡΓΟΠΟΙΗΣΗ (REACTIVATION) 3/14/2017  Ηπιότερη κλ. εικόνα  Συντομότερο χρονικό διάστημα αποκατάστασης των βλαβών  Όσο πιο σοβαρή είναι η πρωτολοίμωξη  πιθανότητα επανεμφάνισης  Μέγεθος,  Αριθμός  Στάδιο των βλαβών
  25. 25. ΑΣΥΜΠΤΩΜΑΤΙΚΗ ΑΠΕΚΚΡΙΣΗ (VIRAL SHEDDING) 3/14/2017  Απουσία συμπτωμάτων-βλαβών Ωστόσο  Ανίχνευση-παρουσία ιού (στόμα, γεννητικά όργανα κλπ.) ΙΔΙΑΙΤΕΡΗ ΚΛΙΝΙΚΗ ΣΗΜΑΣΙΑ  Μετάδοση σε υγιείς-Συντήρηση της δεξαμενής της λοίμωξης  Συχνός τρόπος κάθετης μετάδοσης
  26. 26. 3/14/2017 Ασυμπτωματικές HSV-2 οροθετικές γυναίκες -- Λήψη δειγμάτων κολπικών επιχρισμάτων για 2 μήνες  28% (+) PCR  8% (+) καλλιέργειες  2 γυναίκες (+) PCR για >75% των ημερών! 10% των γυναικών απέβαλαν τον ιό για μεγάλο χρ. διάστημα Frequent genital herpes simplex virus 2 shedding in immunocompetent women. Effect of acyclovir treatment, Wald A, et al. 1997 Mar 1;99(5):1092-727
  27. 27. «ΑΡΧΙΚΗ ΛΟΙΜΩΞΗ» (INITIAL INFECTION) 3/14/2017  Σε ήδη HSV οροθετικό άτομο μόλυνση από διαφορετικό τύπο του ιού (π.χ., HSV-2 ή HSV-1 αντίστοιχα) συνήθως σε διαφορετική ανατομική θέση
  28. 28. ΕΠΙΔΗΜΙΟΛΟΓΙΑ 3/14/2017 ΕΠΙΠΟΛΑΣΜΟΣ Συχνότερο αίτιο ιογενούς λοίμωξης μετά από τον ιό τη γρίπης και των αναπνευστικών ιών του κρυολογήματος. Παγκοσμίως  13-40% παγκοσμίως HSV-2 οροθετικοί  56-85% οροθετικοί για HSV-1  >1/3 του πληθυσμού: αναζωπυρώσεις HSV  Ένα ή > επεισόδια γεν. έρπητα κάθε χρόνο στο 60-90% των μολυσμένων  > 40% των HSV-2 μολυσμένων >=6 επεισόδια κάθε χρόνο.
  29. 29. ΕΠΙΔΗΜΙΟΛΟΓΙΚΑ ΣΤΟΙΧΕΙΑ 3/14/2017 Φυλή Οι Αφρικανοαμερικανοί μεγαλύτερα ποσοστά μόλυνσης από HSV-2  HSV-2 αντισώματα 20% ενήλικες καυκάσιας φυλής  HSV-2 αντισώματα 65% Αφρικανοαμερικανοί. Φύλο  Άνδρες κατά 20% πιο πιθανό να εμφανίσουν αναζωπύρωση HSV-2 από τις γυναίκες. Ηλικία  Υψηλότερη επίπτωση HSV-1 σε παιδιά 6 μην- 3 χρ.  HSV-2: 18-25 χρ.
  30. 30. ΤΡΟΠΟΙ ΜΕΤΑΔΟΣΗΣ 3/14/2017 Χρόνος επώασης: 1-26 ημ. Μέσος χρόνος 4 ημ.  Στενή επαφή με εμφανείς βλάβες (συμπτωματική λοίμωξη)  Ασυμπτωματική επανενεργοποίηση (viral shedding)  Αυτοενοφθαλμισμός  Εγκυμοσύνη
  31. 31. 3/14/2017
  32. 32. 3/14/2017 Cutaneous lesions caused by HSV in a neonate. Genital herpes lesions of the vulva Hemorrhagic necrosis of the temporal lobe due to HSV encephalitis
  33. 33. ΕΓΚΕΦΑΛΙΤΙΔΑ-ΜΗΝΙΓΓΙΤΙΔΑ HSV 3/14/2017  Η πιο συχνή αιτία θανάτου από εγκεφαλίτιδα στις ΗΠΑ  Ίδια συχνότητα άνδρες-γυναίκες  Ίδια κατανομή ανά ηλικίες  Ήπια/σοβαρές εκδηλώσεις  Πυρετός-διαταραχές συμπεριφοράς, σύγχυση  4–8% ασθενών με πρωτοπαθή HSV-2 λοίμωξη γεν. οργάνων- μηνιγγίτιδα (Mollaret's syndrome)  Πιο συχνή στις γυναίκες
  34. 34. ΕΡΓΑΣΤΗΡΙΑΚΗ ΔΙΑΓΝΩΣΗ 3/14/2017
  35. 35. 3/14/2017 ΑΠΟΦΥΓΗ ΜΕΤΆΔΟΣΗΣ
  36. 36. ΔΙΑΓΝΩΣΗ 3/14/2017  Κλινική εικόνα  Ιατρικό ιστορικό  Παράγοντες κινδύνου  Εργαστηριακές μέθοδοι  Άμεση ανίχνευση-Διερεύνηση δερματικής βλάβης:  Αναζήτηση ιών, αντιγόνων ή DNA του ιού  Ορολογική διάγνωση:  Προσδιορισμός αντισωμάτων
  37. 37. ΑΜΕΣΗ ΑΝΙΧΝΕΥΣΗ- ΑΠΟΜΟΝΩΣΗ 3/14/2017  Μικροσκόπηση (Φωτεινό πεδίο, ηλεκτρ. μικροσκόπιο)  Κυτταροκαλλιέργεια  Άμεσος ανοσοφθορισμός  Ανοσοενζυμική μέθοδος (ΕΙΑ)  Αλυσιδωτή αντίδραση πολυμεράσης (PCR) – συμβατική ή πραγματικού χρόνου (Real time PCR)
  38. 38. ΜΙΚΡΟΣΚΟΠΗΣΗ 3/14/2017  Παρασκευάσματα από ιστικές βλάβες βαμμένα με Wright-Giemsa, αιματοξυλινη και ηωσίνη ή Παπανικολάου (Tzanck smears)  Ταχύτερη κλινική διάγνωση ΠΕΡΙΟΡΙΣΜΟΙ  Χαμηλή ευαισθησία (>110 ιικά σωμάτια/ml δείγματος),  Αδυναμία διαχωρισμού HSV-1 και HSV-2 ή άλλων ερπητοιών. Petric M et al. Clinical Virology Manual, 3rd edn. Washington: ASM Press, 54, 2000.
  39. 39. ΜΕΘΟΔΟΣ ΦΘΟΡΙΖΟΝΤΩΝ ΑΝΤΙΣΩΜΑΤΩΝ ΑΜΕΣΟΣ ΑΝΟΣΟΦΘΟΡΙΣΜΟΣ (DFA)  Μικροσκόπιο ανοσοφθορισμού  Σε μολυσμένους ιστούς ή κυτταροκαλλιέργειες  Μονοκλωνικά αντισώματα έναντι immediate- early ή late γονίδια  Υψηλή ειδικότητα και ευαισθησία (~καλλιέργεια σε κλινικά δείγματα υψηλής ποιότητας )  Ταχεία και φθηνή  Διαφοροποιεί τους τύπους 1 ή 2 HSV Μειονεκτήματα  Πρώιμες βλάβες  Εξειδικευμένο προσωπικό  Μη προτυποποιημένη Wiedbrauk DL, Johnston SLG. Manual of Clinical Virology. New York: Raven Press,109, 1993.
  40. 40. ΑΠΟΜΟΝΩΣΗ ΙΟΥ: ΚΥΤΤΑΡΟΚΑΛΛΙΕΡΓΕΙΑ  Παραδοσιακή μέθοδο αναφοράς ("gold" standard)  MRC-5, Vero, HEp-2, A549, WI-38  Κυτταροπαθογόνος δράση (cytopathic effect) πχ. αποστρογγυλοποιημένα διευρυμένα κύτταρα  Ασθενείς με ενεργείς βλάβες  100% ειδικότητα • Lafferty WE, et al. N Engl J Med; 316, 1444, 1987.
  41. 41. ΜΕΙΟΝΕΚΤΗΜΑΤΑ 3/14/2017  Χρονοβόρα (μέχρι 7 ημ.)  Ζωντανός ιός  Ιδιαίτερη προσοχή!  Λήψη δειγμάτων και  Μεταφορά  Ευαισθησία αναλόγως το στάδιο των βλαβών και  <75% στις πρωτολοιμώξεις,  50% στις υποτροπές  Ιδιαίτερα χαμηλή στις περιπτώσεις ασυμπτωματικής απέκκρισης
  42. 42. ΑΝΟΣΟΕΝΖΥΜΙΚΕΣ ΜΕΘΟΔΟΙ 3/14/2017 Ανίχνευση αντιγόνων  Υψηλή ειδικότητα (περίπου 98%)  Πλεονεκτούν σε απώλεια της μολυσματικότητας των ιών  Ευαισθησία : o Νωπές εσχάρες μόλις ~80% o Αποξηραμένες <60%.
  43. 43. 3/14/2017
  44. 44. ΑΝΟΣΟΕΝΖΥΜΙΚΕΣ ΜΕΘΟΔΟΙ. Ανίχνευση αντισωμάτων ΠΛΕΟΝΕΚΤΗΜΑΤΑ ΜΕΙΟΝΕΚΤΗΜΑΤΑ 3/14/2017  Ταχύτητα  Μικρό κόστος  Ορολογικά τεστ νέας γενιάς, διαχωρισμός HSV-1 -2: γλυκοπρωτεΐνη G (gG) IgG Ενδείξεις  Αδυναμία για ειδικές ιολογικές μεθόδους  Αρνητικά αποτελέσματα με άλλες μεθόδους  Ασυμπτωματικοί φορείς, άτυπη συμπτωματολογία Όχι ιδιαίτερης κλινικής σημασίας  Καθυστέρηση στην παραγωγή αντισωμάτων,  IgM: Διασταυρούμενες αντιδράσεις HSV-1 -2 και με άλλους ερπητοιούς  IgM: πρωτολοίμωξη- επεισόδιο υποτροπής
  45. 45. ΜΟΡΙΑΚΕΣ ΔΙΑΓΝΩΣΤΙΚΕΣ ΜΕΘΟΔΟΙ 3/14/2017 Η πιο ευαίσθητη μέθοδος ανίχνευσης Κλινικά δείγματα  Φυσαλίδες  Έλκη  Αποξηραμένες εσχάρες  Μολυσμένες εκκρίσεις (ασυμπτωματικοί)
  46. 46. ΜΟΡΙΑΚΗ ΑΝΙΧΝΕΥΣΗ-PCR 3/14/2017  Στην εγκεφαλίτιδα-μηνιγγίτιδα από HSV PCR στο ΕΝΥ • Άμεση μη παρεμβατική διαγνωστική προσέγγιση • Ευαισθησία >95% (= βιοψία εγκεφάλου) • Ειδικότητα 100% ΜΕΘΟΔΟΣ ΕΚΛΟΓΗΣ
  47. 47. ΩΣΤΟΣΟ… 3/14/2017 Αρνητικά αποτελέσματα PCR για HSV στο ΕΝΥ δεν αποκλείει τη λοίμωξη  Πολύ πρώιμος ή πολύ καθυστερημένος έλεγχος  Πολύ μικρή ποσότητα δείγματος (0.5-1.0 ml CSF)  Συνιστάται επανέλεγχος με 2ο δείγμα ΕΝΥ Έλεγχος στην έναρξη των συμπτωμάτων !!
  48. 48. REAL-TIME PCR 3/14/2017  Ταχύτερη από τις συμβατικές PCR  Μεγαλύτερη ευαισθησία από συμβατικές PCR – (αρνητικές σε <1000 αντίγραφα)  Δεν επηρεάζεται από κακό χειρισμό δειγμάτων (ψύξη, ξεπάγωμα, παραμονή>48h)  Ταυτόχρονος έλεγχος για περισσότερους τύπους ιών (multiplex PCR)  Typing: σύγκριση στελεχών από διαφορετικά άτομα ή περιοχές του σώματος (HSV-1 γεν. έρπης πιο σπάνια αναζωπυρώσεις από τον HSV- 2/διαφορετικός τρόπος μετάδοσης)
  49. 49. Ποια η συμβολή της real-time PCR στην κλινική πράξη? 3/14/2017 ΜΕΤΡΗΣΗ ΙΙΚΟΥ ΦΟΡΤΙΟΥ Σε σοβαρές εκδηλώσεις (εγκεφαλίτιδα, νεογνικός έρπης)  Παρακολούθηση του θεραπευτικού αποτελέσματος  Ασθενείς με παρατεταμένο φορτίο- χειρότερη πρόγνωση από αυτούς με PCR (-)
  50. 50. 3/14/2017 Σε ασυμπτωματική διασπορά του ιού  το ιικό φορτίο Παράγοντας κινδύνου για: Μετάδοση Εξέλιξη σε συμπτωματική νόσο ΩΣΤΟΣΟ…  Αριθμός ιικού φορτίου-έκβαση της κλινικής πορείας- Συσχέτιση? Διχογνωμία  Το ιικό φορτίο ίδιο σε ασυμπτωματικούς και συμπτωματικούς
  51. 51. ΠΕΡΙΟΡΙΣΜΟΙ 3/14/2017 Αποτελέσματα  Ψευδώς αρνητικά -παρουσία αναστολέων στο δείγμα (πχ. αίμα στο ΕΝΥ)  Ψευδώς θετικά -μόλυνση των δειγμάτων με τον ιό ή τα amplicons  Μη προτυποποιημένες τεχνικές  Όχι επικυρωμένες (validation) για ορισμένα δείγματα
  52. 52. ΕΡΩΤΗΣΕΙΣ 3/14/2017
  53. 53. Ποια είναι τα χαρακτηριστικά της λανθάνουσας ιογενούς λοίμωξης; 3/14/2017 1. Διαρκής παρουσία μολυσματικής μορφής του ιού στον ξενιστή 2. Χρόνια κλινική συμπτωματολογία 3. Παρατεταμένη περίοδος επώασης 4. Έλλειψη εμφανούς λοίμωξης μεταξύ αναζωπυρώσεων
  54. 54. Ο HSV μπορεί να ανιχνευθεί με PCR σε όλες τις παρακάτω περιπτώσεις λοίμωξης ΕΚΤΟΣ? 3/14/2017 1. Ασθενείς με σοβαρές κλινικές εκδηλώσεις (εγκεφαλίδα, μηνιγγίτιδα) 2. Άτυπες κλινικές εικόνες 3. Επεισόδια αναζωπύρωσης 4. Ασυμπτωματικοί φορείς του ιού 5. Ανιχνεύεται σε όλες τις παραπάνω περιπτώσεις
  55. 55. Η ορολογική διάγνωση είναι χρήσιμη σε όλες τις παρακάτω περιπτώσεις ΕΚΤΟΣ: 3/14/2017 1. Διάγνωση υποτροπής HSV λοίμωξης 2. Επιδημιολογική επιτήρηση του HSV 3. Αδιάγνωστοι φορείς 4. Ασυμπτωματικοί φορείς
  56. 56. 3/14/2017

×